Inmunotecnicas

Question 1

antigeno

Answer 1

-molecula que induce la formación de al menos un anticuerpo especifico
-tiene uno (al menos) o mas epitopes

Question 2

epitope

Answer 2

-region de la molecula del antigeno que es reconocidda por el anticuerpo, formada por aa (secuencial/lineal o conformacional/discontinuo)

Question 3

anticuerpo

Answer 3

-proteina serica conocida como ig que reconoce especificamente a un epitope del antigeno
-la region constante (fc) es especifica de especie

Question 4

anticuerpo monoclonal

Answer 4

-anticuerpo producido por un solo clon de linfocitos b

Question 5

anticuerpos policlonales

Answer 5

-mezcla heterogenea de anticuerpos producidos por diferentes clones de celulas B
(purificacion de sueros de animales inmunizados)

Question 6

EMSA
electrophoresis mobility shift assay

Answer 6

-puede considerarse una inmunotecnica al emplearse un anticuerpo especifico contra la proteina de union al acido nucleico (super retraso en gel)

Question 7

inmunohistoquimica

Answer 7

-herramienta para identificar y localizar antigenos (proteinas) en una muestra de tejido; (histologia-citoarquitectura, inmunohistoquimica-distribucion)

Question 8

inmunohistoquimica
metodo directo

Answer 8

-anticuerpo primario especifico para el antigeno que estamos tratando de identificar, acomplado a una enzima

Question 9

inmunohistoquimica
metodo indirecto

Answer 9

-anticuerpo primario de una especie (raton o conejo) en contra del antigeno que estamos tratando de identificar
-anticuerpo secundario, contra la fc la especie donde se obtuvo el anticuerpo primario, acoplado a una enzima

Question 10

metodología

Answer 10

-fijacion: inmoviliza las celulas y las preserva, une covalentemente las moleculas proteinas a sus vecinas (p-formaldehido, glutaraldehido, citrato ph, edta p.h 9.0)

-cortes: cortes finos por un microscopio

-en cualquier caso, un sistema de deteccion o visualizacion, cromogeno para la enzima

-montaje

Question 11

higado, virus de la hepatitis B

Answer 11

-HBcAg y HBsAg
-indica replicacion activa del virus

Question 12

microscopia de fluorescencia

Answer 12

-detectar especificamente algunas proteinas u otras moleculas en celulas y tejidos
-fluorocromo

Question 13

flurocromo

Answer 13

-molecula fluorescente
-una parte de ella (flouroforo) absorbe la luz de una determinada longitud de onda y emite luz de otra longitud de onda mas larga

Question 14

inmunohistoquimica
metodo directo

Answer 14

anticuerpo primario especifico para el antigeno (Ag) que estamos tratando de identificar, acoplado a un flurocromo (f)

Question 15

inmunohistoquimica

Answer 15

-anticuerpo primario de una especie (ej. raton o conejo) en contra del antigeno (ag) que se esta estudiando
-anticuerpo secundario acoplado a un fluorocromo (f)
-el anticuerpo secundario reconoce especificamente la region constante (Fc) de la especie donde se obtuvo el anticuerpo primario

Question 16

colocalizacion

Answer 16

-superposicion espacial entre dos etiquetas fluorescentes diferentes

Question 17

contratincion

Answer 17

-empleo de diferentes moleculas al mismo tiempo en una preparacion
-ej. empleo de diferentes pares de anticuerpos primario/secundario. La tincion de nucleos se logra con DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol) o ioduro de propidio

Question 18

microscopia confocal de fluorescencia

Answer 18

-permite obtener una imagen de la arquitectura tridimensional de una celula o un tejido

-utiliza metodos electrnicos que permite enfocar un plano de una muestra eliminando la luz que proviene de las zonas fuera de foco superiores e inferiores a ese plano

-a partir de una serie de secciones opticas obtenidas a diferentes profundidades, archivadas en un ordenador, resulta sencillo construir una imagen tridimensional

-de otra forma, el proceso de obtencion de secciones finas, se pierde informacion respecto a la tercera dimension

Question 19

microscopio de fluorescencia

Answer 19

1. filtro: deja pasar solamente la luz de cierta longitud de onda
2. filtro: deja pasar la señal fluorescente de cierta longitud de onda especifica
3. espejo dicroico: refleja la luz de cierta longitud de onda y transmite la luz a una long de onda mayor

Question 20

ej. nucleo de un fibroblasto

Answer 20

-el BrdU, agregado como un breve pulso, identifica las regiones en proceso sintesis activa de DNA
-DNA polimerasa y PCNA colocalizan en regiones de sintesis activa de DNA

Question 21

parametros medibles por citometria de flujo
-marcaje con fluorescencia

Answer 21

-se puede detectar cualquier molecula en la celula, en tanto que tengamos un anticuerpo especifica para ella, acoplado a un flurocromo

-las celulas pueden contarse
-las celulas pueden incluso ser separadas y recuperadas (cell sorting)

Question 22

citometria de flujo

Answer 22

-se emplea en el recuento y clasificacion de celulas segun sus caracteristicas
+morfologicas:
-tamaño
-granularidad

+presencia de biomacadores
-marcados especificamente meduante anticuerpos acoplados a flurocromos

Question 23

poblaciones leucocitarias

Answer 23

nota. la baja cantida de eosinofilos y basofilos hace que en general no se definan en base a FSC y SSC

Question 24

pureza y viabilidad de poblaciones celulares

Answer 24

-ej. linfocitos T cooperadores (CD4+) y citotoxicos (CD8+)
-un compuesto como el ioduro de propidio atraviesa la membrana celular alterada en celulas muertas y las tiñe
-las celulas muertas no presentan fluorescencia en ese canal

Question 25

elisa
ensayo de inmunoabsorcion ligado a enzima

Answer 25

permite evaluar a una proteina de manera cuantitativa

+directo
+indirecto
+tipo sandwich

Question 26

elisa
directo:

Answer 26

ej. deteccion de Ag en sangre u orina

Question 27

elisa
indirecto

Answer 27

ej. deteccion de Ag con un solo secundario acoplado a enzima-cambiando el primario o deteccion de anticuerpo (HIV-SARS-COV-2)

Question 28

elisa
tipo sandwich

Answer 28

ej. deteccion de Ag, mas sensible, el Ag se retiene en la placa mediante su union especifica al anticuerpo de captura y el segundo a-Ag es policlonal; se amplifica la señal VS directo e indirecto

Question 29

western blot
clasificacion

Answer 29

1. electroforesis
   2.transferencia
   -electrotransferencia
   -difusion simple o pasiva
2. inmunodeteccion

Question 30

western blot

Answer 30

-permite la deteccion mediante un anticuerpo especifico de una proteina dentro de una muestra biologica

+estimar el tamaño de la proteina (corrimiento electroforetico)

+evidenciar isoformas (variantes alelilas que generan distintas fromas de la misma proteina, splicing alternativo, o maduracion diferencial)
+podrian ser reconocidad por el mismo anticuerppo pero variaran en peso molecular

+comparar los niveles (cantidad) de proteina entre muestras

Question 31

proteina de difusion con una etiqueta de epitopo

Answer 31

-comunmente la proteina blanco esta inalterada y se asume que conserva su fx y localizacion normal
-la etiqueta es una secuencia proteica corta que es reconocida fuertemente por un anticuerpo comercial bien caracterizado
-se puede emplear:

+inmunofluorescencia: el anticuerpo esta unido al fluorocromo

+inmunoprecipitado: permite identificar interacciones funcionales proteina-proteina con proteinas hasta ese momento desconocidas

Question 32

inmunoprecipitado:

Answer 32

-el complejo proteico puede estar formado por varias proteinas, las cuales seran en seguida estudiadas

-una variante puede ser la purificacion del complejo proteico por columna de afinidad, inmovilizando el anticuerpo en la columna