Reproduktionsbioteknologi Flashcards
Benævn hvad man kan lave med sæd vha. reproduktionsbioteknologi
Sædopsamling til kunstig insemination/kunstig sædoverførsel. Det bruges som standard mange steder.
Nedkøling af sæd
Cryopreservation
Kønssortering
Benævn hvad man kan lave med oocyster vha. reproduktionsbioteknologi
Ovum opsamling. Man kan suge oocyter ud af æggestokkene
Cryopreservation. Det bruges ikke så meget, men det kan gøres.
In-vitro maturation(IVM)
In-vitro fertilization(IVF)
Mikroinsemination: Intercytoplasmatisk sperm injection (ICSI)
SCNT. Dette er en undergruppe af kloning.
Benævn hvad man kan lave med embryoner vha. reproduktionsbioteknologi
Opsamling/flushing
Transfer
Cryopreservation. Dette gøres mere end for oocyter. Sandsynligheden for at det bliver til noget er større end for oocyter.
In-vitro kultur
Genotypning
Splitting. Dette er en form for kloning. På 4-celle stadie kan man opdele embryoner og få hele individer.
Stamceller
GMO: Ikke tilladt i EU
Transgenese
Forklar om kønssortering
Kønssortering af sædceller i en X og en Y bærende population
Man tagger DNA med noget fluorescerende. Sædceller med X kromosom har 3,4 % mere DNA end sædceller med Y så X celler er mere fluorescerende end Y.
Computer beregner hvilke dråber (indeholder 1 sædcelle hver), der indeholder X eller Y.
Hver dråbe påføres elektrisk ladning: negativ = Y, positiv = X
Dråber falder ned mellem 2 elektriske poler så X og Y separeres i hver sin retning = kønssortering af sædceller
Det er ikke alle dyr man kan bruge kønssortering på. Sikkerhed hos kvæg er cirka 95%. Det bruges ikke hos svin da sæddosis er for høj
Forklar om sædparametrene (ejakulation, sæd placering, sammensætning, koncentration, dosis) hos forskellige dyrearter (tyr, får/ged, orne, hingst, hund)
Benævn indikationer for embryo transfer
Flere afkom fra moderdyr (ko, hoppe, får, ged) med stort genetisk potentiale
Giver accelereret avlsfremgang
Moderdyret kan superovulere eller man kan skylle fra hende flere gange
Avl fra hopper i træning
Avl fra hopper, som ikke kan gennemføre en drægtighed og foling
Forklar grundprincippet for embryo transfer
Det er mest hest og kvæg det bruges ved. Svin er mere forskningsmæssigt
Forklar om embryotransfer-skylning hos hopper (hvornår, hvordan)
Dag 5.5-6 migrerer embryonet fra ovidukten ind i uterus
Skylning 7-8-9 dage post ovulation
3 x 1 l embryoskyllevæske + 1% føtal kalveserum.
Hvis det er vigtigt for ejer at hoppen ikke får et afkom, skal den have prostaglandin.
Forklar hvad MOET
MO (multiple ovulation - superovulation) + ET (embryo transfer) = MOET
Superovulation - benævn præparater
Follikelstimulerende
- eCG /PMSG: Antex, Folligon. Det er billigt men har lang halveringstid
- FSH: Pluset), pFSH. Det er dyrt men har kort halveringstid
Luteolytiske
- Prostaglandiner: Estrumat, Dinolytic
Ovulationsfremmende
- HCG: Chorulon, Physex
Forklar om proceduren for superovulation med hhv. FSH og eCG
Forklar MOET protokol
Donor: Man får typisk en 5-6 embryoner ud af det.
I Danmark har vi tendens til at bruge recpienter i naturlig brunst.
Hos recipienterne ønskes østrus simultant med donorer.
Dette kan opnås hormonelt eller naturligt. Hvis recipienter skal sprøjtes i brunst, skal den sidste PGF injektion gives 24 timer inden den sidste PGF injektion gives til donorerne.
Forklar rationalet:
Donorkoen har så mange store follikler fremme at hun danner meget FSH.
LH respons er mindre hos recipienter, så de ovulerer samtidig.
Forklar om superovulationsrespons samt hvad der sker ved overstimulering
Superovulationsresponset vurderes ud fra antal corpus luteum efter ovulation
15 % af dyrene responderer ikke på superovulation.
10 % giver ikke embryoner
Respons:
- Intet: Små faste ovarier med 1-2 corpus luteum
- Optimal stimulation: Forstørrede faste ovarier med 3-10 velafgrænsede corpus luteum i hver side
- Overstimulation: Store væskespændte ovarier med nogle corpus luteum og mange follikler. Hvis man overstimulerer, får man et stort, cystisk ovarie.
Man har mange, men man får ikke mange ud. Bursae opfanger ikke alle oocytterne(bursae kan ikke omgive på grund af størrelsen). De tabes i bughulen.
Forklar om udskylning af embryoner hos køer
Koens ovarier undersøges for corpus luteum
Epiduralanalgesi
Rektum tømmes
Vask af vulva
Foleykateter
Skylning af uterus
Forklar om resultatet af supraovulation og udskylning af embryoner hos kvæg
5-6 brugbare embryoner/skylning. Lidt færre fra kvier end køer.
Ingen embryoner fra ca. 20-25% af køer. De er ikke infertile og kan fungere godt på insemination, men ikke superovulation.
Fra 0 til 60-70% drægtighed /embryo. Afhængigt af embryo type og kvalitet, recipient samt person
Forklar om resultatet af supraovulation og udskylning af embryoner hos hest og får
Hest
Enkeltægsskylning
Recovery rate
Unge, fertile hopper: 70-80%.
Gamle subfertile: Under 20%
Drægtighedsrate efter transfer: 65 70%
Får:
5-6 gode embryoner per skylning.
Metoden har været brugt siden 70’erne, men det kræver snilde og håndelag.
Forklar om recipienter til embryotransferen hos ko og hoppe
Ko:
Optimalt synkront med embryo (dag 6-7)
Fordel med flere mulige recipienter per embryo.
Epiduralanæstesi
Skånsom ilægning i ipsilaterale horn
Hoppe:
Optimalt: recipienthoppen ovulerer 24 timer efter donorhoppen.
Kompenserer for udviklingsmæssig retardation ved stress som følge af udskylning og håndtering
Ovulation 24 timer før til 72 timer efter donor (-1 til+3 dage)
Naturlig synkronisering: Recipient flok hvor bedste match vælges
Hormonel synkronisering: Prostaglandin, hCG
Forklar om udbredelse af MOET hos kvæg, hest, får og ged, svin og hund og kat
Kvæg: bruges i avlsplaner, brug til in/eksport, over 75% af avlstyre i Danmark.
Hest: anvendes i Danmark
Får og ged: en del i nogle lande
Svin: til forskning
Forklar om ovum pick up (OPU - havd er det, mulige efterfølgende procedurer)
Opsamling af oocyter fra kvie/ko/hoppe. Den suges ud fra enten levende eller døde dyrs ovarier.
Mulige efterfølgende procedurer:
- IVM: In Vitro Modning af oocyterne.
- IVF: In Vitro Fertilisering (ikke hest). Man lægger æg ned sammen med sæd.
- ICSI: Intra Cytoplasmatisk Sperm Injection (hest). Sæd skal injiceres ind i oocysten.
- IVC: In Vitro Culture = dyrkning af embryoner i petriskål for at se hvorvidt det udvikles, så man kun overfører dem med bedst potentiale.
Transfer af embryoner til recipienter
Forklar om ovum pick up (OPU - indikationer, hvornår kan man gøre det)
Indikationer:
- Flere afkom fra genetisk overlegne hundyr
- Avl fra hopper i træning
- Avl fra hopper der ikke kan gennemføre en drægtighed
- Man kan også bruge metoden til at få afkom fra et aflivet dyr.
Hvornår:
Man kan høste på alle tidspunkter, også selvom dyret ikke er i cyklus. Dyrene behøver ikke være cyklisk aktive, men det øger sandsynligheden for at det går godt.
På døde dyr tager man ovarier ud og sidder med en kanyle og sprøjte eller en pumpe. Det skal gå relativt hurtigt. Når man har udtaget oocyterne kan de klare sig i lang tid.
Benævn indikationer for ovum pick up (OPU) og in-vitro production (IVP)
Avl af flere afkom/hundyr/år
Avl fra hopper i træning
Avl fra hopper, som ikke fysisk kan gennemføre en drægtighed
Donorhoppens ovidukt ikke er passabel
Cervix beskadiget
Endometriet for dårligt til at fertilisation og udvikling til dag 7-8 embryon kan ske
Euthanasi af hoppe
Forklar om meoden fra udtagning af oocyster til fødsel af føl
- Udtagelse af oocystrer
- Evt. holding over nat (rumtemperatur, holding medie) på IVM-medie 30 timer ved 38,2 C. Man fjerner de celler, der ikke er oocyter.
- ICSI enten med piezo eller konventionel. Man suger en sædcelle op med en pincet og lægger den ind i oocyten.
- De lægges i IVC. Der er skift af medie på dag 5. Blastocyster kommer mellem dag 7 og 9 efter ICSI
- Blastocytterne overføres på dag 7 og får hjerteslag på dag 25.
Forklar om de 3 trin i IVP
IVM: Modning af oocyter
IVF: Befrugtning
IVC: Dyrkning af embryoner
Forklar om genomisk selektion
Ved hjælp af en DNA-test på en kalv (eller et embryon) kan man bestemme avlskandidaters avlsindeks med højere sikkerhed end tidligere.
Når de unge dyr kan benyttes med større sikkerhed for avlspotentialet, vil generationsintervallet kunne sænkes og der fås hurtigere avlsfremgang.
Genomisk selektion gør det muligt at øge avlsfremgangen for alle egenskaber.
Bruges på kvæg og svin.
Forklar om de to hovedtyper af embryo-frysning/cryopreservation
Nedfrysning:
- Med is-dannelse (langsom, klassisk). Det kaldes også slow-freeze.
- Uden isdannelse (hurtig, vitrifikation).
Opbevaring: I flydende kvælstof ved -196 grader C
Forklar om kloning
Kopiering (dvs. ukønnet formering)
Ved naturlig deling: To afkom (enæggede tvillinger)
Ved kernetransplantation (somatic cell nuclear transfer): Mange afkom (ens genetiske kopier). De har rimelig ens genetik, men individerne kommer ikke til at være fuldstændig ens.
Forklar om Somatic cell nuclear transfer (SCNT)
Man kan lave mange individer på samme måde.
Man kan reprogrammere en celle fra et udviklet individ til at være som en zygote.
Det kan gøres på to måder:
- Hand made: Vi har to oocyter, fjerner en tredjedel af hver oocyt (den del med kernen), man tager en fibroplastcelle og lægger imellem de to oocyter, lægger dem sammen og giver dem et stød, så der kommer celledeling.
- Conventional: Man fjerner en tredjedel af oocyten væk og ovefører en hel celle. Herefter skal den aktiveres, typisk ved stød, så den begynder at dele sig.
Forklar om resultaterne ved kloning
Kloningseffektiviteten er lav
Højst 5% af klonede æg bliver til fødte dyr
Der er en lang række komplikationer såsom large offspring syndrome (de er ikke levedygtige).
Der er en høj grad af embryoner som går tabt og en del som ikke er levedygtige.
Ensartetheden er ikke 100%
Flere steder i processen indføres variation (epigenetik)
Det er på ingen måde en rutineteknik!
Forklar hvad kloning til at lave transgene dyr bruges til
Som bioreaktorer, f.eks. til mælk
- geder: protein fra edderkoppesilketråd
- geder eller kaniner: protein, der kan bruges som lægemiddel til mennesker: Factor VIII, antithrombin III
Som dyremodeller, f.eks. grise med gener fra forskellige sygdomme hos mennesker (eks. Alzheimer, psoriasis, åreforkalkning)
Man kloner heste for at bevare særligt gode heste.
Forklar hvad en stamcelle er
En stamcelle er en celle som kan replikere sig selv uendeligt og differentieres ud i forskellige celletyper.
Forklar om embryonic carcinoma cells
Mus udviklede tumorer. De første stamceller var også cancerceller.
Der er en tæt sammenhæng mellem stamceller og cancerceller
Forklar om embryonale stamceller
Embryonale stamceller findes i den indre cellemasse i et befrugtet æg. Disse celler er ophav til samtlige celletyper i kroppen.
Forklar om stamcellepotens
Totipotent: Kan differentiere til alle celletyper i kroppen inklusive extraembryonale celler.
Pluripotent: Ligger i indre cellemasse og kan blive alle celler i kroppen. De kan blive til alle vævstyper i kroppen.
Multipotent: Eks. Mesenchymale stamceller
The stem cell paradox: De er så autonome at man nok nærmere har en cancer
Forklar om embryonale germ cells
Det er dem der bliver kønsceller senerehen.
Forklar om pluripotente samceller fra embryoner
Pluripotente stamceller fra embryoner
For at få denne type stamceller bliver man nødt til at slå embryonet ihjel.
Dem fra navlestrengen er ikke pluripotente, så de kan ikke differentiere sig ligeså meget som de embryonale stamceller.
Forklar om inducerede pluripotente stamceller samt hvordan de bruges
Man kan lave reprogrammeringsproces i en petriskål. Man kan lave pluripotente stamceller fra voksne celler. Det er svært at holde cellerne i det stadie.
Det har stort potentiale:
- Regenerativ medicin: Man kan fjerne mutationen der giver sygdommen på celleniveau. Man kan lave meget personlig medicin, da det kan testen på vedkommendes celler.
- Dyremodeller
- Organ farming: Organer i grise man kan overføre til mennesker
- Grundforskning.
