VL 5 Membranproteine Flashcards
Wie wird ein Transmembranprotein gewonnen?
- Plasmid in Expressionswirt wie E. coli bringen
- Gewünschtes Protein exprimieren
- Zellen lysieren
- Zentrifugieren
- Membranpellet solubilisieren
- Membranprotein über Säule (NiNTA) reinigen
- Reinheit prüfen z.B. über Gelfiltration oder SDS PAGE
Welche milden Detergenzien können für das Solubilisieren von Membranproteinen verwendet werden?
DDM (Dodecyl Maltosid)
TritonX
Was ist eine IMAC?
Immobilized Metal Affinity Chromatography (z.B. Ni NTA)
Was ist das Problem bei der Analyse von Membranprotein Aktivitäten in Mizellen (z.B. DDM Mizellen)?
Sind Mizellen und keine Lipiddoppelschichten!
Kann man die Aktivität eines Membranproteins in seiner natürlichen Lipidumgebung, z.B. im Bakterium bestimmen?
Ja
Kann man die Struktur eines Membranproteins in seiner natürlichen Lipidumgebung, z.B. im Bakterium analysieren?
Nein, dazu muss man Membranen simulieren
Wie nennt man Membranproteine, die in Lipide rekonstituiert wurden?
Proteoliposomen
Welche Funktion haben Nanodiscs?
Ein Membran Scaffold Protein umschließt Lipide und bildet eine Membran aus.
-> Das Protein kann in diese Membran rekonstituiert werden
Von was leiten sich die Nanodiscs ab?
Abgeleitet von Apolipoproteinen
Was ist der Vorteil von Proteoliposomen gegenüber Nanodiscs?
-> Ihren Nutzen betreffend
Proteoliposomen haben zwei Kompartimente
-> Erlauben Funktionsassays (z.B. Transport in Zelle rein oder raus)
Was ist das Problem von Proteoliposomen und Nanodiscs bei der Analyse von Membranproteinen?
Das Membranprotein muss erst aus der nativen Membran heraus gelöst werden und mit Detergenzien stabilisiert werden, bevor es wieder rekonstituiert wird
Wie werden bei Membranproteinen Polymerdiscs verwendet?
-> Vorteile?
Um das Membranprotein und seine nativen Lipide wird eine Polymerdisc gebildet.
-> Das Membranprotein muss nicht durch Detergenzien stabilisiert werden und befindet sich zudem in seiner nativen Lipidumgebung
Wie wird die Kombination aus Polymerdiscs und Membranprotein genannt?
SMALP (Styrene maleic acid lipid particle)
Wer hat das Bänderdiagramm entwickelt?
Jane Richardson
Was repräsentieren im Bänderdiagramm (Richardson/Ribbon Diagramm) die Pfeile?
-> In welche Richtung zeigen sie?
Beta-Stränge
Zeigen von N nach C
