Investigacion de enfermedades causadas por virus Flashcards
efectos citopaticos
-cambios morfologicos visibles en microscopia
-perdida de adherencia al sustrato e inhibicion por contacto redondeamiento celular, agregacion celular, formacion de sincitios, cuerpos de inclusion
sincitios
celulas con varios nucleos resultante de la fusion de varias celulas
cuerpos de inclusion
acumulos intracelulares de viriones o subunidades virales
pueden romper la estructura y fx celular, y producir la muerte
centrifugacion en gradiente de densidad
-isopicnica, igual densidad, equilibrio de densidades
-sacarosa o cloruro de cesio
titulacion de virus
-fisicos: no distingue particulas infeccionsas de no infeccionsas
-biologicos: distingue particulas infeccionas de no infecciosas
fisicos:
-microscopia electronica
-hemaglutinacion
-qpcr
-medicion de densidad optica
biologicos:
-metodo de punto final
-concentracion de unidades infeccionsas
+pfu
+ensayo de enfoque
qpcr
numero de genomas virales por celula
medicion de la densidad optica
-espectrofotometria
-la turbidez de una suspencion viral aumenta en la medida en que hay mas virus
metodo de punto final
replicas de diluciones seriadas que son inoculadas y permite determinar la dilucion que resulto en la infeccion el 50% de las replicas (dosis infectiva 50 ID50 en cultivo celular EID50 en huevos
titulacion viral por microscopia electronica
muestra del stock viral mezclada con una concentracion conocida de particulas de latex
titulacion viral por hemaglutinacion
-muchos virus tienen la capacidad de expresar proteinas de union a la celula a traves del reconocimiento del acido sialico (acido N-acetilneuraminico) presente tambien en eritrocitos
-unidad hemaglutinacion (uha) minima cantidad de virus requerida para causar aglutinacion
-titulo (uhu/ml)
titulacion viral por ensayo de enfoque
-para virus transformantes
-las celulas crecen como focos o pilas de celulas que se tiñen y pueden ser contadas
multiplicidad de infeccion -moi-
-cantidad promedio de virus que se adiciona por cada celula en una infeccion
+particulaes virales/celulas
+pfu/celulas
+tcid50/celula
-muy importante en protocolos de investigacion
-moi asegura que todas las celulas en el cultivo esten infectadas y lo mas sincronizadas posible
viroplasma
-inclusiones citoplasaticas densas en donde se replica dsrna y se empaquetan las particulas virales
-retavirus y otros miembros de la familia reiviridae (clase lll baltinmore)
para la mayoria de virus de dna y unos pocos de virus de rna…
la capside se transporta al nucleo donde se decapsida el genoma y se replica
receptores:
moleculas de superficie que unen al virus a la celula y promueven su entrada
-promueven fusion membranal y penetracion
-transmiten señales que promueven la fusion
-guian al virus a traves de la via endocitica
factores de union
ayudan a concentrar las particulas virales en la superficie celular incrementando su estrada
-no promueven activamente la entrada del virus ni median señales
-las interacciones con el virus no son altamente especificas
secuencia de eventos:
-segmentos de una proteina de fusion son insertados en la membrana blanco
-la proteina viral se repliega poniendo en cercania a ambas membranas viral y celular
-ambas membranas se fusionan formando un poro por el cual atraviesa el virus
clase 1
helices alfa
influenza, hemaglutinina
vih, gp41
ebola,gp2
sarscov2-s
clase 2
barriles b
flavovirus, e
alfavirus y bunyavirus
clase 3
proteina g con dos sas hidrofobicas
virus de la estomatitis vesicular vsv-g
rhabdovirus
herpes
particula viral inmadura:
-no es infectiva ya que es incapaz de fusionarse con las membranas celulares a traves del dominio lll(e)
-el precursor (prM) se encuentra formando heterodimeros prME
proteolisis de la glicoproteina prM genera…
un prepeptido de 91 aa y la proteina M permanece anclada a la membrana hacia el lumen del RE (rearrelgo tridimencional)
particula viral madura:
homodimero de e:e
virus de la influenza:
-hemaglutinina
-proteina situada en la envoltura viral
-reconoce el acido sialico en celulas del sistema respiratorio
-se conocen 15 tipos de HA, siendo H1,H2,H3 las mas comunes en virus que afectan a los humanos
evita que el virus quede atascado en la superficie celular cuando salga de la celula recien formada:
-baja afinidad por el receptor
-enzima que destruya al receptor
-disminucion de la expresion del receptor
-mediante la ruptura catalitica de una proteina estructural durante la maduracion
sars cov 2
-ssRNA+ 30 000 nt
-60 a 40 nm de diametro
-4 proteinas estructurales
-SEMN
ECA2. enzima convertidora de angiotensina
S
homodimero de glicoproteinas cuyo ensanchamiento distal de sus pliegues forma las puntas de superficie, une su dominio al receptor ceular ECA2/ACE2
E
pequeña proteina de la envoltura
M
proteina de la matriz que une la envoltura con el nucleo virico
N
fosfoproteina de la nucleocapside
