Chimie ana : ELECTROPHORESE CAPILLAIRE

Question 1

Avantage de l’électrophorèse capillaire ?

Answer 1

• Meilleure résolution
• Augmentation de la vitesse de séparation
• Possibilité d’automatisation
• Faible consommation d’échantillons et de tampons de séparation
• compatibilité avec de nombreux détecteurs

Question 2

Principe de migration en Electrophorèse Capillaire ?

Answer 2

Technique séparative (dans un tube capillaire étroit rempli d’électrolyte) basée sur la différence de migration d’espèces neutres ou chargées sous l’effet d’un champ électrique

Question 3

Mécanisme de migration en Electrophorèse Capillaire ?

Answer 3

2 phénomènes :
* Migration électrophorétique
* Migration électroosmotique (ou d’électroendosmose)

Question 4

Principe de la migration électrophorétique ?

Answer 4

Déplacement des ions
avec une vitesse v
fonction de la mobilité électrophorétique µep et du champ électrique E

Question 5

De quoi dépend la mobilité électrophorétique ?

Answer 5

De la taille et de la charge de la particule, peut être calculée avec la formule
** petites molécules migrent plus rapidement
* le signe de la charge détermine le sens de
migration et la vitesse : anions vers anode
(chargée +) et cations vers cathode (chargée -)
* molécule neutre (N): pas de mobilité électrophorétique
* Influence de la force ionique de la solution tampon
* Influence du pH de la solution tampon sur l’état d’ionisation de la molécule*

Question 6

Principe de la migration électroosmotique ?

Answer 6

Écoulement du solvant vers la cathode sous l’action d’un
champ électrique, une molécule neutre ne migre donc que sous l’effet du flux
électroosmotique
=> Effet de pompe électrique
Origine : quand pH sol tampon > 3, à l’interface capillaire en silice (groupements SiO) et la solution tampon il se forme une double couche électrique riche en cations. Sous l’action du champ électrique, la double couche électrique se déplace vers la cathode entrainant les molécules du solvant et de l’échantillon

Question 7

A quoi correspond la vitesse apparente d’une molécule neutre ?

Answer 7

vitesse électroosmotique

Question 8

Qu’obtient on avec la détection de toutes les molécules lors du passage en un point commun ?

Answer 8

un électrophérogramme

Question 9

Quels sont les paramètres qui peuvent attester de l’efficacité de l’électrophorèse ?

Answer 9

• Nombre de plateaux théoriques N en EC est très supérieur à ceux mesurés avec d’autres techniques
• B/u est la seule source
  d’élargissement des pics

Question 10

Quels sont les indicateur d’une bonne séparation en EC ?

Answer 10

• Sélectivité α
• Résolution R

Question 11

Quels sont les odes de séparation en EC ?

Answer 11

1- EC de Zone ECZ séparation de médicaments anti-inflammatoires, séparation des énantiomères du 3-(di-n-propylamino) chromane
2- EC en gel ECG
3- EC à focalisation isoélectrique
4- Chromatographie Electrocinétique Micellaire CEM

Question 12

Principe de l’EC de zone ?

Answer 12

• Composition du tampon homogène dans tout le capillaire, champ électrique constant
• Séparation des composés ionisés selon leur rapport q/r Détection des cations puis des espèces neutres (non séparées) puis des anions
• Existe un mode inversé

Question 13

Principe du mode inversé de l’EC en zone ?

Answer 13

inverser le sens du flux d’électroosmotique vers
l’anode en ajoutant au tampon un surfactant

Question 13

Intérêt du mode inversé de l’EC en zone ?

Answer 13

meilleure résolution d’un mélange d’anions

Question 14

Principe de l’EC en gel ?

Answer 14

• combiner une séparation électrophorétique et un tamisage moléculaire * utilisant un capillaire préalablement rempli d’un gel d’agarose, de
  méthylcellulose, de dextranes…*
• Séparation en fonction de la taille * Adaptée pour la séparation de composés de taille très différente mais qui possèdent un rapport charge/taille identique*

Question 15

Principe de l’EC ç focalisation isoélectrique ?

Answer 15

• adapté à la séparation de composés amphotères: protéines possédant des pHi différents
• Séparation réalisée dans un capillaire greffé afin d’éliminer le flux électroosmotique
  consiste à remplir le capillaire avec un mélange d’ampholytes capables
  de créer un gradient de pH puis les protéines amphotères migrent dans le capillaire jusqu’à ce qu’ils trouvent un pH équivalent à leur pHi (=focalisation). Ensuite il est possible de déplacer les composés séparés vers le détecteur par pression ou par voie
  chimique (= mobilisation)

Question 16

Principe de la Chromatographie Electrocinétique Micellaire ?

Answer 16

• Adapté à la séparation des espèces neutres ou d’espèces chargées de mobilité proche
• ajouter un tensioactif ionique
• séparation basé sur le partage des molécules entre une phase micellaire hydrocarbonée et une phase aqueuse mobile

Question 17

Quels sont les facteurs influant sur la séparation en EC ?

Answer 17

• pH de la solution
• Différence de potentiel V
• Géométrie du capillaire

Question 18

Avantages de l’EC ?

Answer 18

• Durée d’analyse 5-20 min
• Faible volume d’injection * µL parfois ordre du nL*
• Séparation à T° ambiante
• Faible coût d’utilisation

Question 19

Limites de l’EC ?

Answer 19

• Sensibilité moins sensible que la CLHP
• Précision * moins précise que celle effectuée par CLHP ou CPG en analyse quantitative*