Primärstruktur

Question 1

Welches Protein hat die längste AS Kette?

Answer 1

Titin 34.350 Reste

Question 2

Wie viele Reste hat eine durchschnittliche AS Kette?

Answer 2

100 bis 1000 Reste

Question 3

Welche AS kommen am seltensten in Proteinen vor?

Answer 3

Trp, Cys, Met, His

Question 4

Welche AS sind für Absorption verantwortlich und bei welcher Wellenlänge wird absorbiert?

Answer 4

Tryptophan, Tyrosin, (Phenylalanin)
200-320 nm

Question 5

Bei welcher Wellenlänge werden Proteine idealerweise nachgewiesen?

Answer 5

280 nm

Question 6

Wie verändert sich das Absorptiosmaximum von Coomasie Brilliant Blue durch Bindung an Protein?

Answer 6

Von 465 nm zu 595 nm

Question 7

Was ist das “Einsalzen”?

Answer 7

Die Löslichkeit eines Proteins erhöht sich bei niedriger Ionenkonzentration, sobald Salz hinzugegeben wird.
Grund: Ionen schirmen ionische Ladungen an Proteinen ab und verhindern damit deren Interaktion untereinander.

Question 8

Was ist das “Aussalzen”?

Answer 8

Die Löslichkeit eines Proteins erniedrigt sich wenn viel Salz hinzugegeben wird.
Grund: Ionen konkurrieren mit Proteinen um Lösungsmittelmoleküle.

Question 9

Wie kann man das “Aussalzen” zur Reinigung von Proteinen verwenden?

Answer 9

Proteine werden bei unterschiedlichen Salzkonzentrationen ausgefällt
-> Bringe Salzkonzentration knapp unterhalb des Präzipitationspunktes des zu reinigenden Proteins und entferne die ausgefällten Proteine.

Question 10

Welches Salz wird für das Aussalzen meist verwendet?

Answer 10

Ammoniumsulfat

Question 11

Wie sollte der pH Wert einer Lösung beim Aussalzen eingestellt sein und warum?

Answer 11

pH-Wert sollte nahe am isoelektrischen Punkt des gewünschten Proteins sein.
Grund: Löslichkeit eines Proteins ohne Nettoladung am geringsten

Question 12

Welche Matrix wird meistens bei Anionenaustauschern verwendet?

Answer 12

DEAE-Gruppen (Diethylaminoethyl)

Question 13

Welche Matrix wird meistens bei Kationenaustauschern verwendet?

Answer 13

Carboxymethyl (CM)-Gruppen

Question 14

Wie wird die Ionenaustauschchromatographie durchgeführt?

Answer 14

1. Probe auf Säule und als Laufmittel eine Lösung nehmen, die einen niedrigen Salzgehalt besitzt (pH entsprechend einstellen, dass gut an die Säule gebunden wird)
2. Laufmittel verändern, damit eluiert werden kann, d.h. Salzgehalt im Laufmittel erhöhen und pH verändern

Question 15

Wie funktioniert die hydrophobe Chromatographie?

Answer 15

Bei der hydrophoben Chromatographie wird die Interaktion von hydrophoben Gruppen mit nicht polaren Gruppen auf Proteinen ausgenutzt

Question 16

Wie verändert sich der hydrophobe Effekt bei Erhöhung der Ionenstärke?

Answer 16

Hydrophober Effekt nimmt mit Ionenstärke zu

Question 17

Was ist die Ionenstärke?

Answer 17

Maß für die elektrische Feldstärke aufgrund gelöster Ionen

Question 18

Wie verändert sich der hydrophobe Effekt bei steigenden Detergenzkonzentrationen?

Answer 18

Detergenzien stören hydrophobe Interaktionen

Question 19

Wie funktioniert die Gelfiltrationschromatographie?

Answer 19

Die stationäre Phase besitzt Gelkügelchen mit kleinen Poren, die kleine Proteine einschließen können.
Das heißt, dass große Proteine die Säule schneller durchqueren können als kleine, da sie nicht in den Poren eingeschlossen werden können und ihr zu durchquerendes Volumen daher kleiner ist.

Question 20

Welche chromatographische Methode hat die beste Trennleistung?

Answer 20

Affinitätschromatographie

Hier werden nicht die physikochemischen Eigenschaften der Proteine ausgenutzt, sondern die oft einzigartigen biochemischen Eigenschaften (Bsp. His-Tag)

Question 21

Was passiert beim Westernblotting?

Answer 21

Entspricht einem Immunoblotting
1. Erst eine Polyacrylamid Gelelektrophorese durchführen
2. Dann gewünschtes Protein mit spezifischen Antikörpern nachweisen