Bioch : TTT DES MALADIES PAR THÉRAPIE GÉNIQUE (2)

Question 1

Quelles sont les différentes étapes de la thérapie génique ?

Answer 1

1) Isoler, modifier et cloner le gène thérapeutique
2) Réaliser un vecteur chargé d’amener le transgène dans le noyau cellulaire (On évalue l’identité, l’efficacité, la pureté et la stabilité des produits en thérapie génique
3) Administration du vecteur au patient
4) Vérifier la durée d’expression du transgène et les effets secondaires

Question 2

Quelle sont les étapes de la réalisation du vecteur chargé d’amener le transgène dans le noyau cellulaire ?

Answer 2

• Production du vecteur par cellules d’encapsidation
• Purification des vecteurs
• Contrôle des vecteurs (perdu leur capacité de lyse et vérification production de la protéine d’intérêt)
• Stabilité des vecteurs

Question 3

Vérifications vecteurs viraux ?

Answer 3

• séquençage
• Plage de lyse : vérifier transgène bien exprimé
• PCR : vérifier efficacité du transfert du transgène
• SDS-PAGE : vérifier expression de la protéine d’intérêt
• tests de sécurité et de stérilité : vérifier qu’il
  n’y a pas eu contamination par des bactéries

Question 4

Vérification vecteurs synthétiques ?

Answer 4

intégrité vecteur par HPLC sur couche mince

Question 5

Vérification plasmides ?

Answer 5

• Séquençage
• Séparation par gel d’agarose
• Spectrométrie

Question 6

Quels sont les types cellulaires utilisés pour le transfert ex vivo ?

Answer 6

C somatiques
- C souches adultes CD34+ (hématopoïétiques +++,
cutanées)
- C différenciées LT
- C cancéreuses : LB chez patients avec leucémie
lymphoïde

Question 7

Quels sont les effets secondaires que peuvent rencontrer les patients après thérapie génique ?

Answer 7

• Risque transmission verticale dissémination au niveau des gonades
• Potentiel d’oncogenèse
• Risque infectieux
• Risque de réponse immu / inflammatoire ou toxique