Cultivo celular

Question 1

cultivo celular

Answer 1

conjunto de tecnicas que permiten el mantenimiento de las células ‘in vitro’, manteniendo al máximo sus propiedades fisiologicas, bioquimicas y genéticas

Question 2

in vitro

Answer 2

se refiere a una tecnica para realizar un eterminado experimento en una ambiente controlado fuera de un organismo vivo

Question 3

cultivo celular

Answer 3

-cultivo bacteriologico
-cultivo celular

Question 4

cultivo bacteriologico

Answer 4

-microorganismos
-bacterinas, hongos y parasitos

Question 5

cultivo celular

Answer 5

-celulas eucariotas (ej. organismos pluricelulares)
-sin embargo (unicelulares)
+protozoarios (paramecios, plasmodium, amebas)
+levaduras (hondos microscopicos unicelulares)
-en medicina se referiria a celulas representantes de un tipo celulas especifico (humano o especie de interes)

Question 6

ciclo de crecimiento microbiano

Answer 6

-curva que describe en ciclo entero de cremiento
-es el reflejo de eventos poblaciones no de celulas individuales
-en general las celulas procariotas crecen más rápido que las eucariotas

Question 7

fases del ciclo de crecimiento:

Answer 7

-latencia
-exponencial
-estacionaria
-muerte

Question 8

fase de latencia

Answer 8

-tiempo que tarda en comenzar el crecimiento de un microorganismo tras ser inoculado en medio fresco
-depende de la historia del inóculo, la naturaleza del medio y las condiciones de crecimiento

Question 9

fl
si un inoculo es fase exponencial se transfiere a medio fresco bajo las mismas condiciones de crecimiento…

Answer 9

no hay esencialmente fase de latencia y prosigue la fase exponencial

Question 10

fl
si un inoculo proviene de un cultivo viejo, las células están depletas de constituyentes esenciales…

Answer 10

para el crecimiento, se llevara tiempo sintetizarlos

Question 11

fl
si el medio cambia y se disponen de otros sustratos como fuentes de carbono por ejemplo…

Answer 11

se requiere sintetizar las enzimas que permitiran aprovecharlos, eso lleva tiempo

Question 12

fase exponencial

Answer 12

-es el estado más saludable de las células
-ideal para el estudio de enzimas u otros componentes celulares
-el numero de células se duplica en intervalos constantes de tiempo
-en un cultivo por lote (tubo cerrado), los organismos no crecen indefinidamente de forma exponencial

Question 13

un cultivo solo permanece en fase exponencial por un tiempo limitado:

Answer 13

-10 generaciones

Question 14

1 bacteria pesa:

Answer 14

1x10^-15kg

Question 15

peso de la tierra:

Answer 15

6x10^24

Question 16

fase estacionaria

Answer 16

-en realidad la fase estacionaria comienza por agotamiento de nutrientes o acumulación de desechos
-crecimiento crítico en fase estacionaria, no hay incremento neto en el número de células, algunas crecen mientras otras mueren

Question 17

fase de muerte

Answer 17

-es tambien exponencia, pero tipicamente mas lenta que la exponencial de crecimiento
-las celulas pueden permanecer viables durante meses o incluso años

Question 18

monitoreo del rendimiento de cultivos por

Answer 18

-las celulas dispersan la luz
-la turbidez de una suspension celular aumenta en la medida en que hay mas celulas presentes
-se mide la luz que atraviesa la suspension sin ser dispersada

Question 19

espectrofotometria

Answer 19

-2 organismos (tipos celulares):

+pueden tener densidades ópticas diferentes a tiempos similares de medición por diferencias en tamaños y formas o en velocidades de crecimiento
+el mismo valor de OD no necesariamente corresponde al mismo número de células

Question 20

cuando la turbidez es escesiva se pierde la correspondencia entre el número de células…

Answer 20

y la densidad óptica porque la luz dispersada de la fotocelda por una célula puede ser nuevamente enviada a la fotocelda por otra célula

Question 21

el cultivo celular a sido desarrollado gracias a:

Answer 21

-medios de cultivo (mucho mas complejos que para cultivo bacteriologico)
-disponibilidad de antibioticos
-instalaciones asépticas (salas, cabinas de flujo laminar, incubadoras)
-dispositivos de cultivo (frascos T, cajas petri)

Question 22

medios de cultivo

Answer 22

-tamponados para mantener un PH alrededor de 7.4
-indicadores de ph (rojo fenol), cambian de color a medida que aparecen catabolitos ácidos resultando del metabolismo celular
-antibioticos (ej. penicilina, estrreptomicina) y antimicoticos (anfotericina) para impedir la contaminacion

Question 23

medios de cultivo con suero:

Answer 23

-mezcla poco definida de macromoleculas adicionadas bajo la forma de suero fetal bovino o equino, o extracto crudo de embriones de pollo

Question 24

medios de cultivo libres de suero:

Answer 24

-quimicamente definidos con moleculas necesarias para la supervivencia y proliferacion como los factores de crecimiento

Question 25

condiciones de cultivo celular

Answer 25

-incubacion a 37° en una atmosfera de 5% de CO2, 95% aire
-frasco T. un recipiente tipico de 175cm2 puede contener aproximadamente 1x10^7 celulas adheridas y unas 1x10^8 celulas cuando se trata de lineas que crecen en suspención

Question 26

tipos de cultivo

Answer 26

-primarios
+monocapa
+suspencion

-secundarios
-lineas celulares (continuos)
-hibridomas

Question 27

cultivos primarios

Answer 27

-se preparan directamente a partir de un tejido u organo
-con o sin fraccionamiento previo para separar los disntintos tipos celulares
-las celulas conservan sus caracteristicas originales y su proliferacion es limitada
-pueden ser removidas del recipiente de cultivo para formar cultivos secundarios

Question 28

cultivos primarios
monocapa

Answer 28

-la mayoria de las celulas que forman los tejidos (a diferencia de las bacterias) no pueden vivir en suspencion, y requieren una superficie solida sobre la cual crecer y multiplicarse (anclaje-deoendiente)
-excepto las hematopoyaticas maduras
-confluencia: el area de anclaje disponible se haya toda cubiera de celulas
-este soporte generalmente es la base de una placa o frasco de plastico
-a veces los requerimientos son mas complejos y el plastico debe recubrirse con componentes de la matriz extracelular que rodea a las celulas en los tejidos, como colageno y laminina

Question 29

cultivo primario
suspencion

Answer 29

-celulas dispersas en el medio de cultivo
-alcanzan confluencia cuando el numero de celulas es grande y los nutrientes insuficientes

Question 30

cultivos secundarios:

Answer 30

-las celulas en monocapa confluente detienen su crecimeitno hasta que se las subcultiva (resiembra) a un recupiente con medio fresco
-las celulas frecuentemente mostraran distinas propiedades segun su origen:

+fibroblastos (mantienen la matriz extracelular en animales) secretran colageno
+celulas derivadas de tejido muscular esqueletico se fusionaran para generar firbas musculares con capacidad contractil espontanea
+celulas nerviosas extenderan prolongaciones
(axones) alectricamente excitables que podran establcer sinapsis con otras celulas

Question 31

lineas celulares

Answer 31

-transformación: inmortales, crecimiento aberrante (sin inhicion por contacto, ni anclaje-dependiente), malignas (diseminan e invaden), geneticamente inestables (anomalias/aberraciones cormosomicas numericas -aneuploides- y/o estructurales -ek. delecion, duplicacion)
-no todas las celulas humanas se transforman asi
-otra forma es introducir ciertos oncogenes (genes promotore de cancer) obtenidos de virtus (ej.hpv)
-las celulas de los roedores experimentan cambios geneticos espontaneos que las inmortalizan cuando son cultivadas

Question 32

fibroblastos humanos normales se dividen entre 25 y 40 veces en el cultivo, se les puede inmortalizar si se les provee…

Answer 32

del gen que codifica para la telomerasa

Question 33

HeLa (henrietta Lacks)

Answer 33

1952
primera linea celular humana
adenocarcinoma

Question 34

cultivo celular: ventajas

Answer 34

-pueden ser conservadas y almacenadas en nitrogeno líquido (a 196°C) por un largo tiempo manteniendo su viabilidad

Question 35

inestabilidad genetica

Answer 35

heterogeneidad

Question 36

hibrodimas

Answer 36

-cesar milstein. premio nobel de medicina
-produccion de anticuerpos monoclonales
-fusion de linfocitos B secretores de Ig (anticuerpos) y celulas derivadas de una linea tumoral de linfocitos B
-fusogeno: ej. polietilenglicol
-heterocarionte

Question 37

heterocarionte:

Answer 37

celulas con nucleos geneticamente diferentes separados pero con los contenidos citoplasmaticos compartidos

Question 38

HAT

Answer 38

-hipoxantina
-aminopterina
-timidina

Question 39

medio selectivo HAT

Answer 39

-aminopterina es un antagonista competitivo delacido dihidrofolico, vitamina necesaria en la sintesis de nucleotidos
-las celulas deben utilizar vias alternas para la sintesis de DNA
-estas vias alternas son defectivas en la linea celular tumoral pero estan intacta en las celulas de bazo
-solo celulas hibridas sobreviven
-HGPRT
-TQ

Question 40

HPGRT

Answer 40

hipoxantina guanina fosforibosil transferasa

Question 41

TQ

Answer 41

timidinoquinasa

Question 42

un heterocarionte puede entrar en mitosis…

Answer 42

produciendo una celulas hibrida en la cual las envolturas de ambos nucleos se han disgregado, permitiendo juntar los cromosomas de ambos en un único gran núcleo

Question 43

cada clon de celulas fusionadas produce…

Answer 43

un anticuerpo monoclonal y prolifera indefinidamente

Question 44

el anticuerpo monoclonal…

Answer 44

reconoce un único epítope antigénico

Question 45

epitope

Answer 45

region de la molecula del antigeno que es reconocida por el anticuerpo