vc. pcr y sus variantes Flashcards
pcr,puede amplificar selectivamente una secuencia deseasa de adn de copia unica que se encuentra presente en una mezcla compleja de
moleculas de adn sin purificacion previa de la secuencia de interes
sintesis de adn durante la pcr
los primers o cebadores (oligonucleotidos) logran que solo se amplifique una zona del adn en
la pcr
sintesis de adn durante la pcr
la adn polimerasa termoestable sintetiza la hebra complementaria incorporando los deoxinucleotidos trifosfato (dNTPs) libres (A T G C) del medio de reacción, inicialmente dirigida por
los primers o cebadores
sintesis de adn durante la pcr
ciclos controlados de temperaturas de desaturalizacion,
alineamiento y elongacion
mezcla de reaccion
dna
primers o cebadores (oligonucleotidos)
taq polimerasa
dNTPs (A T G C)
aumentos de t° para romper
los puentes de hidrogeno
la t° de desnaturalizacion usualmente es de
94 a 95°c
t° mayor o igual a 90°c evitan la
renaturalizacion del dna
oligonucleotidos especificos (20-23nt) cuya secuencia es complementaria a los extremos del fragmento (zona del DNA) que se desea amplificar
primers o cebadores
al disminuir la t° los primers hibridan especificamente en los extremos de la secuencia
blanco
*un primer en cada hebra
los primers dirigen a la adn polimerasa que sintetiza la hebra complementaria incorporando
los nucleotidos libres ( A T G C) del medio de reacción
al final del 1er ciclo se obtienen
2 moleculas de ADN doble cadena parcial que contienen la secuencia blanco
solo el ADN que contiene la secuencia blanco es copiado ya que la polimerasa solo puede
copiar moleculas que tienen el cebador unido
al final de 2do ciclo se han obtenido 4 moleculas de adn doble cadena parcial que contienen
la secuecia blanco
al final del 3er ciclo se han sintetizado 8 moleculas de ADN doble cadena que contienen la
secuencia blanco
al final del 4to ciclo se han sintetizado
16 moleculas de ADN doble cadena que contienen la secuencia blanco
al final de 5to ciclo se tienen
32 moleculas de ADN doble cadena que contienen la secuencia blanco
despues de 30 ciclos hay mas de
1x10*9 moleculas del producto especifico y solamente 60 moleculas parcialmente doble cadena mas largas
tiene la capacidad de mantener cambios de temperatura ciclicos de forma precisa
maquina de pcr
pcr punto final o convencional
podemos considerar que un mayor numero de copias de dna molde da una banda mas
intensa del amplificado (hasta cierto punto ya que cantidades excesivas de dna molde inhiben la reaccion)
