Praktikum IV

Question 1

Wie werden Bakterien kompetent gemacht?

Answer 1

Magnesium und Calcium zugeben -> Macht Membran leaky

Alternative: Elektroporation oder DMSO Zugabe

Question 2

Wie kann man auf die Aufnahme des Plasmids testen?

Answer 2

Plasmid Nachweis über Restriktionsverdau

RNA Nachweis über RT-PCR

Protein Nachweis über SDS-PAGE oder Funktioneller Nachweis über PM2-Assay

Question 3

Wie kann man Plasmid-DNA isolieren?

Answer 3

Bakterien mit Tris und EDTA, sowie SDS versetzen

-> Membran wird löchrig und DNA tritt aus

Zugabe Kaliumacetat/Eisessig

-> Man erhält DNA-Konglomerat

Zentrifugieren und dann mit EtOH die DNA fällen (Weil Plasmide ihre Hydrathülle verlieren)

Question 4

Wie steht es um den ATP Verbrauch von Restriktionsenzymen:

Wenn innerhalb der Erkennungssequenz geschnitten wird

Wenn außerhalb der Erkennungssequenz geschnitten wird

Answer 4

Innerhalb Erkennungssequenz geschnitten: Brauchen kein ATP

Außerhalb Erkennungssequenz geschnitten: Brauchen ATP

Question 5

Welcher Stoff wird heute zur sichtbar Machung von DNA im Agarelektrophorese Gel eingesetzt?

Warum kein Ethidiumbromid?

Answer 5

SYBR Green

Kein Ethidiumbromid, da mutagen

Question 6

Wofür stehen die folgenden Beobachtungen im Agarosegel:

Statt Banden nur Schmiere

Riesiger heller Fleck am unteren Ende

Answer 6

Statt Banden nur Schmiere: Nukleasen

Riesiger heller Fleck am unteren Ende: RNA

Question 7

Wie schnell wandern die einzelnen Plasmide, abhängig von ihrer Form?

Answer 7

Question 8

Wofür steht IPTG?

Answer 8

Isopropylthiogalaktosid