TP électrophorèse

Question 1

comment on place les bandes dans l’étuve ?

Answer 1

le coin coupé vers la cathode (côté noir, négatif)

Question 2

quelle alimentation pour électrophorèse sur acétate de cellulose

Answer 2

-180 V

Question 3

combien de temps pour une électro sur acétate de cellulose ?

Answer 3

1h

Question 4

comment révéler les protéines

Answer 4

plonger bande face mat vers fond dans rouge ponceau et laissez colorer 5 min puis rincez dans 2 bacs remplis d’eau puis trempez dans 2 ou 3 bains successifs d’acide acétique à 5% jusqu’à disparition de la couleur puis enfin déposer sur papier absorbant

Question 5

comment évaluer la charge nette d’une protéine à un certain pH

Answer 5

On dispose des ≠ acides aminés, on les dénombre au sein de la protéine. Puis on regarde le pH et selon le Pka de l’acide aminé devinez s’il sera sous la forme acide AH ou basique A-. Donc la charge nette de chaque acide aminé = nombre fois où il y est * sa charge

Question 6

comment se placer en conditions dénaturantes pour électrophorèse sur gel d’agarose

Answer 6

mettre dans un ependorf la prot + mettre tampon de charge puis homogéinéiser par aspiration-refoulement et penser à percer le tube avec une aiguille dans couvercle puis incuber au bain marie

Question 7

quelle alimentation et environ combien de temps sur gel d’agarose

Answer 7

100 V et 30 min

Question 8

révélation du gel

Answer 8

3 rinçages du gel dans cristallin rempli d’eau (robinet). puis le plonger dans un bain de Coomassie et laisser colorer 15/20 min. Puis à nouveau laissez décolorer dans grande bassine d’eau

Question 9

quelles sont les 2 grandes conditions d’électrophorèse

Answer 9

1) conditions natives = sépararations e fait en fonction de l’encombrement
2) conditions dénaturantes (abolition conformation protéine + SDS qui permet uniformisation des charges) donc migration selon la masse moléculaire des protéines ==> déterminer le nombre de sous unités de la protéine