VL 2 Gimpl: Transkription in Prokaryoten und Eukaryoten II Flashcards
Transkription in Eukaryoten
Wie wird die Bindung von GTFs an den Promotor vermittelt?
Die Bindung wird durch TBP-associated Factors (TAFs) vermittelt, die einen “Mediator-Komplex” bilden.
The TBP-associated factors (TAF) are proteins that associate with the TATA-binding protein in transcription initiation.
Transkription in Eukaryoten
Wie wird bei Promotern ohne TATA-BOX die Transkription eingeleitet?
mit mindestens 6 Proteine (general Transcriptionsfactors (GTFs))
Transkription Eukaryoten
Wie wird PIC gebildet?
- Bindung des TATA-bindenden Proteins (TBP) an die TATA-Box eines Promotors.
- Mehrere andere GTFs binden nacheinander.
- Danach die RNA-Polymerase II.
- Und die verbleibenden GTFs.
Transkription Eukaryoten
Was passiert in der Elongationsphase mit der RNA-Polymerase?
- RNA-Polymerase ändert ihre Konformation durch eine Phosphorylierung ihrer C-terminalen Domäne (CTD).
- Einige GTFs distanzieren sich von der transkribierenden Polymerase.
- Elongatorkomplex bindet.
- RNA Prozessierung bei Eukaryoten.
Transkription Eukaryoten
Upstream DNA-Sequenzen, die sogenannten cis-regulatorischen Elemente, spielen eine entscheidende Rolle bei der Regulierung der Transkription. Diese regulatorischen Proteine gelten als Transkriptionsfaktoren.
Welche 6 cis-regulatorischen Elemente gibt es?
- Promoter
- Response Element (RE)
- Enhancer
- Silencer
- Insulator
- Locus control region (LCR)
Transkription Eukaryoten
Mit welchen Proteinen interagieren Enhancer?
- Enhancer benötigen zur Funktion immer einen Promoter, sind allerdings unabhängig von dessen Orientierung und den Abstand.
- Aktivatoren binden an Enhancer und beschleunigen so die Transkriptionsrate.
Reporter-Gen-Assays können zur Analyse von DNA-Elementen wie Enhancer genutzt werden. Sie nutzen zum Beispiel die Luceferin-Luciferase-Reaktion.
Wie ist ein Reporter-Gen-Assay aufgebaut?
- Fusion von Enhancer-DNA von Pax6 vor ein Reporter-Gen (β-Galactosidase, GFP, Luciferase)
- Transfektion des Konstrukts in Zelle/Embryo
- Transkription des Reporter-Gens → Nachweis
Transkription in Eukaryoten
Was sind GTFs?
General Transcription Factors sind kleine konstitutive ubiquitäre nukleare Proteine (zB. TFIIA,TFIIB,TFIIC,…), die sequentiell an den Promotor binden.
Was ist der Preinitiation Complex (PIC)?
Der Multiproteinkomplex, der die Transkription initiiert, wird als Preinitiation Complex (PIC) bezeichnet.
Transkription Eukaryoten
Was ist ein Promotor?
Promoter: DNA-Sequenz, an die RNA Polymerase bindet und Transkription initiiert
Transkription Eukaryoten
Was ist ein Response Element?
Response Element (RE): DNA-Sequenz im Promoter-Bereich, an die ein Transkriptionsfaktor bindet und die Transkription beeinflusst
Transkription Eukaryoten
Was ist ein Enhancer?
Enhancer: Enhancer funktionieren unabhängig von Abstand und Orientierung und stimulieren die Transkription. Sie interagieren mit dem Transkriptions- initiations-Komplex am Promoter.
Transkription Eukaryoten
Was ist ein Silencer?
Silencer sind inhibitorisch wirkende Enhancer. Es gibt aber auch Positions-abhängige Silencer.
Transkription Eukaryoten
Was ist ein Insulator?
Insulatoren unterbrechen den Einflußbereich von benachbarten Genen. Sie isolieren Enhancer- und Silencer-Effekte der Nachbargene.
Transkription Eukaryoten
Was ist die Locus Control Region (LCR)?
Locus control region (LCR) ist bisher nur funktionell definiert.
Sie öffnen kondensiertes Chromatin zur Transkriptionsregulation von Genclustern, vermitteln Gewebsspezifität, beeinflussen das Timing der Replikation und des verwendeten ORI.
Transkription Eukaryoten
Mit welchen Proteinen interagieren Silencer?
Repressoren interagieren mit Silencers und verlangsamen die Transkription.
Transkription Eukaryoten
Was machen Coaktivatoren (Z.B: 80 und110)?
Coaktivatoren sind Adapterproteine, die das Signal der Aktivatoren integrieren.
Transkription Eukaryoten
Welche Rolle spielen basale Transkriptionfaktoren?
Basale Transkriptionsfaktoren positionieren die RNA-Polymerase an der Transcription start site.
