Chimie ana : METHODES DE SEPARATIONS CHROMATOGRAPHIQUES Flashcards
04/10/24 => Chollet-Krugler
Qu’est-ce que la chromatographie ?
Méthode de séparation, d’identification et de quantification des espèces chimiques présentes dans un mélange complexe
Principe de la chromatographie ?
Séparation basée sur les différences d’affinités qui peuvent présenter 2 ou plusieurs composés pour 2 phases non miscibles :
○ Fixe appelée phase stationnaire/fixe = PS
○ Mobile appelée phase mobile = PM
=> Mise en jeu de plusieurs processus physicochimiques pour la rétention
Pourquoi il y a séparation lors d’une chromatographie ?
● Car au cours de la chromatographie chaque constituant du mélange est soumis à une force de rétention (exercée par la PS) et à une force de mobilité exercée par la PM
● Mis en jeu d’un processus physicochimique différent en fonction de la nature de l’analyte
● + le trajet de séparation est long, + les constituants seront séparés les uns des autres
Comment identifier un soluté dans un mélange lors d’une chromatographie ?
● Comparaison de son niv de migration avec celui d’une espèce chimique
standard (témoin) en se plaçant dans les mêmes conditions expérimentales, parfois aléatoire
● On peut coupler avec une autre technique d’analyse complémentaire
Quels sont les critère de classification des méthodes chromatographiques ?
A. Selon les modalités de migration
B. Selon la nature de la PM
C. Selon la nature de la phase stationnaire (PS)
D. Selon le phénomène physicochimique
Quelles sont les possibles modalité de migration des chromatographies ?
- Chromatographie sur colonne ou chromatographie d’élution
- Chromatographie planaire ou de développement (CCM)
Caractéristiques de la chromatographie sur colonne ou chromatographie d’élution ?
- PS maintenue dans une colonne et PM y progresse par gravité ou sous pression
- Chaque composé est élué en sortie de la colonne à des instants différents
- Notion de temps de rétention
Caractéristique de la chromatographie planaire ou de développement ?
- PS présente à la surface d’un support plat (ex : plaque de silice)
- PM se déplace à travers
la PS par capillarité - Pas d’étape d’élution mais il est possible de récupérer les composés par grattage de la plaque
- Notion de rapport frontal (= distance de migration)
Quelles sont les différentes chromatographie selon ma nature de la PM ?
3 catégories :
● Liquide : chromatographie en phase liquide : CPL (Liquid Chromatography)
● Gazeuse : chromatographie en phase gazeuse : CPG (Gas chromatography)
● Fluide supercritique
Caractéristiques de la chromatographie en phase supercritique ?
=> CFS (Supercritical Fluid Chromatography)
Fluide supercritique = à la fois les propriétés d’un
gaz et celle d’un liquide, souvent utilisée pour séparer les composés chiraux ou pour éliminer la caféine dans du café par exemple, interface entre liquide et gazeux
Quelles sont les caractéristiques des chromatographies selon la nature de la phase stationnaire ?
4 catégories :
Liquide : liquide fixé sur un support solide inerte, phase stationnaire liquide = + utilisée pour analyser des médicaments
Solide :
- adsorbant solide
- résine échangeuses d’ions
- solide poreux
Quelles sont les catégories de chromatographies selon les phénomènes physicochimiques ?
6 catégories :
● Chromatographie de partage
● Chromatographie d’adsorption
● Chromatographie par échanges d’ions
● Chromatographie d’exclusion diffusion
● Chromatographie par formation de paires d’ions
● Chromatographie d’affinité
Caractéristiques de la chromatographie de partage ?
- différence de solubilité dans les 2 phases selon leur coefficient de partage
- PS liquide
Caractéristiques de la chromatographie par échange d’ion ?
- séparation des composés ioniques par des interactions électrostatiques avec des composants de charges opposées
=> coefficient d’échanges d’ions
Caractéristiques de la chromatographie d’absorption ?
- liquide solide ou gazeuse liquide
=> formation de liaisons entre les solutés de faible énergie et la surface absorbante - régie par coefficient d’adsorption
Caractéristiques de la chromatographie d’exclusion de diffusion ?
- séparation en fonction de la masse molaire de la molécule
- coefficient de diffusion mis en jeu utilisée pour un solide poreux
Caractéristiques de la chromatographie d’affinité ?
*interactions spécifiques avec le ligand => stérique par exemple
Rôle du chromatogramme ?
traduit la variation de la C° en soluté au cours du temps
De quoi dépend le choix du procédé de séparation chromatographique ?
des propriétés physicochimiques (structure, masse molaire, caractère ionique) des molécules à séparer et de l’objectif
Caractéristiques de la chromatographie par formation de paires d’ions ?
- interactions électrostatiques
- effets hydrophobes
Que permet de définir la position des pics sur l’axe ?
Temps de rétention => analyse qualitative = en
fonction de leur temps de rétention
Que permet de définir la surface des pics sur la chromatogramme ?
Surface proportionnelle à la quantité injectée : exploitée pour l’analyse quantitative
= surface proportionnelle à la C° ajoutée
Quels sont les domaines d’application de la chromatographie ?
couvrent tous les domaines de l’analyse : pharmaceutique, toxicologie, biochimique, agroalimentaire, pharmacocinétique (l’analyse du métabolisme)
Définition du soluté ?
Toute substance constituant d’un mélange, séparée par
chromatographie
Définition de la phase mobile ?
=> éluant
Vecteur, liquide ou gazeux, qui déplace le soluté au travers de la PS
Définition de la phase stationnaire ?
Produit, qui par ses affinités avec les solutés va permettre leur séparation quand la PM les déplace
Définition du support ?
Particule inerte, de diamètre variable qui porte la PS
Définition du remplissage ?
Ensemble des produits (adsorbant , support, PS …) qui garnissent une
colonne de chromatographie
Définition de la colonne chromatographique ?
Tube de diamètre et longueur variable, en verre, en métal, ou autre substance à l’intérieur duquel s’opèrent les séparations chromatographiques
Quels sont les différents types de colonnes chromatographiques ?
➔ Colonne remplie : ensemble des produits garnissent entièrement la colonne
➔ Colonne capillaire : PS tapisse la paroi interne de la colonne sous forme d’un film
