Methoden der klinischen Chemie (Elektrochemisch/Trennmethoden/MS/Molekularbiologische Methoden) Flashcards
Wozu führt eine übermäßige Aspirin Aufnahme?
Metabolische Azidose (ist eine kleine Säure)
Ethylenglycol/Methanol
Abbau und Folgen? (Azidose/Alkalose?)
Beide Alkohole:
- Alkoholdehydrogenase -> Aldehyd
- Aldehyddehydrogenase -> Säure
Folge: Metabolische Azidose
Behandlung Methanol Vergiftung
Was ist sind die giftigen Komponenten die im Metabolismus entstehen?
- Formaldehyd -> Toxisch für Zellen
- Ameisensäure -> Viel saurer als Essigsäure -> Metabolische Azidose
Behandlung Methanol Vergiftung
Unterschied zwischen Methanol und Ethanol ADME?
Methanol hat toxischere Metabolite (Formaldehyd)
Ethanol hat Acetaldehyd (Kater am Morgen)
Essigsäure wird zu Acetyl-CoA umgesetzt
Ameisensäure muss über Niere langsam ausgeschieden werden.
Behandlung Methanol Vergiftung
Methanol -> Formaldehyd -> Ameisensäure
Wie kann man behandeln?
- ADH-Inhibitor z.B. Ethanol (Cognac) 1 Promille über mehrere Tage halten.
Oder 4-Methylpyrazol
- Hämodialyse (Entfernt Gifte). Ist sozusagen “Blutwäsche” (Normalerweise für Patienten mit Nierenschwäche)
- Gabe Folsäure. (Baut Ameisensäure ab)
- Gabe NaHCO3 (Behandelt Azidose durch Ameisensäure)
Ethylenglycol
Struktur?
Wie heißt der Stoff und gegen was wird er genutzt?
Fomepizol
Behandlung von akuten Vergiftungen mit Ethylenglycol verwendet. (Inhibiert die ADH)
Auf Liste der unentbehrlichen Arzneimittel der WHO
Serumeiweißelektrophorese
Für was?
Was wird ausgenutzt und wie sind dafür die Bedingungen?
Auftrennung von Proteinen im Serum über Spannung
Eigenladung des Proteins, dazu pH = 8,6 -> Säure deprotoniert -> Ladungsmenge groß
Serumeiweißelektrophorese
Von welchem Pol wandern die Proteine?
Was erhält man und wie wertet man es aus?
Von - zu +
(Proteine sind schließlich negativ geladen!)
Farbiges Bandenmuster -> Auswertung über Densitometrie
Serumeiweißelektrophorese
Zeichne das Bandenmuster eines gesunden Menschen
Welchen Anteil hat Albumin (%)?
Was bedeuten Erhöhungen bestimmter Fraktionen?
Albumin 60%
Erhöhungen einzelner Fraktionen ist Hinweis auf Erkrankungen
Ordne der richtigen Fraktion in der Serumeiweißelektrophorese zu:
HDL, VLDL, LDL
HDL: Alpha 1
VLDL: Alpha 2
LDL: Beta
Ordne der richtigen Fraktion in der Serumeiweißelektrophorese zu:
Alpha 1-Antitrypsin, Alpha 2-Makroglobulin, C3-Kompliment, Immunglobuline
Alpha 1-Antitrypsin: Alpha-1
Alpha 2-Makroglobulin: Alpha-2
C3-Kompliment: Beta
Immunglobuline: Gamma
Ordne der richtigen Fraktion in der Serumeiweißelektrophorese zu:
Saures Alpha 1-Glykoprotein, Haptoglobin, Transferrin
Saures Alpha 1-Glykoprotein: Alpha 1
Haptoglobin: Alpha 2
Transferrin: Beta
SDS-PAGE
(Def.)
Was wird getrennt?
Sodium-Dodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese
Trennung Protein nach Größe, da Menge angehefteter negativer Ladung proportional zur Größe des Proteins ist
2D-Gelelektrophorese
Ablauf?
Was für eine Alternative existiert anstatt 4. ?
- IEF (Auftrennung nach pH)
- SDS-PAGE (Auftrennung nach Größe)
- Silberfärbung (Detektion der Spots)
- Scannen (Rechnergestützte Analyse)
Spot isolieren und MS durchführen -> Proteomanalytik
Affinitätschromatographie
Ablauf?
Beispiel?
- Säule besitzt AK
- 1.Elution -> Gesuchtes Protein bindet an AK (Restliche Proteine werden eluiert)
- 2.Elution -> Verwende freien Liganden (kompetitive Hemmung von Protein) -> Erhalte gesuchtes Protein in Eluat.
Verwendung in Bestimmung des HbA1c-Wertes
Chromatographische Trennung
-> Erläutere Kationenaustauscher
Beispiel?
Säure besitzt SO3-
- > Wechselwirkung mit NH3+ von Aminosäure
- > Bindung
Beispiel: Bestimmung AS Muster im Plasma
HPLC
(Def.)
NP/RP?
Wer kommt bei RP als Erstes?
High Performance Liquid Chromatography
NP: Normal Phase (Stationäre Phase polar)
RP: Reverse Phase (Stationäre Phase unpolar)
Bei RP kommen die polaren Reste als Erstes
Warum wird bei AS keine UV/Vis Detektion verwendet und was wird stattdessen verwendet?
AS besitzen fast alle keine aromatischen Systeme -> Keine UV/Vis Detektion möglich.
Lösung: Verwende RP HPLC
LC-MS/MS- Isotopenverdünnungstechnik
Wozu dient diese Technik?
Dient zur quantitativen Massenbestimmung eines Analyten
LC-MS/MS-Isotopenverdünnungstechnik
Am Beispiel Cortisol erläutern:
- Was wird zur Probe hinzugegeben und wodurch unterscheidet sich dieser Stoff vom Analyten?
- Zugabe synthetisiertes Cortisol, welches mit Deuterium Isotopenmarkiert ist zum Cortisol der Probe (=Analyt)
- chemische Eigenschaften von Analyt und hinzugebenen Stoff sind gleich
- nur Unterscheidung im Molekulargewicht 363 Da und 366Da (=Isotopenstandard)
AS Analytik
Zeige die Reaktion einer Aminosäure mit Phthalaldehyd (ortho) + Mercaptoethanol
Phthalaldehyd (ortho)
Struktur
Mercaptoethanol
Struktur
AS Analytik
Die Reaktion von AS + Phthalaldehyd (ortho) + Mercaptoethanol ergibt ein Indolderivat.
- > Wie ändert sich die Lipophilie und warum?
- > Warum wurde diese Reaktion durchgeführt?
Nachweis?
Lipophiler, da das N-Atom geschützt ist.
Einführung eines chromophoren Systems
Nachweis bei 340 nm im UV-Detektor
AS Analytik
Wann kommen die modifizierten AS in der RP HPLC?
-> Aspartat, Glutamat, Serin, Lysin
Was ist bei Lysin besonders?
Aspartat, Glutamat, Serin kommen früh (polare Reste)
Lysin kommt sehr spät
-> Grund: Lysin besitzt zwei N-Atome, beide werden derivatisiert! -> Keine Ladung mehr -> Starke WW mit unpolarer Phase
AS Analytik
Zeige die Reaktion einer AS mit FMOC-Cl
Bei welchem pH-Wert läuft die Reaktion ab?
Nachweis welcher Wellenlänge?
pH Wert: 4,2
Nachweis bei: 313 nm
Was versteht man bei der AS Analytik unter einem gekoppelten Verfahren?
- Gaschromatographie
- Peak auswählen und Fragmentmuster analysieren mit MS
- In Datenbank mit anderen MS vergleichen
