CenB: ZSO10 AZ en peptiden (deel 2) Flashcards
functionele grenswaarden buffer
0,1 < Cb/Cz < 10
Doel ionenwisselaarschromatografie
Samenstelling van een AZ-mgensel bepalen
mobiele fase ionenwisselaarschromatografie
- eluens
- de pH van deze stof zal toenemen in functie van de tijd
stationaire fase ionenwisselaarschromatografie
- cellulose/agarose bolletjes waaraan geladen groepen gehecht zijn
- kationwisselaar: negatief geladen groepen
- anionwisselaar: positief geladen groepen
Basis werking van ionenwisselaarschromatografie
Elektrostatische interactie met ladingen van de stationaire fase vs. interacties met het eluens.
Bij een kationwisselaar zijn de meest basische AZ
Het moeilijkst te deprotoneren, ze worden het langst vastgehouden door de stationaire fase.
Bij een kationwisselaar zijn de meest zure AZ
Het makkelijkst te deprotoneren, ze worden het snelst geëlueerd
Werking papier-elektroforese
- AZmengsel aanbrengen op vaste drager (papier)
- Papier is gedrenkt in een gebufferde, geleidende oplossing
- drager wordt in contact gebracht met 2 elektrodes
- potentiaalverschil wordt aangelegd
- AZ migreren naar anode/kathode
Werking SDS-PAGE
- Scheiding van proteïnen op basis van hun grootte
- negatief geladen AZ migrerern naar de anode
- een zeef (PAGE) scheidt de AZ op basis van hun grootte
Vorming van een peptidebinding
condensatiereactie tussen de alfa-carboxylgroep van het ene AZ en de alfa-aminogroep van het andere AZ ter vorming van een secundair amide
typisch aan condensatiereactie
H2O komt vrij
Kant N-terminus
Links
Kant C-terminus
Rechts
oligopeptiden
minder dan 50 AZ
Polypeptiden
meer dan 50 AZ
Werking AZanalyser
- Monster in chromatografiekolom brengen
- AZ binden aan de stationaire lading afh. van hun lading
- AZ worden stapsgewijs geëlueerd
- Uitgescheiden AZ reageren met ninhydrine
- Gekleurde oplossing passeert de spectrofotometer die de absorptie bij een bepaalde golflengte meet
- omzetting naar een chromatogram
