RNA/DNA II

Question 1

Wie viel der DNA des Bakteriums ist methyliert?

Answer 1

Mindestens die Hälfte

Question 2

Welche Restriktionsenzyme werden heute verwendet?

Answer 2

Typ-II-Restriktionsendonucleasen

Question 3

Wie schneiden Typ-II-Restriktionsendonucleasen?

Answer 3

Schneiden die DNA in einer Sequenz von 4 bis 8 Basen

Question 4

Was ist der Unterschied zwischen Typ-II-Restriktionsendonucleasen und Typ I und Typ III?

Answer 4

I und III schneiden DNA nicht direkt innerhalb ihrer Erkennungssequenz

Question 5

Woher kommt der Name des Restiktionsenzyms EcoRI ?

Answer 5

Erster Buchstabe ist Anfangsbuchstabe des Gattungsnamens

Die zwei folgenden kommen von der Art, dann der Serotyp oder die Stammbezeichnung

Wenn das Bakterium mehr als einen Typ an Restriktionsenzym besitzt wird dem Namen eine römische Ziffer angefügt

EcoRI findet man in E. coli-Stamm RY13

Question 6

Was ist typisch für die Erkennungssequenz von Typ-II-Restriktionsendonucleasen?

Answer 6

Palindromische Sequenzen

Question 7

Was ist Agarose?

Answer 7

Kohlenhydratpolymere

Question 8

Nachweisgrenze von Gelelektrophorese von Nucleinsäuresequenz

Answer 8

Nanogramm

Question 9

Was ist die heute geläufigste DNA-Sequenzierungsmethode?

Answer 9

Kettenabbruchmethode nach Sanger

Question 10

Wie funktioniert die Kettenabbruchmethode nach Sanger?

Answer 10

1. DNA Fragment erzeugen welches untersucht werden soll
2. Erhitzen -> Komplementäre Stränge voneinander trennen
3. Primer, Nukleosidtriphosphate (dNTPs) und DNA-Polymerase I zugeben
4. Didesoxynucleosidtriphosphate (ddNTPs) zugeben
   (Sind markiert, jeder Nucleosidtyp in ein eigenes Gefäß -> 4 Stück)
   -> Führen zu Kettenabbruch
5. Einzelne Fragmente mit Gelelektrophorese trennen
   -> Farbmuster auswerten

Question 11

Wie funktioniert das automatisierte Sequenzieren?

Answer 11

Ähnlich wie bei der Kettenabbruchmethode nach Sanger werden Primer, dNTPs, ddNTPs und DNA-Polymerase I eingesetzt.

In diesem Fall sind jedoch die Primer unterschiedlich fluoreszenz markiert. D.h. bei der Zugabe der ddNTPs in den 4 Ansätzen kommt es zum Kettenabbruch.
Auftrennung im Gel erlaubt die Identifizierung unterschiedlich langer Fragmente über den eingesetzten Primer.

Z.B. Grüner Primer, mit ddATPs versetzt gibt die Stellen an, an denen das letzte eingebaute Nucleosid ein Adenin ist, über ein grünes Fluoreszenz Signal.

Question 12

Wo liegt der Fehlerbereich beim automatisierten Sequenzieren?

Answer 12

1%

Question 13

Was ist cystische Fibrose?

-> Symptome

Answer 13

Absonderung dicker Schleim

• > Verstopft Atemwege
• > Gutes Wachstumsmillieu für Bakterien

Question 14

Häufigkeit cystische Fibrose?

Answer 14

1 von 2500

-> Häufigste Erbkrankheit bei Nord- und Mitteleuropäern!

Question 15

Was ist bei cystischer Fibrose defekt?

Answer 15

ATP-regulierter Chloridkanal der Zellmembran defekt

-> Ionenzusammensetzung und Viskosität extrazellulärer Sekrete regulieren

Question 16

Aus was besteht etwa die Hälfte des menschlichen Genoms?

Answer 16

Repetitive Sequenzen verschiedener Art

Question 17

Wie viel % des Genoms wird in RNA transkribiert?

Answer 17

60%

Question 18

Wie viel % des Genoms codiert für Proteine?

Answer 18

1,1 bis 1,4%

Question 19

Wie viele Protein codierende Gene enthält das menschliche Genom?

Answer 19

23000

Question 20

Wie werden die 23k Protein-codierenden Gene bezeichnet?

Answer 20

Offene Leseraster (ORFs: open reading frames)

Question 21

Wie häufig sind Unterschiede im menschlichen Genom von zwei beliebigen Menschen?
-> Was bedeutet dies?

Answer 21

Ein Unterschied je 1250 Nucleotide

-> Zwei beliebige Menschen sind zu über 99,9% genetisch identisch