Primärstruktur Flashcards
Welches Protein hat die längste AS Kette?
Titin 34.350 Reste
Wie viele Reste hat eine durchschnittliche AS Kette?
100 bis 1000 Reste
Welche AS kommen am seltensten in Proteinen vor?
Trp, Cys, Met, His
Welche AS sind für Absorption verantwortlich und bei welcher Wellenlänge wird absorbiert?
Tryptophan, Tyrosin, (Phenylalanin)
200-320 nm
Bei welcher Wellenlänge werden Proteine idealerweise nachgewiesen?
280 nm
Wie verändert sich das Absorptiosmaximum von Coomasie Brilliant Blue durch Bindung an Protein?
Von 465 nm zu 595 nm
Was ist das “Einsalzen”?
Die Löslichkeit eines Proteins erhöht sich bei niedriger Ionenkonzentration, sobald Salz hinzugegeben wird.
Grund: Ionen schirmen ionische Ladungen an Proteinen ab und verhindern damit deren Interaktion untereinander.
Was ist das “Aussalzen”?
Die Löslichkeit eines Proteins erniedrigt sich wenn viel Salz hinzugegeben wird.
Grund: Ionen konkurrieren mit Proteinen um Lösungsmittelmoleküle.
Wie kann man das “Aussalzen” zur Reinigung von Proteinen verwenden?
Proteine werden bei unterschiedlichen Salzkonzentrationen ausgefällt
-> Bringe Salzkonzentration knapp unterhalb des Präzipitationspunktes des zu reinigenden Proteins und entferne die ausgefällten Proteine.
Welches Salz wird für das Aussalzen meist verwendet?
Ammoniumsulfat
Wie sollte der pH Wert einer Lösung beim Aussalzen eingestellt sein und warum?
pH-Wert sollte nahe am isoelektrischen Punkt des gewünschten Proteins sein.
Grund: Löslichkeit eines Proteins ohne Nettoladung am geringsten
Welche Matrix wird meistens bei Anionenaustauschern verwendet?
DEAE-Gruppen (Diethylaminoethyl)
Welche Matrix wird meistens bei Kationenaustauschern verwendet?
Carboxymethyl (CM)-Gruppen
Wie wird die Ionenaustauschchromatographie durchgeführt?
- Probe auf Säule und als Laufmittel eine Lösung nehmen, die einen niedrigen Salzgehalt besitzt (pH entsprechend einstellen, dass gut an die Säule gebunden wird)
- Laufmittel verändern, damit eluiert werden kann, d.h. Salzgehalt im Laufmittel erhöhen und pH verändern
Wie funktioniert die hydrophobe Chromatographie?
Bei der hydrophoben Chromatographie wird die Interaktion von hydrophoben Gruppen mit nicht polaren Gruppen auf Proteinen ausgenutzt
Wie verändert sich der hydrophobe Effekt bei Erhöhung der Ionenstärke?
Hydrophober Effekt nimmt mit Ionenstärke zu
Was ist die Ionenstärke?
Maß für die elektrische Feldstärke aufgrund gelöster Ionen
Wie verändert sich der hydrophobe Effekt bei steigenden Detergenzkonzentrationen?
Detergenzien stören hydrophobe Interaktionen
Wie funktioniert die Gelfiltrationschromatographie?
Die stationäre Phase besitzt Gelkügelchen mit kleinen Poren, die kleine Proteine einschließen können.
Das heißt, dass große Proteine die Säule schneller durchqueren können als kleine, da sie nicht in den Poren eingeschlossen werden können und ihr zu durchquerendes Volumen daher kleiner ist.
Welche chromatographische Methode hat die beste Trennleistung?
Affinitätschromatographie
Hier werden nicht die physikochemischen Eigenschaften der Proteine ausgenutzt, sondern die oft einzigartigen biochemischen Eigenschaften (Bsp. His-Tag)
Was passiert beim Westernblotting?
Entspricht einem Immunoblotting
1. Erst eine Polyacrylamid Gelelektrophorese durchführen
2. Dann gewünschtes Protein mit spezifischen Antikörpern nachweisen
