Virologie: marqueurs viraux Flashcards
quelles sont les maladies virales asymptomatiques chez le sujet immunodéprimé (diagnostic virologique important)?
rougeole (sans boutons), oreillons (grossissement glandes parotides chez l’enfant), rubéole
à quel niveau le diagnostic virologique est intéressant?
intérêt médical et économique = dès diagnostic d’une infection virale on arrête les antibiotiques, on réduit analyses complémentaires et la durée d’hospitalisation
qu’est-ce qu’un syndrome mononucléosique?
un sujet qui a des grands lymphocytes hyperbasophiles dans le sang circulant
le diagnostic virologique permet de connaître quelles informations à propos du statut du patient vis-à-vis du virus?
- si infection guérie (sujet immun au virus)
- si infection chronique provoquée par un virus
- donneurs de sang / organes porteurs de virus
- patient source après accident exposition au sang/sexuelle
un fœtus ou nouveau-né est-il exposé à un risque d’infection virale pdt la grossesse ou naissance?
oui
qu’est-ce que le diagnostic direct des marqueurs viraux?
recherche directe des virus ou constituants dans les prélèvements pathologiques
qu’est-ce que le diagnostic indirect des marqueurs viraux?
recherche des témoins = mise en évidence d’une réponse immunitaire de l’hôte
comment identifier une infection virale par immunité innée (peu fréquent)? = diagnostic indirect
production d’interférons alpha
comment identifier une infection virale par immunité acquise? = diagnostic indirect
recherche d’Ac dans sérum ou d’autres liquides biologiques
quelles sont les 3 formes de réaliser un diagnostic direct?
- au microscope électronique (peu fréquent car long)
- en isolant virus par culture cellulaire
- méthode ELISA = recherche des constituants structuraux libérés dans circulation ou dans cellules / tissus
pour quel diagnostic la qualité des prélèvements est très importante? quand faire le prélèvement?
diagnostic direct
le + tôt possible dès début signes et avant tout traitement
où faire le prélèvement pour une infection respiratoire? (diagnostic chez les immunodéprimés d’infection respiratoire)
écouvillonnage fosses nasales, aspiration rhino-pharyngée (enfant) et LBA (Laryngo-Balnéo-Auscultation) pour prélever virus dans poumons
comment diagnostiquer une infection neurologique?
prélever LCR par ponction lombaire ou cervicale
où faire le prélèvement pour une infection oculaire?
écouvillon conjonctival, prélèvement d’humeur aqueuse
pour une infection digestive où chercher les virus?
dans les selles, dans biopsies intestinales
quel prélèvement réaliser pour diagnostic virologique si pas de signes / lésions extérieures?
sanguin (sur tube à héparine = recherche à partir du plasma pour culture / EDTA = recherche acides nucléiques viraux)
on peut rechercher directement les virus et acides nucléiques grâce à quel test pour virus à ADN? et à ARN?
ADN: PCR
ARN: RT-PCR
dans quels cas on utilise la méthode moléculaire du diagnostic direct?
- pour des virus non ou difficilement cultivables
- pour prélèvement qui contiennent très peu de virus (LCR, humeur aqueuse)
dans quelles conditions le prélèvement doit-il être transmis au laboratoire?
réfrigéré, très vite (<3h pour virus ARN; sang prélevé sur EDTA)
quels sont les 2 moyens de détecter des Ag solubles?
immunochromatographie et méthode ELISA
on recherche les protéines de quels virus (non cultivables) par immunochromatographie?
rotavirus et adénovirus dans les selles = provoquent gastro-entérites
dans les prélèvements respiratoires par méthode ELISA on peut détecter les protéines de quels virus?
protéines du VRS, du virus de la grippe
dans les prélèvements de la circulation par méthode ELISA on peut détecter les Ag de quels virus?
Ag P24 pour VIH et Ag Hbs pour hépatite B
comment détecter les Ag par immunofluorescence directe?
Ac marqué d’une molécule fluorescente va directement aller sur l’Ag
comment détecter les Ag par immunofluorescence indirecte? = + sensible (on peut voir grâce aux rayons UV)
on a un 1er Ac qui se fixe sur l’Ag puis un 2nd (marqué) qui va se mettre sur 1er Ac
par immunofluorescence directe ou indirecte, on a retrouvé les protéines de quel virus dans le cytoplasme des cellules respiratoires? dans un prélèvement génital on cherche les protéines de quel virus? dans les polynucléaires sanguins on cherche les protéines de quel virus?
VRS
HSV (Herpès Simplex Virus)
CMV
quel est le principe de la RT PCR pour les virus ARN?
ARN retranscrit en ADN dans un tube par enzyme transcriptase inverse (produite par rétrovirus) > effectuer un PCR
quelles sont les étapes de la PCR?
1) on dénature 2 brins d’ADN par chaleur pour cibler une séquence précise par des amorces
2) hybridation de l’amorce avec brin à une Tº inférieure
3) élongation des séquences à une Tº intermédiaire
4) amplification + introduction intercalant
5) migration amplifias dans gel d’agarose + intercalation visible
6) test positif ou négatif
la PCR emboîtée (pour virus ADN/ARN dont la quantité d’acides nucléiques prélevée est trop faible) permet la détection de quel virus dans quel liquide? pour diagnostiquer quoi?
détection d’ADN du virus herpès (HSV1) dans LCR
diagnostic méningite
=> on réalise 2 tours de PCR mais 2e sur les amplifias
comment se fait le PCR en temps réel?
grâce à un marqueur fluorescent sur les amplifias (+ sensible)
quelles sont les indications pour un sérodiagnostic (diagnostic indirect)?
- virus dont culture très lente/ difficile/ impossible
- infection “décapitée”: limité réplication virus (antiviraux)
- infection dont l’étiologie exige méthode exploration invasive
- un diagnostic rétrospectif d’une infection ancienne ou récente (AES)
- évaluer guérison infection en cours
- mettre en évidence synthèse Ac pour un vaccin
l’infection au VIH est chronique dans quels cas? et au VHC?
VIH = 100%
VHC = 70-80%
qu’est=ce que la séroconversion? et la séro-élévation? (significatives)
séroconversion: séropositivité ou séronégativité face à un virus (VIH)
séro-élévation: augmentation (minimum 4) du titre en Ac sériques à 2-3 semaines d’intervalle
comment sont prélevés les virus dans le sérodiagnostic? les échantillons sont transportés à quelle Tº?
sanguin: tube sans anticoagulant, LCR, salive…
Tº ambiante
pour diagnostic indirect, lors de la recherche d’une immunité, que peut-on détecter lors d’1 seul prélèvement? pour quels virus par ex? dans quel contexte par ex?
détection d’IgG lors d’un seul prélèvement (si présents: sujet immunisé)
varicelle, rubéole, oreillons, rougeole, poliovirus
AES
la détection d’IgM spécifiques permet quels diagnostics?
- diagnostic + précoce ou d’infection congénitale
- détection dans le LCR de l’infection du SNC par virus
qu’est-ce que l’avidité mature des IgG? on peut la déterminer grâce à quel test?
au départ: IgG ont une faible avidité mais avec la maturation ils deviennent bcp + avides pour les Ag
=> test de décollement des IgG des Ag par 2 tests ELISA:
- ELISA 1: permet de vérifier présence d’IgG
- ELISA 2: décoller IgG > peu IgG = faible avidité / bcp IgG = forte avidité
le test de décollement des IgG est utile pour diagnostic de quel virus chez femme enceinte?
cytomégalovirus (CMV):
- si infection ancienne (pré conception): pas de risques pour fœtus
- si infection récente: risque infection pour fœtus
le western blot est une méthode de détection des…?
Ac
