Investigacion de enfermedades causadas por virus Flashcards
efectos citopaticos
-cambios morfologicos visibles en microscopia
-perdida de adherencia al sustrato e inhibicion por contacto redondeamiento celular, agregacion celular, formacion de sincitios, cuerpos de inclusion
sincitios
celulas con varios nucleos resultante de la fusion de varias celulas
cuerpos de inclusion
acumulos intracelulares de viriones o subunidades virales
pueden romper la estructura y fx celular, y producir la muerte
centrifugacion en gradiente de densidad
-isopicnica, igual densidad, equilibrio de densidades
-sacarosa o cloruro de cesio
titulacion de virus
-fisicos: no distingue particulas infeccionsas de no infeccionsas
-biologicos: distingue particulas infeccionas de no infecciosas
fisicos:
-microscopia electronica
-hemaglutinacion
-qpcr
-medicion de densidad optica
biologicos:
-metodo de punto final
-concentracion de unidades infeccionsas
+pfu
+ensayo de enfoque
qpcr
numero de genomas virales por celula
medicion de la densidad optica
-espectrofotometria
-la turbidez de una suspencion viral aumenta en la medida en que hay mas virus
metodo de punto final
replicas de diluciones seriadas que son inoculadas y permite determinar la dilucion que resulto en la infeccion el 50% de las replicas (dosis infectiva 50 ID50 en cultivo celular EID50 en huevos
titulacion viral por microscopia electronica
muestra del stock viral mezclada con una concentracion conocida de particulas de latex
titulacion viral por hemaglutinacion
-muchos virus tienen la capacidad de expresar proteinas de union a la celula a traves del reconocimiento del acido sialico (acido N-acetilneuraminico) presente tambien en eritrocitos
-unidad hemaglutinacion (uha) minima cantidad de virus requerida para causar aglutinacion
-titulo (uhu/ml)
titulacion viral por ensayo de enfoque
-para virus transformantes
-las celulas crecen como focos o pilas de celulas que se tiñen y pueden ser contadas
multiplicidad de infeccion -moi-
-cantidad promedio de virus que se adiciona por cada celula en una infeccion
+particulaes virales/celulas
+pfu/celulas
+tcid50/celula
-muy importante en protocolos de investigacion
-moi asegura que todas las celulas en el cultivo esten infectadas y lo mas sincronizadas posible
viroplasma
-inclusiones citoplasaticas densas en donde se replica dsrna y se empaquetan las particulas virales
-retavirus y otros miembros de la familia reiviridae (clase lll baltinmore)