Replicación del ADN Flashcards
¿por que fue roto el descubrimiento dogma central?
descubrimiento de la DNA polimeraza RNA dependiente
N15
isotopo pesado en el que se desarrollan las celulas inicialmente
N14
isotopo normal ligero
Los origenes de la replicación se encuentran cada:
100kbp
Tamaño promedio de una replicación:
100milpb
¿cuantos focos tiene el cromosoma eucariota?
100 y 300 focos que contienen +300 horquillas de replicacion c/u
tasa de replicacion de las bacterias:
50,000 pb/min
tasa de replicacion de eucariotas:
2,000 pb/min
tarda 1hr en copiarse todo el genoma
en mamiferos la fase S dura:
6 horas, no + del 15% de los replicones estan activos
bromuro de litio:
es mutageno y altera la replicacion
pb en el genoma:
350 millones de pb
ioduro de propidio:
DNA total
tiñe todo el material genetico
BrdU- FITC
analogo de T replicacion
flourece donde se acumula BrdU y puedes deterinar en que region ocurre la replicacion
replisoma:
-solo existe como complejo asociado a la estructura de la horquilla de replicacion
-mutante de detencion rapida
exonucleasas:
actuan sobre los extremos de DNA 5’ y 3’
endonucleasas:
actuan sobre enlaces internos de la molecula de DNA
dna replicasas:
participan verdaderamente en la replicacion
dna polimerasas dna dependientes:
particiapn en fx auxiliares como la reparacion
e. coli
dna pol l y pol ll
reparacion del dna
e. coli
dna pol lll
alfa
dna polimerasa dna E
e. coli
dna pol lll
replicasa
e. coli
dna pol lll
epsilon
exonucleasa 3’-5’ dnaQ
ecuariotas:
delta:
replicasa nuclear
eucariotas:
beta y epsilon
reparacion del DNA
eucariotas:
gamma:
replicacion de DNA mitocondrial
profreading:
actividad correctora 3´-5´exonucleasa
deslizamineto de replicacion
insertar u omitir un nucleotido
puede iniciar la sintesis a partir de nucleotidos libres:
rna polimerasas
sintetizar un rna sobre la cadena dna molde
cole1
hibridar un rna preformado con la cadena molde
retrovirus
melladura en el dna
circulo rodante en bacterias
cebado con una proteina que presenta un -OH
adenovirus
cadena retrasada:
crece globalmente de 3’-5’
fragmentos de okasaki
-100-2000 bases procariotas
-100-200 bases eucariotas
misma direccion de polimerizacion
primasa:
-comienza con la secuencia 5´-pppAG-3’ opuesta al molde 3’-GTC-5’
-actividad primasa se realiza en el primosoma al comienzo de la sintesis de la cadena conductora
-elongacion en el replisoma al comienzo de cada fragmento de okasaki
primosoma
cierra
replisoma
ceba
dna pol l. traslacion de melladuras
unica polimerasa con actividad 5´-3´exonucleasa
-durante la replicacion remueve los cebadores de RNA
correctora de errores 3’-5’*
en eucariotas donde no hay una polimerasa con actividad 5’-3’ exonucleasa
-RNAsa H1 (-endonucleasa-hace ruptura en dupleX RNA-DNA)
-FEN1/MF1-nucleada- elimina RNA
dna ligasa
sella la melladura
cofactores de la dna ligasa
-atp es cofactor en el fago t4 y mamiferos
-nad es cofactor en e. coli
ligasa tipo l
atp
ligasa tipo ll
nad
helicasa
-dnaB 5’-3’
-interacciona con el dna duplex y de cadena sencilla
-5´-3´es el molde de la cadena retrasada
SSB
-proteinas de union a la cadena sencilla de DNA
-mutantes de detencion rapida
holoenzima:
-alfa:centro catalitico DNA polimerasa
-epsilon:exonucleasa de 3’5’
-teta:ensamble de alfa y epsilon
-beta: tenaza. componente de procesividad que mantiene a la polimerasa sobre el dna
-gamma: delta, delta prima, psi, chi.cargador que coloca las subunidades b sobre el dna
-tau: componente de dimerizacion
complejo de preiniciacion
formado por un dimero beta, un complejo gamma y el DNA
tau
-conecta al primosoma (helicasa-primasa) con la polimerasa
-se incrementa 10x la velocidad de sintesis y la procesividad
proteina tus
-proteina 36kda
-actividad anti-helicasa
-sus helices alfa protruyen alrededor de la soble helice en el extremo que bloquea la horquilla de replicacion
elementos ter
e. coli
-23pb en el dna
-la sintesis de la cadena conductora continua hasta el elemento ter, la cadena retrasada inicia unos 50-100pb antes de alcanzar ter
para el orien de replicacion se requieren 6 proteinas:
-dna A
-dna B
-dna C
-HU
-girasa
-SSB
DnaB/DnaC
son el motor de inicio
Dna B
es la helicasa, desplaza a DnaA y activa a DnaG primasa
Girasa
quita vueltas disminuye la tension
SSB
estabiliza la cadena sencilla impidiendo el duplex
metilacion del origen de replicacion OriC
-11 copias de la secuencia GACT en el origen
-Dam metila la adenina en N6
timing en la replicacion procariota
-retraso en la metilacion
-represion de la transcripcion de dnaA
-inhibicion de la union de dnaA
-secuestro fisico del origen
seqA
proteina que retrasa la remetilacion de oriC y dnaA
MCM minicromosoma maintenance
-2,3,5 se unen al material cromosomico antes de la replicacion y se liberan posteriormente a la replicacion
-son ubiquitinados y degradados
-entran al nucleo solamente durante la mitosis
