T7_Diagnóstico Laboratorial em Microbiologia Clínica Flashcards
Marcha diagnóstica
- Fase pré analítica: amostra adequada e meio de transporte (se necessário);
- Fase analítica: processamento laboratorial e validação de resultados;
- Fase pós analítica: valorização clínica
Fase Pré-analitica - Avaliação da amostra
- Local;
- Quantidade;
- Timing;
- Recipiente;
- Transporte;
- Preservação;
Métodos de deteção
Pesquisa de:
a) Microorganismo: microscopia e exame cultural:
b) Ag/Ac: serologia;
c) Ácidos nucleicos: diagnóstico molecular;
Exame cultural:
- Observação macroscópica;
- Exame microscópico direto: a fresco e corado;
- Exame cultural;
- Identificação e TSA
Exame directo é a observação microscopica, que pode ser:
- Microscopia ótica:
- De campo claro;
- De campo escuro;
- De contraste de fase;
- Microscopia de fluorescência;
- Microscopia eletrónica;
O exame directo pode ser: Exame a fresco ou exame corado.
Exame a fresco pode ser feito como:
Permite observar (Amplicação de 400x)
- Células;
- Fungos;
- Parasitas;
- Mobilidade bacteriana;
Exame direto (sem manipulação), amostras liquidas
Pode adicionar-se um corante a amostra liquida:
- KOH;
- Azul de lactofenol;
- Iodo;
- Tinta da China;
O exame directo pode ser: Exame a fresco ou exame corado.
Exame corado pode ser feito com:
- Gram (por excelência);
- Ziehl Neelsen (mycobacterium tuberculosis)
As amostras aqui não são liquidas,são fixadas
O exame corado permite a observação com maior amplicação que o exame a fresco (não corado) 1000x.
Só conseguimos caracterizar os MO em grandes ampliações e por isso corados. No exame a fresco permite vê-los ma não caracteriza-los, a não ser que sejam MO grandes como na figura em anexo.
Exame corado pelo Gram tem quantos corantes?
Tem 2 corantes:
- 1º corante: violeta de cristal + Solução iodada: (agarra corante);
- Etanol: descoloração, que vai entrar nalgumas bacterias de parede frágil e remover o corante.
- 2º corante: safranina; As que perderam o primeiro corante vão corar pelo segundo corante.
Gram positivos ficam roxos;
Gram negativos ficam cor de rosa;
MÉTODO:
- I. Realização do esfregaço;
- II. Fixação por calor ou químico;
- III. Corar;
Permite observar:
- Células;
- Fungos;
- Parasitas;
- Morfologia bacteriana;
Exame cultural
- Meios de cultura: sólido vs. líquido:
- Não seletivos (ex: gelose sangue);
- Seletivos (ex: CNA);
- Seletivos e identificadores (ex: MacConkey;)
- Especiais (ex: BCYE;)
(meio em tubo para crescer organismos de crescimento lento, ou bacterias altamente patologicas)
(Meio liquido para quando há urgencia nos resultados, como num caso de sepsis, já que as bactérias crescem mais rápido em meios liquidos)
Identificação bacteriana
- Técnicas manuais;
- Técnicas automatizadas (18-24h):
- Bioquímica;
- Proteómica => + discriminação, demora 5 min;
- Genómica;
TSA
Teste de Sensibilidade aos Antibióticos;
Demora 24h (cultura) + 24h (TSA);
- Técnicas manuais: de difusão ou microdiluição;
- Técnicas automatizadas: de microdiluição ou deteção de genes de resistências;
Cultura celular: prós e contras
Vantagens:
- TSA;
- Estudos epidemiológicos;
- Deteta simultaneamente vários organismos;
- Barato;
Desvantagens:
- Necessita microorganismo viável;
- Demorado;
- Negativo se houve antibioterapia prévia;
- Algumas bactérias não crescem em meios de cultura;
Serologia
(Diagnóstico de fase de coalescência e não de fase aguda).
- Classicamente, deteção de Acs no soro;
- Também se podem detetar Ags no soro (ex: Legionella);
- Desvantagem: não há TSA;
Genómica - Testes TAAN (Testes de amplificação de a´cidos nucleicos)
- Diagnóstico molecular;
- Rápido;
- Pode ser qualitativo ou quantitativo;
- Único ou para múltiplos microorganismos;
- Caro;
- Não precisa de microorganismo vivo;
- Pesquisa de ácidos nucleicos:
- Pesquesa de agente específico: pesquisa de gene da toxina A e B de C. difficile;
- Pesquisa de conjunto de organismos (abordagem sindromática): pesquisa dos agentes causadores de sépsis, infeções respiratórias, infeções GI, infeções do SNC, DSTs;
- Pesquisa de gene de resistência: deteção da resistência à isoniazida e rifampicina no MBT;
Regras de segurança biológica
- Uso de bata obrigatório;
- Higiene das mãos;
- Unhas de gel prejudicam higiene;
- Cabelos compridos apanhados;
- Não ingerir alimentos;
- Não colocar objetos pessoais em cima da bancada de trabalho;
Gelose MacConkey
- Isolamento seletivo e diferenciação de Enterobacteriaceae;
- Contém lactose, permite evidenciar a fermentação lática pela viragem para vermelho neutro (indicador de pH);
- Microorganismos que fermentam latose ficam rosas ou vermelhos;
- Os que não fermentam ficam incolores ou ligeiramente bege;
- Seletividade é proporcionada por sais biliares e cristal de violeta que impedem o crescimento das bactérias Gram positivas;
Como funciona o Maldi-TOF MS?
Todos os crescimentos bacterianos tem de ter uma validação laboratorial, ou seja, nem tudo o que cresce é necessariamente relevante.
2 Exemplos:
- Exemplo 1: Exsudado de ferida cirúrgica, colhido para exame cultural que revelou o crescimento de um Staphylococcus epidermidis. Sabemos que é uma bactéria frequente na nossa flora cutânea e também sabemos que não é uma bactéria piogénica e que só causa infeções em determinadas situações, nomeadamente quando há próteses ou matérias protésicos e etc. Então qual será a o resultado desta análise laboratorial? Apesar de ter havido o crescimento de uma bactéria, essa bactéria não é patogénica naquela situação, portanto o resultado é negativo.
- Exemplo 2: A Brucella mellitensis é a responsável pela brucelose ou Febre de Malta. Quando detetada, independentemente de o individuo ter ou não sintomas, é para ser tratada. Portanto, nem sempre compete ao laboratório uma interpretação, mas na maior parte dos casos é preciso fazer uma interpretação
Principais gram positivas e negativas encontradas ?
O que é e como se faz a titulação?
Titulação:
determinar a maior diluição no soro que ainda consegue detetar a substância, sendo diferentes diluições do soro testadas com a mesma quantidade de Ag (reagente);
O que é a seroconversão?
Seroconversão: subir 4x ou passar de negativo a positivo;
Testar soro de fase aguda e da fase de convalescença: => exceção é resultado único na Legionella e HIV;
Imaginando que um doente tem uma infeção, faz-se uma pesquisa de anticorpos e tenho título de b, tenho o valor de anticorpos na quantidade como está marcado em b. Se tiver só uma determinação não sei se este valor corresponde a uma fase em início ou em final, uma vez que o c tem a mesma concentração e representa uma doença já em recuperação.
Então, em serologia faço sempre 2 determinações e aquilo que me faz o diagnóstico é a seroconversão, ou seja, os meus anticorpos passam de um valor negativo para um valor positivo.
Compare os métodos de detecção quanto a:
- Diagnóstico
- Demora
- Viabilidade
- TSA
- Epidemiologia
- Custo
