Immunchemische Verfahren II Flashcards
Antikörper
Aufbau an IgG zeigen (Ketten)
Wodurch werden Ak zusammengehalten? (Bindungen)
Antikörper Aufbau
Zuordnen: Leichte und schwere Kette
VH und VL
CL, CH1, CH2, CH3
Welcher Bereich ist Fab-Fragment, Fc-Fragment?
Wo befinden sich die Antigen-Bindungsstellen?
Wie nennt man die Antigenbindungsstelle noch?
Woraus beseht es?
Paratop
Besteht aus mehreren CDR-Regionen
Fab
(Def.)
Fragment antigen-binding (Bereich des Antikörpers, der an ein Antigen bindet)
Unterschied im Aufbau von IgG, IgA und IgD im Vergleich zu IgM und IgE
IgG, IgA und IgD: Gelenkregion
IgM und IgE: Weitere konstante Domäne
Was sind die CDR-Regionen?
(Def.)
Was stellen sie dar?
Was ist die Summe der CDR’s?
Complementary Determining Region
Stellen die variablen Bereiche des Moleküls dar.
Mehrere CDR’s -> Paratope
Antigenbindungsstelle
Welche Region des AK besitzt diese?
VL und VH
Heidelberger Kurve
Was gegen was aufgetragen?
Präzipitation/Messignal gegen Antigenkonzentration
Wie lassen sich die einzelnen Bereiche der Heidelberger Kurve erklären?
Welcher Bereich ist dementsprechend für Analysen geeignet?
- Antikörperüberschuss (nahezu linearer Bereich) AK > AG
- Äquivalenzbereich AK = AG
- Antigenüberschuss AK < AG
Der Bereich des Antikörperüberschuss (da er nahezu linear ist -> Kalibrationsgerade)
Fc
(Def.)
Wofür notwendig?
Fragment Crystallizable region (Fc-region)
Interagiert mit Zelloberfläche (Fc-Rezeptor, z.B. Makrophage) und dem Komplementsystem
Wie ist die Beziehung zwischen B-Zellen mit ihren Rezeptoren und den zu erkennenden Antigen?
B-Zellen bilden VIELE VERSCHIEDENE Rezeptoren aus.
Wenn der Rezeptor ein Antigen erkennt -> Proliferation B-Zelle und Umwandlung in Plasmazelle -> Plasmazelle produziert Antikörper
Präzipitation
Wodurch entsteht es?
Zu was führt es?
Wie wird ausgewertet?
Wechselwirkung lösliches Antigen mit IgG
- > Führt zu Trübung
- > Auswertung mit Turbidimetrie oder Nephelometrie
Trypsin
Wo gebildet?
Was macht es und wozu braucht man es?
Wo wirkt es?
Im Pankreas
Eine Protease die Proteine abbaut um daraus AS zu gewinnen.
Im Dünndarm
Was ist das Problem bei zu stark erhöhten Trypsin Werten?
Was ist die Lösung?
Wäre Trypsin zu stark erhöht würde Gewebe abgebaut werden.
Antitrypsin ist der Gegenspieler von Trypsin und hält die Homöostase aufrecht.
Welche Fraktionen in der Serumeiweißelektrophorese sind bei einer Entzündung erhöht?
Wie ist der Antitrypsinspiel bei einer Entzündung?
Was bedeutet eine Entzünding in Kombination mit niedrigen Antitrypsin Spiegel?
Akkute Phase Proteine Alpha 1 und Alpha 2
Erhöhter Spiegel an Antitrypsin
Wenn Antitrypsin vermindert ist, obwohl ein Leberschaden (Hepatitis) vorliegt, so muss es sich um einen vererbten Defekt handeln.
Zu was kommt es bei der Gabe von falschem Spenderblut?
Welches Molekül ist für die Vermittlung dieses Problems verantwortlich?
Wie viele Bindestellen hat es?
Agglutination der Erythrozyten -> Erythrozytenabbau -> Hämolyse
IgM
10 Bindestellen -> Agglutiniert
4 typische Radionukleotide
125I, 14C, 3H, 32P
Wo wird HCG hergestellt und wo weißt man es nach?
In Plazenta hergestellt und im Urin nachgewiesen.
Wie wird ein Antikörper quantifiziert?
AK
AK
Ag
Erster AK ist mit einem Fluorophor (Z.B. Radionukleotid) verbunden.
Drei Voraussetzungen für einen Enzym Immunoassay
Affinität (Bildungsgeschwindigkeit Ag-AK-Komplex)
Avidität (Bindungsstabilität Ag-AK-Komplex)
Spezifität (Keine Kreuzreaktionen dürfen möglich sein!)
Aufbau heterogener kompetitiver Immunoassay
- AK auf Well fixieren
- +Probe
- Fluoreszenzmarkierte Ag, die mit der Probe kompetitiv um Bindestellen konkurrieren zugeben
heterogener kompetitiver Immunoassay
Zusammenhang zwischen Messignal und Antigenkonzentration?
Proportionalität?
Keine Probe -> 100% markiert
-> Lichtintensität maximal
Viel Probe -> Bindet an Ak
-> Lichtintensität vermindert
Probenkonzentration umgekehrt proportional zur Lichtintensität
Warum funktioniert der HIV Test erst nach 3 Monaten?
Weil der Körper Zeit braucht um gegen HIV Antikörper zu bilden und diese erst nach 3 Monaten nachweisbar sind.
Welche Zellen werden bei der HIV-Infektion primär befallen (genaue Bezeichnung)?
CD4-T-Lymphozyten
Wie heißen die drei Parameter, die bei einer HIV-Infektion gemessen werden?
HIV-RNA-Kopienzahl HIV-Antikörper CD4-T-Lymphozyten
Mit welcher modernen Methode können Sie die HIV-RNA-Kopienzahl ermitteln?
Real-Time-PCR
Mit welcher modernen Methode können Sie die Anzahl der mit HIV befallenen Zellen bestimmen?
Durchflußzytometrie
Beantworten Sie die folgenden Fragen zum HIV-Bestätigungstest mit Richtig oder Falsch! 1. Zur Bestätigung eines positiven Suchtestergebnisses wird oft eine Western-Immunoblot-Analyse durchgeführt 2. Zur Durchführung werden die Nucleinsäurefragmente des Virus entsprechend ihres Molekulargewichtes elektrophoretisch aufgetrennt und auf eine Membran übertragen 3. Zu den nachzuweisenden Virusproteinen zählen env, gag, oder pol-Proteine 4.Die aufgetrennten Proteine auf der Membran werden mit Patientenserum inkubiert 5. Die Detektion erfolgt z.B. mit einem markierten Sekundärantikörper 6.Der entstehende Immunkomplex, der detektiert wird, ist ein Sandwich-Komplex
- und 6. sind falsch, der Rest ist richtig. Zur Bestätigung eines positiven Suchtestergebnisses wird oft eine Western-Immunoblot-Analyse durchgeführt. Dafür werden Virusproteine (Antigene) entsprechend ihrem Molekulargewicht elektrophoretisch aufgetrennt und auf eine Membran übertragen, die dann als Teststreifen verwendet wird. Nachgewiesen wird ein Ag-Ak-Ak Komplex.
hEPO vs rEPO
Was ist das?
Wozu dient es?
humanes EPO und rekombinantes EPO
EPO dient der Neubildung von Erythrozyten
CERA
(Def.)
Wie hergestellt?
Was ist der Unterschied zu EPO?
Continuous Erythroiesis Receptor Activator
Rekombinant hergestellt
Verweilt im Körper länger als EPO
Was ist der Unterschied zwischen human und rekombinant?
Worin unterscheiden sich diese?
Wie kann man analytisch unterscheiden?
Unterschiedliches Glykosylierungsmuster
-> Es geht um die Verteilung von Sialinsäure im Peptid
Verteilung von Sialinsäure unterschiedlich
- > Isoelektrische Punkte unterschiedlich
- > Trennung über IEF möglich
human/rekombinant
Wie wird die Analyse durchgeführt?
- Trennung über IEF (Weil IEP unterschiedlich)
- Immunoblot-Einsatz hochspezifischer MAK
- Zweiter Immunoblot-Übertragung der spezifisch von MAK gebundenen AK
- Detektion über Chemoluminiszenz
- Erhalte Bandenmuster zur Auswertung
