RNA/DNA III Flashcards
Worauf ist die höhere Komplexität von Wirbeltieren gegenüber Wirbellosen zurückzuführen?
Wirbeltier Proteine sind komplexer und haben mehr Domänen
-> Entstehen häufig durch alternatives Gen-Spleißen
Rekombination (Def.)
Austausch der DNA zwischen Chromosomen
Transposition (Def.)
Transposition von Genen von einem Chromosom auf ein anderes
Wie kann mittels Klonierung ein DNA-Segment erhalten und amplifiziert werden?
- Restriktionsendonuclease schneidet ein DNA-Fragment der gewünschten Größe aus.
- DNA-Fragment in Vektor eingebaut (Ermöglicht eigene Replikation).
- Modifizierter Vektor in Zellen bringen.
- Zellen mit gewünschter DNA identifizieren und selektieren.
-> Viel DNA produzieren
Wie lange können die DNA-Segmente von Plasmidvektoren sein?
10 kb Länge
Für was steht pUC18?
plasmid universal cloning (Kommt aus E. coli)
Wie lange können die DNA-Segmente von Bakteriophage Lambda sein?
20 kb
Vorteil von Phagenvektoren?
Rekombinante DNA in großer Menge produziert und leicht gereinigt
Was wird für das Klonieren in Insektenzellen verwendet?
Retroviren
Für das Klonieren großer DNA-Fragmente werden BACs und YACs verwendet. Wofür stehen diese Abkürzungen?
BAC: Bacterial artificial chromosomes
YAC: Yeast artificial chromosomes
Selektionsmarker (Def.)
Dienen der Auswahl von Zellen, die erfolgreich mit einem Plasmid transformiert wurden.
Wie wird sicher gestellt, dass nur Bakteriophagen vermehrt werden, die die gewünschte Sequenz eingebaut bekommen haben?
Chimäre DNA wird nur in neue Phagenpartikel verpackt, wenn die Länge zwischen 75% und 105% des Wildtypgenoms liegt.
Weicht die Länge der DNA davon ab können sich keine neuen Phagenpartikel bilden.
-> Nur Phagen mit dem richtig eingebauten DNA Abschnitt können sich vermehren
Aus wie vielen bp besteht das menschliche Genom?
3,2 Milliarden
Wie kann man den gewünschten Genabschnitt, der vervielfältigt werden soll gewinnen?
Über Shotgun-Klonierung:
- Gesamt DNA isolieren
- Gesamt DNA fragmentieren (z.B. schnelles Rühren oder Restriktionsenzym)
- Alle einzelnen DNA-Fragmente klonieren
-> Erhalte Genombibliothek mit gewünschter DNA Sequenz
Was sind cDNA-Bibliotheken?
- Gesamt RNA einer Zelle isolieren
- Mit reverser Transkriptase wieder in cDNA (complementary DNA) umschreiben
- Erhaltene DNA Fragmente einklonieren
Wie erfolgt das Screening auf das gewünschte bei der cDNA-Bibliothek hergestellten DNA-Fragment?
- Einzelne Kolonien mit Stempel auf Nitrocellulosefilter übertragen
- Mit Lauge behandeln -> Zellen + Phagen lysieren und DNA wird zum Einzelstrang
- Zugabe einer Fluoreszenz Sonde die komplementär zur gesuchten DNA Sequenz ist
- Waschen und auf Fluoreszenz Signal prüfen
Bis zu welcher Länge können DNA-Sequenzen amplifiziert werden?
6 kb
Welche Schritte müssen für den genetischen Fingerabdruck durchgeführt werden?
- Genetisches Material finden
- Mehrere Primer zugeben um bestimmte DNA Abschnitte mit PCR vervielfältigen
- Gelelektrophorese durchführen
Wie funktioniert der genetische Fingerabdruck mit STR?
Die DNA besitzt Short Tandem Repeats im nicht codierenden Teil der DNA.
Dabei handelt es sich beim forensischen Test um 7 verschiedene Allele (Bereiche auf der DNA die untersucht werden).
Die Anzahl der STR auf dem jeweiligen Allel variiert von Person zu Person.
-> Durch Untersuchung von 7 Allelen bekommt man eine hohe Wahrscheinlichkeit.
Wie funktioniert der genetische Fingerabdruck mit Restriktions-Fragment-Längen-Polymorphismus (RFLP)?
- Mehrere Stellen der DNA mit PCR amplifizieren
- Verschiedene Restriktionsenzyme zugeben
- Elektrophorese durchführen
-> Bandenmuster ist spezifisch für bestimmte Person
(Achtung bei Vaterschaftstest müssen Banden von der Mutter und vom Vater kommen)
Wie funktioniert ortsgerichtete Mutagenese?
- Verwende einen DNA Einzelstrang mit dem POI als Vorlage
- Füge einen Primer hinzu, der die gewünschten Basenveränderungen trägt
- > Dieser bindet an den DNA Einzelstrang - DNA Polymerase I liest DNA Einzelstrang beginnend am veränderten Primer ab
- > Neuer DNA Einzelstrang mit veränderter Basensequenz
Was ist transgen?
Multizelluläre Organismen, die das Gen eines anderen Organismus exprimieren
Was ist “goldener Reis”
Genetisch veränderter Reis, der Ferretin (ein Speicherprotein für Eisen), oder Beta-Carotin (Vorstufe von Vitamin A) bildet.
