Extracción y cuantificación de proteínas

Question 1

extracción de proteínas

Answer 1

-disrupción mecánica
+de tejidos principalmente, no necesaria si la muestra proviene de cultivo celular

-lisis celular
-separacion de mebranas y restos celulares
-precipitacion de proteinas solubles
-centrifugacion
-resuspensión de proteínas

Question 2

disrupcion mecanica de muestras:

Answer 2

-licuadora
-homogenizador Dounce
-homogenizador de ultrasonidos
-pulverizacion en nitrogeno liquido
-perlas de vidrio

Question 3

metodo:
licuadora

Answer 3

descripcion: la muestra se tritura mediante cuchillas rotatorias
tipo de muestras: gran cantidad de tejido

Question 4

metodo: homogenizador dounce

Answer 4

d: tubo de vidrio con piston ajustado maja las celulas por accion de corte
tm: celulas tisulares; util para protocolos de enriquecimiento de proteinas mitocondriales o nucleares

Question 5

metodo. homogenizador de ultrasonidos

Answer 5

d: ondas de sonido emitidas por una sonda para romper las membranas celulares
tm: celulas, tejidos bacterinao

Question 6

m. pulverizacion en nitrogeno liquido

Answer 6

d: las muestra se pulveriza utilizando un mortero y una almirez refrigerados
tm: tejido animal o vegetal

Question 7

m. perlas de vidrio

Answer 7

d: la ruptura celular se produce por agitacion de las perlas de vidrio
tm: levaduras

Question 8

buffer lisis con:

Answer 8

1. inhibidores de proteasas
2. detergente (sds, desnaturalizante; triton X-100 no desnaturalizante)
3. algunos agentes estabilizadores

Question 9

inhibidores de proteasas

Answer 9

cocktel de diferentes inhibidores cada uno con especificidad para diferentes proteasas en particular, evitando la degradacion global de las proteinas en el extracto

Question 10

ejemplo de sustancias utilizadas para la lisis celular:

Answer 10

-edta
-sacarosa o glucosa
-detergente
-glicerol
-sacarosa
-nucleasad (dnaasa, rnaasa)

Question 11

inhibidores de proteasa ejemplos:

Answer 11

-aprotinina
-edta
-egta
-leupeptin
-pepstatina A
-pmsf

Question 12

centrifugacion

Answer 12

-al centrifugar en el sobrenadante se encuentran todas las proteinas solubles de la celula y en el pellet las membranas y proteinas hidrofobicas de membrana, las cuales pueden ser tambien de interes

Question 13

precipitar

Answer 13

-precipitar las proteinas solubles del sobrenadante
+sulfato de amonio (NH4)2SO4, no desnaturalizante
+etanol y acetona

Question 14

cuantificacion de proteinas

Answer 14

-ensayo de bradford
-es el mas ampliamente utilizado
-se basa en el colorante azul de Coomassie G-250 en una solución ácida, conforme reacciona con las proteinas se torna cafe- rojizo
-se realiza una curva patron con concentraciones conocidas
-se lee a 595 nm
-sensibilidad 1ug/ml