Chimie ana : ANALYSE QUALITATIVE ET QUANTITATIVE EN CHROMATOGRAPHIE Flashcards
15/10/24 => Marylène Chollet-Krugler
Quelles sont les méthodes que l’on peut utilisées pour caractériser un produit lors d’une chromatographie ?
- Comparaison des tR
- Méthode des surcharges
- Méthode des indices de rétention de Kovats
- Couplage avec une technique d’analyse complémentaire
Principe de la comparaison des tR pour l’analyse qualitative d’une chromatographie ?
Comparaison du tR de l’échantillon avec celui d’un témoin (ou étalon) injecté dans les mêmes conditions opératoires
Principe de la méthode des surcharge pour l’analyse qualitative d’une chromatographie ?
=> Mélanges complexes
* Ajouter directement au mélange un témoin
* Après comparaison des chromatogrammes avec et sans le témoin, il en résulte soit une augmentation de la surface du pic soit l’apparition d’un pic supplémentaire
Principe de la méthode des indices de rétention de Kovats pour l’analyse qualitative d’une chromatographie ?
- Caractériser un soluté à partir de son indice de rétention I en comparant son comportement chromatographique en CPG à celui d’une série homologue de n-alcanes
de formule CnH2n+2 (avec n ≥ 5) - Indices de rétention dépendent uniquement de la nature de la PS, + reproductibles que les tR
- Bases de données en ligne répertoriant I de nombreux composés chimiques en fonction de la PS utilisée
Principe du couplage avec une technique d’analyse complémentaire pour l’analyse qualitative d’une chromatographie ?
- spectrométrie UV, masse, RMN
- puissants outils pour l’identification complète des constituants d’un mélange complexe
Objectif de l’analyse quantitative d’une chromatographie ?
détermination de la concentration des solutés
Sur quoi se base l’analyse quantitative d’une chromatographie ?
Sur le fait que l’aire des pics (ou la hauteur) est proportionnelle à la C° massique ou à la quantité de produit injecté
Quelles sont les problématiques qu’engendre le fait de relier le signal à la concentration en chromatographie ?
2 problèmes :
- connaissance de Ki qui dépend du réglage du chromatographe
- connaissance du volume exact injecté pour en déduire la concentration
Comment sont évitée les problématiques qu’engendre le fait de relier le signal à la concentration en chromatographie ?
=> Recours à des méthodes d’étalonnage : 3 méthodes
* Normalisation interne
* Étalonnage externe
* Étalonnage interne
Principe de l’étalonnage externe avec un seul point d’étalonnage ?
méthode basée sur la comparaison de 2 chromatogrammes effectués dans des
conditions identiques :
* Chromatogramme solution à doser
* Chromatogramme solution référence
De quoi dépend la précision des résultat de l’étalonnage externe avec un seul point d’étalonnage ?
- Des pesées de la substance de référence et de l’échantillon
- Des dilutions
- De la reproductibilité du volume d’injection
- Du maintien des conditions chromatographiques strictement constantes pendant l’étalonnage et le dosage
Quelles sont les différentes méthodes d’étalonnage externe ?
- étalonnage externe avec un seul point d’étalonnage
- étalonnage externe avec une gamme d’étalonnage
Principe de l’étalonnage externe avec une gamme d’étalonage ?
- Chaque point de gamme correspond à une solution référence de C° variable
- Etablissement de la droite de calibration Aref = f(Cref)
Méthode de l’étalonnage interne ?
Consiste à introduire dans la solution à doser et dans la solution référence une quantité identique d’une substance pure appelée étalon interne
Principe de la normalisation interne ?
- Très utilisée pour contrôle des HE
- Mesure de la somme des aires sous les pics → détermination du % relatif de chaque pic en faisant le rapport
Quand est ajouté l’étalon interne dans l’étalonnage interne ?
Dès la première étape de la préparation, subit les mêmes causes d’erreurs que l’éch. à doser: variabilité du volume injecté, interférences liées à la matrice, …
Comment se fait le choix de l’étalon interne ?
- ne pas être présent dans le mélange initial
- avoir un pic d’élution bien résolu par rapport aux autres pics
- avoir des propriétés et comportement chromatographique proches du composé à doser
- pureté >99 %
Quels sont les différents étalonnages internes existants ?
- étalonnage interne avec un seul point d’étalonnage
- étalonnage interne avec une gamme d’étalonnage
Quelles sont les limites de la normalisation interne ?
- Préalablement déterminer Kx, Ky et Kz ou considérer que les coef de réponses des composés sont identiques ?
- Tous les constituants doivent être identifiés par autant de pics séparés
Principe de l’étalonnage interne avec un seul point d’étalonnage ?
On compare 2 chromatogrammes :
- Chromatogramme d’étalonnage d’une solution de référence
- Chromatogramme de la solution échantillon
=> On note que AEI≠A’EI car il s’agit de 2 injections différentes : traduit la variabilité du volume
Principe de l’étalonnage interne avec une gamme d’étalonnage ?
1- préparation d’une gamme d’étalonnage : chaque point de gamme contient
une solution ref de conc. variable et un EI toujours à la même conc.
2- injection de la gamme
3- mesure de Aref et AEI de chaque point de gamme
4 - établissement droite Aref/AEI = f(Cref/CEI)
5- mesure de Aech et A’EI de la solution à doser
