TP µBIOLOGIE Flashcards
Préparer les TP
Quelles sont les groupes des β-lactamines ?
=> 4
* Pénicillines ou penams
* Carbapénèmes ou pénems
* Monobactame
* Céphalosporines ou cephems
Action des β-lactamines sur les bactéries ?
Bactéricides => tue
Mode d’action des β-lactamines
→ 2 temps
1) inhibition de synthèse du peptidoglycane
2) peptidoglycane dégradé sous l’action d’autolyses → entraine la lyse bactérienne
Comment les β-lactamines inhibent la synthèse du peptidoglycane des bactéries ?
- Cible d’action = PLP
- PLP = enzymes, transpeptidases, transglycosylases et carboxypeptidases, impliquées dans la synthèse du peptidoglycane
- Lactames se fixent très facilement sur ces PLP → possèdent analogie structurale avec un constituant du peptidoglycane en formation : D-alanyl-Dalanine (D-ala-D-ala)
Représentant des glycopeptides ?
Vancomycine : Vancocine (Staphylocoque)
Action des glycopeptides sur les bactéries ?
Bactéricide => tue
Mode d’action des glycopeptides ?
- Fixation spécifique sur les motifs D-alanyl-D-alanine des précurseurs du peptidoglycane
- encombrement stérique inhibe les transglycosylations et transpeptidations des dernières étapes de la synthèse du peptidoglycane
Action de la fosfomycine sur les bactéries ?
Bactéricide => tue
Mode d’action de la fosfomycine ?
Action sur l’étape initiale de synthèse du peptidoclycane :
* inhibition d’une enzyme intracytoplasmique impliquée dans la synthèse du précurseur énol-pyruvyl transférase qui permet la conversion de l’UDP-N-acetyl-glucosamine en UDP-N-acétyl-muramique : blocage synthèse du peptidoglycane
Représentant des aminosides ?
Gentamycine : Gentalline
Action des aminosides sur les bactéries ?
Bactéricide => tue
Mode d’action des aminosides ?
- Membrane externe des Gram - : Hydrosolubles et chargés + → passent à travers des porines de la membrane externe des GN en désorganisant la double couche lipidique
- Passage paroi rapide et passif fixation non spé → diffusion à travers peptidglycane G+ et G-
- Passage lent mb cytoplasmique : nécessitent la force protonomotrice et les enzymes de la chaine
respiratoire et l’ATPase translocatrice d’e- - Fixation aux ribosomes (50 et 30 S)
=> blocage traduction
Quels sont les ATB de la famille MLS ?
Macrolides, Lincosamides, Synergistines
Représentant des macrolides ?
Josamycine : Josacine
Action des MLS sur les bactéries ?
Bactériostatiques => bloque la croissance bactérienne
Mode d’action des MLS ?
fixent la sous-unité ribosomale 50S et inhibent la transpeptidation et la translocation
→ arrêtent la synthèse protéique
Représentant de l’acide fusidique ?
=> Fucidine
Action de l’acide fusidique sur les bactéries ?
Bactériostatique => inhibe la croissance bactérienne
Mode d’action de l’acide fusidique ?
=> Inhibe la synthèse protéique de la bactérie
Blocage de la translocation au niveau du ribosome
Représentant des Rifamycines ?
Rifampicine : Rifadine, rimactan antituberculeux
Action des Rifamycines sur les bactéries ?
Bactéricides => tue
Sous familles des quinolones ?
- Quinolones
- Représentant : Acide nalidixique : Négram
- Fluoroquinolones :
- Représentant : Ciprofloxacine : Ciflox, ciproxine
Action des quinolones sur les bactéries ?
Bactéricides => tue
Mode d’action des quinolones ?
- Cible = topoisomérases IV & l’ADN-gyrase bactérienne
- formation d’un complexe ternaire entre ADN et l’ADN gyrase (topoisomérases II) ou les topoisomérases IV
=> Enzymes impliquées au cours de la réplication - G+ : blocage de la topoisomérase IV
- G- : inhibition des activités ADN gyrases
Représentant des sulfamides et triméthoprime ?
triméthoprime + sulfaméthoxazole : Bactrim, Nopil
Action des sulfamides et triméthoprime sur les bactéries ?
Bactériostatiques => inhibent la croissance bactérienne
Mode d’action des sulfamides et triméthoprime ?
=> Inhibent voie de synthèse de l’acide folique dans la bactérie → ils sont synergiques
* Sulfamides : structure semblable à un substrat de la voie métabolique de l’acide folique, compétitifs de la dihydroptéroate synthétase
=> Arrêt synthèse acide folique
* Triméthoprime : analogue de précurseur de la synthèse de l’acide folique => inhibiteur compétitif de la dihydrofolate réductase => Arrêt synthèse acide folique
Organisation du plan de travail ?
=> Droitière
* bec bunzen devant soi
* portoirs à gauche
* anse et pipette non
utilisées à droite
* poubelle à droite
=> pour ne rien avoir à croiser au dessus de la flamme
Règles de manipulation en TP ?
- W assis
- Organiser la paillasse
- Ne pas parler pendant les manip
- W dans un diamètre de 20 cm de la flamme
- Ne jamais laisser ouvert les milieu de culture
- Ne pas poser un objet contaminer dans la paillasse
Préparation µscope observation état frais ?
- OBJECTIF X40 à sec
- Condenseur baissé
- Diaphragme 1/2 ouvert
Caractéristiques du milieu Chapman ?
- milieu sélectif
- Met en évidence uniquement les bactéries qui cultivent en milieu hypersalé => bactéries halophiles (Staphylococcus, Micrococcus, Enterococcus, Bacillus, et qq Gram-)
- permet d’étudier fermentation du mannitol par virage de l’indicateur coloré : rouge de phénol => colonies utilisant le mannitol passe du rouge au jaune
Caractéristiques de la gélose de Drigalski ?
- milieu sélectif
- milieu lactosé contient du cristal violet + desoxycholate → inhibent la plupart des bactéries G+
- Sélectionne les bactéries G-
- Permet différenciation des espèces qui fermentent le lactose de celles qui ne le fermentent pas :
- Colonies jaunes : acidification par fermentation du lactose : bactéries lactose +
- Colonies bleu-vert : pas d’acidification du milieu donc pas de fermentation du lactose : bactéries lactose-
Préparer l’isolement des bactéries ?
- Diluer dans de l’eau physiologique une fraction du mélange de bactéries jusqu’à l’obtention d’une
suspension opalescente - Prélever une fraction de cet échantillon dilué puis étaler sur la plus grande surface possible de milieu nutritif à l’aide d’un instrument d’isolement
Quelles sont les techniques d’isolement des bactéries ?
- Technique des 4 séries de stries (Quadran)
- technique de Buttiaux
Principe de la techniques des 4 séries de stries (Quadran) ?
- Séparer la boite de culture en 4 secteurs
- Prélever à l’anse (stérile) le bouillon
- main gauche : maintenir entrouverte la boite dans le cône stérile et étaler le prélèvement par stries très serrées dans une moitié de quadrant (quadrants 1 et 2)
- Etaler à nouveau le prélèvement par stries serrées dans la moitié correspondante aux quadrants 2 et 3
- Répéter une dernière fois l’étalement en stries serrées dans la moitié correspondante aux
quadrants 3 et 4
Principe de la technique de Buttiaux ?
- Prélever à l’anse (stérile) le bouillon
- on balaye en stries très serrées la surface de la gélose dans sa première partie
- dans la deuxième partie des tries + espacées
Paramètre de description des colonie en milieu solide ?
a. La taille
b. La forme
c. L’opacité
d. La couleur et / ou pigment
Taille des colonies bactériennes ?
- Diamètre < 1 mm : petite colonie
- 1 mm < diamètre < 3 mm : colonie moyenne
- Diamètre > 3 mm : grosse colonie
Forme des colonies bactériennes ?
- Allure de contours : lisse, irréguliers
- Relief : surface bombée, plate
- Centre : parfois surélève, parfois ombiliquée
Opacité des colonies bactériennes ?
- Opaques (ne laissent pas passer la lumière), colorées ou non
- Translucides (laissent passer la lumière mais on ne voit pas les formes au travers)
- Transparentes (laissent passer la lumière et voir les formes au travers)
Comment déterminer le “type respiratoire” des batéries ?
- gélose VF ou viande-foie
- aération du tube, par dévissage partiel du bouchon => pénétration progressive de l’oxygène => assure la formation d’un gradient de pression d’oxygène
- ensemencement après régénération, lorsque le milieu est encore liquide, en surfusion à 55°C
- Plonger une pipette boutonnée à longue effilure dans la culture à étudier et l’introduire au fond du tube de gélose => Remonter vers la surface en spirale
- placés à 37°C, le bouchon légèrement dévissé
Quels sont les différents types respiratoires et le rendu en gélose VF ?
- AAF : bactéries tout au long du tube
- Aérobie stricte : tout en haut du tube
- Micro aérophile : en haut du tube (mais pas en surface)
- Anaérobie stricte : bactéries dans le fond du tube
Coloration de GRAM ?
Etape 1 : réalisation d’un frottis qui est séché et fixé
Etape 2 : coloration au violet de Gentiane suivie d’un mordançage par une solution iodo-iodurée de Lugol
Etape 3 : décoloration à l’alcool
Etape 4 : recoloration à la fuchsine
=> Observer à l’immersion en pleine lumière : Mettre une goutte d’huile à immersion sur la lame totalement sèche. Objectif x 100
Test catalase ?
- mettre qq gouttes d’eau oxygénée sur une lame
- Prélever des colonies à l’aide d’une pipette pasteur (non cassée) et la poser dans l’eau oxygénée
- Si catalase l’H2O2 est dégradé et produit de l’O2 ce qui se traduit par un
dégagement gazeux (catalase (+))
Test oxydase ?
- Poser un disque sur une lame
- Poser 1 goutte du réactif oxydase sur le disque
- Prélever une colonie avec une pipette Pasteur boutonnée et la déposer sur le disque
=> Coloration bleue = oxydase (+)
Bactéries G+ ?
- Peptidoglycane épais qui laisse rentrer le colorant mais pas l’alcool
- La paroi G+ = imperméable à l’alcool
=> coloration violette
Bactéries G- ?
- Peptidoglycane fin
- Possède une membrane externe
- Colorants et l’alcool peuvent rentrer dans la bactérie
- La paroi des G- = perméable à l’alcool
=> coloration rose
Principe du test de réduction des nitrates ?
- Réactif nit1 et nit2 dans le milieu
- Si le milieu devient rouge : présence de nitrites => Bactérie nitrate réductase (+)
- milieu reste inchangé : on ajoute alors de la poudre de zinc :
- coloration rouge : transformation des nitrates en nitrites par le zinc => Abs activité nitrate réductase
- pas de coloration : nitrates transformés par la bactérie au delà des nitrites => bactérie nitrite réductase + (azote)
Que permet de chercher le test Clarks et Lubs ou test VP ?
- Etude voie de fermentation du glucose par la recherche d’un métabolite intermédiaire produit à partir du glucose : acetoine
- oxydation à l’air de l’acetoine en milieu alcalin (hydroxyde de potassium) produit de la butandione
- En présence d’α-naphtol (napht-1-ol), la butandione donne une réaction colorée spécifique rouge-rose
=> Si rouge rose : voie de fermentation du glucose +
Test urée-indole ?
=> Recherche de la production d’indole et de l’activité TDA
▪ Uréase : observation directe : bactérie uréase (+) décompose l’urée en composé alcalin qui produit le virage du phénol (jaune → rouge) : UREASE (+) si le milieu est rouge
▪ Recherche de l’indole : Réaction de James :
3 gouttes de réactif de James dans le milieu => contient du para-diméthylaminobenzaldéhyde → réagit avec l’indole et donne un composé rouge qui se concentre dans la phase alcoolique du réactif : bactérie indole (+) si présence d’un anneau rouge-rose
▪ Recherche de la tryptophane désaminase (TDA) : 2 gouttes de réactif TDA (FeCl3) dans le milieu.
Tryptophane → via tryptophane désaminase → acide indole pyruvique + FeCl3 => brun qui
précipite = bactérie TDA (+)
Que permet la gélose trypticase ?
- d’étudier l’aspect des colonies
- d’apprécier la pureté des cultures
- de rechercher la catalase : déposer quelques colonies sur une lame puis les recouvrir de quelques gouttes d’eau oxygénée. La catalase est un caractère de famille
Principe d’une gélose au sang ?
Permet de voir le type d’hémolyse que manifeste le germe (importance d’un bon isolement et d’une culture pure).
* Germes β hémolytiques produisent une hémolyse complète autour de la colonie qui se traduit par l’apparition d’un halo transparent
* Hémolyse incomplète (hémolyse α ou viridans) un halo de couleur verdâtre apparaît autour de la colonie
* Germes non hémolytiques laissent la gélose opaque
Principe du test de la Bile esculine ?
- Permet d’apprécier la croissance du germe en milieu bilié et sa capacité d’utiliser l’esculine
- Réaction esculinase+: le milieu devient noir
- réaction esculinase - : le milieu reste marron clair
Sur quelle population peut on réaliser le test Streptex ?
seulement sur les streptocoques béta-hémolytiques
Principe du test Streptex ?
Mettre en évidence un polyoside de paroi du germe, qui agglutine avec les particules de latex sensibilisées par les AC spécifiques des différents groupes de Lancefield
