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{P3} µbiologie > TP µBIOLOGIE > Flashcards

TP µBIOLOGIE Flashcards

Préparer les TP

1
Q

Quelles sont les groupes des β-lactamines ?

A

=> 4
* Pénicillines ou penams
* Carbapénèmes ou pénems
* Monobactame
* Céphalosporines ou cephems

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2
Q

Action des β-lactamines sur les bactéries ?

A

Bactéricides => tue

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3
Q

Mode d’action des β-lactamines

A

→ 2 temps
1) inhibition de synthèse du peptidoglycane
2) peptidoglycane dégradé sous l’action d’autolyses → entraine la lyse bactérienne

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4
Q

Comment les β-lactamines inhibent la synthèse du peptidoglycane des bactéries ?

A
  • Cible d’action = PLP
  • PLP = enzymes, transpeptidases, transglycosylases et carboxypeptidases, impliquées dans la synthèse du peptidoglycane
  • Lactames se fixent très facilement sur ces PLP → possèdent analogie structurale avec un constituant du peptidoglycane en formation : D-alanyl-Dalanine (D-ala-D-ala)
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5
Q

Représentant des glycopeptides ?

A

Vancomycine : Vancocine (Staphylocoque)

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6
Q

Action des glycopeptides sur les bactéries ?

A

Bactéricide => tue

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7
Q

Mode d’action des glycopeptides ?

A
  • Fixation spécifique sur les motifs D-alanyl-D-alanine des précurseurs du peptidoglycane
  • encombrement stérique inhibe les transglycosylations et transpeptidations des dernières étapes de la synthèse du peptidoglycane
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8
Q

Action de la fosfomycine sur les bactéries ?

A

Bactéricide => tue

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9
Q

Mode d’action de la fosfomycine ?

A

Action sur l’étape initiale de synthèse du peptidoclycane :
* inhibition d’une enzyme intracytoplasmique impliquée dans la synthèse du précurseur énol-pyruvyl transférase qui permet la conversion de l’UDP-N-acetyl-glucosamine en UDP-N-acétyl-muramique : blocage synthèse du peptidoglycane

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10
Q

Représentant des aminosides ?

A

Gentamycine : Gentalline

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11
Q

Action des aminosides sur les bactéries ?

A

Bactéricide => tue

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12
Q

Mode d’action des aminosides ?

A
  • Membrane externe des Gram - : Hydrosolubles et chargés + → passent à travers des porines de la membrane externe des GN en désorganisant la double couche lipidique
  • Passage paroi rapide et passif fixation non spé → diffusion à travers peptidglycane G+ et G-
  • Passage lent mb cytoplasmique : nécessitent la force protonomotrice et les enzymes de la chaine
    respiratoire et l’ATPase translocatrice d’e-
  • Fixation aux ribosomes (50 et 30 S)
    => blocage traduction
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13
Q

Quels sont les ATB de la famille MLS ?

A

Macrolides, Lincosamides, Synergistines

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14
Q

Représentant des macrolides ?

A

Josamycine : Josacine

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15
Q

Action des MLS sur les bactéries ?

A

Bactériostatiques => bloque la croissance bactérienne

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16
Q

Mode d’action des MLS ?

A

fixent la sous-unité ribosomale 50S et inhibent la transpeptidation et la translocation
→ arrêtent la synthèse protéique

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17
Q

Représentant de l’acide fusidique ?

A

=> Fucidine

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18
Q

Action de l’acide fusidique sur les bactéries ?

A

Bactériostatique => inhibe la croissance bactérienne

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19
Q

Mode d’action de l’acide fusidique ?

A

=> Inhibe la synthèse protéique de la bactérie
Blocage de la translocation au niveau du ribosome

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20
Q

Représentant des Rifamycines ?

A

Rifampicine : Rifadine, rimactan antituberculeux

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21
Q

Action des Rifamycines sur les bactéries ?

A

Bactéricides => tue

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22
Q

Sous familles des quinolones ?

A
  • Quinolones
    • Représentant : Acide nalidixique : Négram
  • Fluoroquinolones :
    • Représentant : Ciprofloxacine : Ciflox, ciproxine
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23
Q

Action des quinolones sur les bactéries ?

A

Bactéricides => tue

24
Q

Mode d’action des quinolones ?

A
  • Cible = topoisomérases IV & l’ADN-gyrase bactérienne
  • formation d’un complexe ternaire entre ADN et l’ADN gyrase (topoisomérases II) ou les topoisomérases IV
    => Enzymes impliquées au cours de la réplication
  • G+ : blocage de la topoisomérase IV
  • G- : inhibition des activités ADN gyrases
25
Q

Représentant des sulfamides et triméthoprime ?

A

triméthoprime + sulfaméthoxazole : Bactrim, Nopil

26
Q

Action des sulfamides et triméthoprime sur les bactéries ?

A

Bactériostatiques => inhibent la croissance bactérienne

27
Q

Mode d’action des sulfamides et triméthoprime ?

A

=> Inhibent voie de synthèse de l’acide folique dans la bactérie → ils sont synergiques
* Sulfamides : structure semblable à un substrat de la voie métabolique de l’acide folique, compétitifs de la dihydroptéroate synthétase
=> Arrêt synthèse acide folique
* Triméthoprime : analogue de précurseur de la synthèse de l’acide folique => inhibiteur compétitif de la dihydrofolate réductase => Arrêt synthèse acide folique

28
Q

Organisation du plan de travail ?

A

=> Droitière
* bec bunzen devant soi
* portoirs à gauche
* anse et pipette non
utilisées à droite
* poubelle à droite
=> pour ne rien avoir à croiser au dessus de la flamme

29
Q

Règles de manipulation en TP ?

A
  • W assis
  • Organiser la paillasse
  • Ne pas parler pendant les manip
  • W dans un diamètre de 20 cm de la flamme
  • Ne jamais laisser ouvert les milieu de culture
  • Ne pas poser un objet contaminer dans la paillasse
30
Q

Préparation µscope observation état frais ?

A
  • OBJECTIF X40 à sec
  • Condenseur baissé
  • Diaphragme 1/2 ouvert
31
Q

Caractéristiques du milieu Chapman ?

A
  • milieu sélectif
  • Met en évidence uniquement les bactéries qui cultivent en milieu hypersalé => bactéries halophiles (Staphylococcus, Micrococcus, Enterococcus, Bacillus, et qq Gram-)
  • permet d’étudier fermentation du mannitol par virage de l’indicateur coloré : rouge de phénol => colonies utilisant le mannitol passe du rouge au jaune
32
Q

Caractéristiques de la gélose de Drigalski ?

A
  • milieu sélectif
  • milieu lactosé contient du cristal violet + desoxycholate → inhibent la plupart des bactéries G+
  • Sélectionne les bactéries G-
  • Permet différenciation des espèces qui fermentent le lactose de celles qui ne le fermentent pas :
    • Colonies jaunes : acidification par fermentation du lactose : bactéries lactose +
    • Colonies bleu-vert : pas d’acidification du milieu donc pas de fermentation du lactose : bactéries lactose-
33
Q

Préparer l’isolement des bactéries ?

A
  • Diluer dans de l’eau physiologique une fraction du mélange de bactéries jusqu’à l’obtention d’une
    suspension opalescente
  • Prélever une fraction de cet échantillon dilué puis étaler sur la plus grande surface possible de milieu nutritif à l’aide d’un instrument d’isolement
34
Q

Quelles sont les techniques d’isolement des bactéries ?

A
  • Technique des 4 séries de stries (Quadran)
  • technique de Buttiaux
35
Q

Principe de la techniques des 4 séries de stries (Quadran) ?

A
  • Séparer la boite de culture en 4 secteurs
  • Prélever à l’anse (stérile) le bouillon
  • main gauche : maintenir entrouverte la boite dans le cône stérile et étaler le prélèvement par stries très serrées dans une moitié de quadrant (quadrants 1 et 2)
  • Etaler à nouveau le prélèvement par stries serrées dans la moitié correspondante aux quadrants 2 et 3
  • Répéter une dernière fois l’étalement en stries serrées dans la moitié correspondante aux
    quadrants 3 et 4
36
Q

Principe de la technique de Buttiaux ?

A
  • Prélever à l’anse (stérile) le bouillon
  • on balaye en stries très serrées la surface de la gélose dans sa première partie
  • dans la deuxième partie des tries + espacées
37
Q

Paramètre de description des colonie en milieu solide ?

A

a. La taille
b. La forme
c. L’opacité
d. La couleur et / ou pigment

38
Q

Taille des colonies bactériennes ?

A
  • Diamètre < 1 mm : petite colonie
  • 1 mm < diamètre < 3 mm : colonie moyenne
  • Diamètre > 3 mm : grosse colonie
39
Q

Forme des colonies bactériennes ?

A
  • Allure de contours : lisse, irréguliers
  • Relief : surface bombée, plate
  • Centre : parfois surélève, parfois ombiliquée
40
Q

Opacité des colonies bactériennes ?

A
  • Opaques (ne laissent pas passer la lumière), colorées ou non
  • Translucides (laissent passer la lumière mais on ne voit pas les formes au travers)
  • Transparentes (laissent passer la lumière et voir les formes au travers)
41
Q

Comment déterminer le “type respiratoire” des batéries ?

A
  • gélose VF ou viande-foie
  • aération du tube, par dévissage partiel du bouchon => pénétration progressive de l’oxygène => assure la formation d’un gradient de pression d’oxygène
  • ensemencement après régénération, lorsque le milieu est encore liquide, en surfusion à 55°C
  • Plonger une pipette boutonnée à longue effilure dans la culture à étudier et l’introduire au fond du tube de gélose => Remonter vers la surface en spirale
  • placés à 37°C, le bouchon légèrement dévissé
42
Q

Quels sont les différents types respiratoires et le rendu en gélose VF ?

A
  • AAF : bactéries tout au long du tube
  • Aérobie stricte : tout en haut du tube
  • Micro aérophile : en haut du tube (mais pas en surface)
  • Anaérobie stricte : bactéries dans le fond du tube
43
Q

Coloration de GRAM ?

A

Etape 1 : réalisation d’un frottis qui est séché et fixé
Etape 2 : coloration au violet de Gentiane suivie d’un mordançage par une solution iodo-iodurée de Lugol
Etape 3 : décoloration à l’alcool
Etape 4 : recoloration à la fuchsine
=> Observer à l’immersion en pleine lumière : Mettre une goutte d’huile à immersion sur la lame totalement sèche. Objectif x 100

44
Q

Test catalase ?

A
  • mettre qq gouttes d’eau oxygénée sur une lame
  • Prélever des colonies à l’aide d’une pipette pasteur (non cassée) et la poser dans l’eau oxygénée
  • Si catalase l’H2O2 est dégradé et produit de l’O2 ce qui se traduit par un
    dégagement gazeux (catalase (+))
45
Q

Test oxydase ?

A
  • Poser un disque sur une lame
  • Poser 1 goutte du réactif oxydase sur le disque
  • Prélever une colonie avec une pipette Pasteur boutonnée et la déposer sur le disque
    => Coloration bleue = oxydase (+)
46
Q

Bactéries G+ ?

A
  • Peptidoglycane épais qui laisse rentrer le colorant mais pas l’alcool
  • La paroi G+ = imperméable à l’alcool
    => coloration violette
47
Q

Bactéries G- ?

A
  • Peptidoglycane fin
  • Possède une membrane externe
  • Colorants et l’alcool peuvent rentrer dans la bactérie
  • La paroi des G- = perméable à l’alcool
    => coloration rose
48
Q

Principe du test de réduction des nitrates ?

A
  • Réactif nit1 et nit2 dans le milieu
  • Si le milieu devient rouge : présence de nitrites => Bactérie nitrate réductase (+)
  • milieu reste inchangé : on ajoute alors de la poudre de zinc :
    • coloration rouge : transformation des nitrates en nitrites par le zinc => Abs activité nitrate réductase
  • pas de coloration : nitrates transformés par la bactérie au delà des nitrites => bactérie nitrite réductase + (azote)
49
Q

Que permet de chercher le test Clarks et Lubs ou test VP ?

A
  • Etude voie de fermentation du glucose par la recherche d’un métabolite intermédiaire produit à partir du glucose : acetoine
  • oxydation à l’air de l’acetoine en milieu alcalin (hydroxyde de potassium) produit de la butandione
  • En présence d’α-naphtol (napht-1-ol), la butandione donne une réaction colorée spécifique rouge-rose
    => Si rouge rose : voie de fermentation du glucose +
50
Q

Test urée-indole ?

A

=> Recherche de la production d’indole et de l’activité TDA
▪ Uréase : observation directe : bactérie uréase (+) décompose l’urée en composé alcalin qui produit le virage du phénol (jaune → rouge) : UREASE (+) si le milieu est rouge
▪ Recherche de l’indole : Réaction de James :
3 gouttes de réactif de James dans le milieu => contient du para-diméthylaminobenzaldéhyde → réagit avec l’indole et donne un composé rouge qui se concentre dans la phase alcoolique du réactif : bactérie indole (+) si présence d’un anneau rouge-rose
▪ Recherche de la tryptophane désaminase (TDA) : 2 gouttes de réactif TDA (FeCl3) dans le milieu.
Tryptophane → via tryptophane désaminase → acide indole pyruvique + FeCl3 => brun qui
précipite = bactérie TDA (+)

51
Q

Que permet la gélose trypticase ?

A
  • d’étudier l’aspect des colonies
  • d’apprécier la pureté des cultures
  • de rechercher la catalase : déposer quelques colonies sur une lame puis les recouvrir de quelques gouttes d’eau oxygénée. La catalase est un caractère de famille
52
Q

Principe d’une gélose au sang ?

A

Permet de voir le type d’hémolyse que manifeste le germe (importance d’un bon isolement et d’une culture pure).
* Germes β hémolytiques produisent une hémolyse complète autour de la colonie qui se traduit par l’apparition d’un halo transparent
* Hémolyse incomplète (hémolyse α ou viridans) un halo de couleur verdâtre apparaît autour de la colonie
* Germes non hémolytiques laissent la gélose opaque

53
Q

Principe du test de la Bile esculine ?

A
  • Permet d’apprécier la croissance du germe en milieu bilié et sa capacité d’utiliser l’esculine
  • Réaction esculinase+: le milieu devient noir
  • réaction esculinase - : le milieu reste marron clair
54
Q

Sur quelle population peut on réaliser le test Streptex ?

A

seulement sur les streptocoques béta-hémolytiques

55
Q

Principe du test Streptex ?

A

Mettre en évidence un polyoside de paroi du germe, qui agglutine avec les particules de latex sensibilisées par les AC spécifiques des différents groupes de Lancefield

{P3} µbiologie (42 decks)

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