VO's week 3 Flashcards
In welke fase van de celcyclus brengen de cellen in ons lichaam gemiddeld het meeste tijd door?
G1, de G1 fase duurt 11-14 uur. De kortste periode is de M-fase.
Wat is de verhouding in hoeveelheid DNA tussen menselijk fibroblasten in de G1 en de G2 fase van de celcyclus?
G1 = 0,5 * G2
Een “checkpoint” in de celcyclus kan het beste worden beschreven als:
specifieke stadia waar verdere voortgang van de celcyclus kan worden gestopt.
Waarvoor dient het G2 / M checkpoint tijdens de celcyclus?
Om ervoor te zorgen dat er geen DNA schade is opgetreden tijdens de S fase.
Wat is Paclitaxel?
Paclitaxel is een stof die bindt aan tubuline, waardoor microtubuli niet meer kunnen depolymeriseren en cellen dus geen vrij tubuline hebben waarmee nieuwe microtubuli gemaakt kunnen worden. Paclitaxel is een vorm van chemotherapie.
In welke fase van de celcyclus zullen cellen zich ophopen als ze met Paclitaxel worden behandeld?
Mitose, de chromosomen kunnen hierdoor niet verbonden worden aan de microtubuli. Het remt de vorming van de mitotische spindel tijdens de celdeling, waardoor het mitoseproces wordt geblokkeerd.
Tijdens welke fase(n) van de celcyclus vind homologe recombinatie (HR) plaats?
S en G2
Wat is FACS?
Celcyclus analyse door kwantificering van het DNA-gehalte.
Hoe werkt FACS?
DNA wordt gekleurd door een fluorescent DNA-bindend molecuul: propidium iodide (PI). Hoe meer DNA hoe meer binding van PI. Elke cel wordt individueel bekeken, hierdoor krijg je een fluorescent signaal en dat wordt geplot. Aantal cellen tegenover fluorescentie intensiteit unit.
Wat is het verschil tussen een FACS analyse en immunokleuring?
Voor FACS analyse is het nodig dat de cellen allemaal los van elkaar zijn. Dit is vaak niet mogelijk voor solide tumoren, zoals borsttumoren.
Hoe werkt immunokleuring?
Immunokleuring wordt gedaan op coupes van biopten van organen, met hulp van antilichamen tegen celcyclus specifieke eiwitten.
Welke vormen van immunokleuring kennen we? en welke fase van de celdeling kleuren ze aan?
Wat is de verhouding in hoeveelheid DNA tussen piek (a) en piek (c)?
(a)= 0.5x (c)
Waar in het diagram vinden we cellen in de S fase van de celcyclus?
Tussen de getallen 1 en 2 op de x-as (b). Omdat de replicatie in de S-fase nog niet helemaal is voltooid.
- A = G1
- B = S
- C = G2
De fibroblasten worden bestraald met 5 Gy ioniserende straling (gamma straling). Vervolgens worden ze 24 uur doorgekweekt. Daarna gaan we ze Facsen.
Welk FACS profiel hoort hierbij?
A en D.
- D een deel van de cellen kan alsnog in apoptose gaan door de schade en een deel hersteld.
- A alles kan worden hersteld.
Waarom zijn er cellen met minder DNA dan cellen in G1 (zie bij 16 uur)?
Dit zijn cellen in apoptose. Ze hebben nog wel een membraan, maar het DNA wordt afgebroken.
Een cultuur van prolifererende humane huidcellen is behandeld gedurende 15 uren met aphidicolin, een DNA polymerase remmer. Vervolgens zijn deze cellen behandeld met propidium iodide en geanalyseerd met flow cytometrie. Het resultaat is weergegeven in een grafiek. Welke grafiek past hierbij?
Hier past grafiek C bij, omdat de DNA synthese al plaats vond, dus er zijn al cellen in de S-fase. De cellen in de mitose kunnen al verder. De rest loopt vast in G1.
De fibroblasten worden vervolgens behandeld met Paclitaxel. Welk FACS profiel hoort hierbij?
Profiel B en D kunnen ligt eraan hoelang je het geeft.
