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Biología Molecular > vf.metodos de transferencia de material genetico > Flashcards

vf.metodos de transferencia de material genetico Flashcards

1
Q

en bacterias:

A

-conjugacion
-transduccion
-transformacion

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2
Q

conjugacion

-lederberg y tatum
-el sembrar juntas 2 cepas auxotrofas k12 e.coli se

A

aislaban en colonias

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3
Q

conjugacion

es el proceso de transferencia horizontal de material genetico entre una celula bacteriana donadora y

A

una receptora mediante el contacto directo o una conexion que las una

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4
Q

conjugacion

dna extracromosomico

A

plasmios

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5
Q

proceso mediante el cual el dna es trasnferido de una bacteria a otra mediante un bacterofago (particula fagica transductora, pseudovirion)

A

transduccion

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6
Q

transduccion

tipos

A

-generalizada
-especializada

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7
Q

transduccion

transferencia de cualquiere region del genoma bacteriano

A

generalizada

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8
Q

transduccion

transferencia de loci adyacentes al sitio de integracion del profago

A

especializada

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9
Q

transduccion

tambien se utiliza para designar el proceso mediante el cual el adn exogeno es

A

introducido en un celula mediante un vector viral

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10
Q

transduccion

inicialmente un bacteriofago infecta a una bacteria y puede

A

integrarse en el genoma bacteriano (profago) manteniendo el ciclo lisogenico antes de activar el ciclo litico(vegetativo)

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11
Q

transduccion

el adn puede integrarse al genoma de la bacteria por

A

recombinacion sitio especifica (homologia de secuencia)

de esta forma permanece en la bacteria de forma establela nueva informacion genetica

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12
Q

variacion hereditaria de una celula bacteriana susceptible, originada por la captacion de adn desnudo libre en el medio, con la posterior integracion del adn exogeno en el genoma celular

A

transformacion

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13
Q

celula que ha sido transformada

A

transformante

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14
Q

principio de transformacion por

A

griffit 1928

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15
Q

transduccion

una bacteria muerta se degrada y libera fragmentos de adn al entorno, otra bacteria puede

A

captar ese ADN

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16
Q

estado fisiologico caracteristico limitado en el tiempo que permite captar adn del medio exterior, influido por factores ambientales como:
-densidad celular del cultivo
-t°
-ph
-nutrientes

A

competencia

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17
Q

competencia

es variable en cada especie capaz de

A

experimentar transformacion

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18
Q

competencia

codificada en el genoma o lograda de

A

forma artificial

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19
Q

tipos de transformacion

A

-natural
-artificial

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20
Q

transformacion natural

en algunas especies de bacterias, que cuentan con la maquinaria especifica para llevar

A

el adn a traves de la membrana

codificada en los genes celulares

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21
Q

tranformacion artificial

no esta codificada en los genes celulares, si no que es

A

inducida por procedimientos en donde las celulas son convertidas en permeables (competentes) atraves de condiciones que normalmente no ocurren en la naturaleza

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22
Q

transformacion artificial

muchas bacterias (celulas en general) carecen de sistemas

A

naturales de transformacion

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23
Q

transformacion artificial

se ha conseguido inducir el estado de competencia en celulas que no lo

A

presentan de forma natural (e.coli)

24
Q

transformacion artificial

estas tecnicas se basan en tratamientos quimicos y fisicos que producen microporos en la celula, lo que permite la

A

introduccion de dna exogeno de modo bastante eficiente

25
Q

transformacion artificial

se puede realizar de forma

A

-quimica
-microinyeccion
-lipofeccion
-electroporacion
-vectores virales
-biobalistica

26
Q

quimica

las celulas se incuban en hielo como el dna exogeno en presencia de cationes divalente como Ca+ (CaCl) lo cual

A

prepara las membranas celulares para ser permeables al DNA exogeno

27
Q

quimica

enseguida las celulas son incubadas a 42°por 30s (shock termico) lo que causa que el

A

dna entre en las celulas

28
Q

electroporacion

aumento de la permeabilidad de la membrana celular mediante

A

aplicacion de un campo electrico (10-20kV/cm)

29
Q

electroporacion

se forman poros a traves de los cuales puede entrar el dna

A

exogeno

30
Q

electroporacion

una exposicion excesiva a campos electricos puede causar

A

la muerte celular

31
Q

vectores virales

se aprovecha la capacidad natural que tienen los virus de ingresar su informacion genetica a

A

la celula blanco

32
Q

vectores virales

se selecciona un virus adecuado en base a su estructura y se fabrican

A

(pseudoviriones) conteniendo la info genetica de interes

33
Q

vectores virales

pueden obstaculizar la replicacion de

A

un virus

34
Q

biobalisitica

pequeñas particulas de oro o tungsteno cubiertas de adn se

A

disparan a las celulas

35
Q

biobalisitica

algo del material genetico se quedara en las celulas,

A

transformandolas

36
Q

biobalisitica

la eficiencia de trasnformacion es baja, pero la mayoria de las

A

plantas pueden ser transformadas por este metodo

37
Q

para que queremos incorporar dna exogeno en una celula?

A

-clonacion in vivo de ese dna exogeno
-producir y purificar la proteina para la cual codifica dicha secuencia (ej obtencion de insulina humana a partir de e coli)
-estudiar en la celula la expresion de formas alteradas de dicha proteina ej dominios individuales, proteinas de fusion o quimericas, en enfermedades neurodegenerativas, etc
-estudiar la carencia de proteinas especificas
-crear organismos geneticamente modificados
-terapia genica

38
Q

describe una variedad de procesos que pueden usars para producir copias geneticamente identicas en un ente biologico

A

clonacion

39
Q

clonacion

tipos

A

-dna
-proteina

40
Q

clonacion

dna

A

-in vitro/acelular-pcr
-in vivo/celular-amplificacion de moleculas de acido nucleico mediante su introduccion asistida por vectores, en celulas en cultivo

41
Q

clonacion

proteina

A

-sistemas de traduccion in vitro
-in vivo-celular

42
Q

clonacion

proteina

produccion de proteinas mediante la introduccion asisitida de vectores en celulas en cultivo, de la informacion genetica requerida para la sintesis de dicha proteina

A

in vivo, celular

43
Q

clasificacion de vectores

A

-vector de clonacion
-vectorde expresion

44
Q

vector de clonacion

su finalidad es almacenar secuencias y permitir la obtencion de grandes cantidades del inserto

A

vector de clonacion

45
Q

vector de clonacion

-capacidad de expresar el dna recombinante
-su objetivo es producir un transcrito (rna)o la proteina producto de ese transcrito

A

vector de expresion

46
Q

vector de clonacion

tiene la caracteristica de poseer:

A

-secuencias que le permiten mantener su replicacion y la del dna que transportan, independientemente del dna genomico
-secuencias codificantes para un gen de seleccion, el producto del gen no debe de estar presente en el tejido uorganismo. para metodos geneticos o de seleccion fenotipica
-sitios multiples de clonacion

47
Q

-secuencias que le permiten mantener su replicacion y la del dna que transportan, independientemente del dna genomico

A

origen de replicacion y secuencias reguladoras en su caso

48
Q

-secuencias codificantes para un gen de seleccion, el producto del gen no debe de estar presente en el tejido uorganismo. para metodos geneticos o de seleccion fenotipica

A

-genes de resistencia (ampicilina)
-genes reporteros (lacZ b-galactosidasa, gfp proteina verde fluorescente, luciferasa, etc
-genes que completan defectos nutricionales en cepas mutantes (e.coli trp1, para crecer en medio carente de trp)

49
Q

-sitios multiples de clonacion

A

permite la seleccion de sitios de restriccion para la clonacion

50
Q

vector de expresion

presenta algunas caracteristicas adicionales a las del vectorde clonacion

A

-secuencias reguladoras
-promotor fuerte/debil inducible/no inducible
-operador
-sitio de union a ribosoma (SUR)
-secuencia de termino de la transcripcion
-secuenciqa de poliadenilacion
-codon de inicio y parode la traduccion

51
Q

-region potenciadora/promotor de CMV, que permite una fuerte expresion constitutiva en muchos tipos de celulas
-sitio de poliadenilacion de SV40 (viris vacoulado del simio)
-sitio multiple de clonacion

A

vector pCMVTnT

52
Q

prodecimiento general

A

1.preparacion del inserto
2.preparacion del vector
3. preparacion de la construccion o constructo final
4. transformacion
5. seleccion de transformante
6.propagacion de tranformantes
7. purificacion de vectores o proteinas recombinantes

53
Q

procedimiento

el dna se corta con la o las enzimas de restriccion adecuadas

A

preparacion del inserto

54
Q

procedimiento

el policonector o sitio multiple de clonacion MCS permite emplear cualquier combinacion de enzimas de restriccion

A

preparacion del vector

55
Q

procedimiento

union covalente in vitro del inserto de DNA al vector cortado empleando una ligasa

-la especificidad depende del tipo de extremos

A

preparacion de la construccion

56
Q

procedimiento

-una vez que la celula bacteriana ha sido transformada, esta crece en medios de cultivo selectivos solidos
-metodos geneticos o de seleccion fenotipica
-levantamientos de colonias o placas

A

seleccion de transformantes

57
Q

procedimiento

se seleccionan las colonias de interes y se crecen en medio liquidos

A

propagacion de transformantes

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