expérience métabo

Question 1

expérience d’Anfinsen

Answer 1

On sait déjà qu’il existait un lien entre structure I et structure II. On veut voir mon si lien entre structure I et structure 3D.
On utilise une enzyme dont la structure est bien connue et on la mélange des agents réducteurs (béta-mercaptoéthanol qui détruit les ponts désulfures) + agent dénaturant (urée abolit la structure III).
Débarassée de ces agents, l’enzyme reprend spontanément (pas de protéine chaperonnes + pas d’apport énergétique) sa conformation native = celle dont le niveau d’énergie est le + bas

Question 2

approche expérimentale des mécanismes d’insertion dans le réticule endoplasmique

Answer 2

synthèse in vitro de protéines puis mise en solution des protéines + portées –> protéines dégradées.
Même expérience mais en présence de microsomes rugueux + protases –> passage de certaines protéines dans les microsomes ==> intact. Ce passage dans le microsome rugueux est co-traductionnel.

Question 3

expérience d’insertion des protéines dans le noyau

Answer 3

injection de nucléoplasmine = grosse protéine dont on peut séparer la tête globulaire des queues par photolyse ménagée.

1) injection des nucléoplasmines intactes –> noyau
2) injection des têtes et des queues séparées –> juste les queues dans les noyaux ==> ici qu’il y a la séquence signal.

Question 4

mise en évidence de la glycolyse

Answer 4

Expérience de Buchner avec des extraits cellulaires de Levure dans solution de saccharose –> il observe une fermentation en alcool d’où 1ere découverte ==> fermentation même hors des cellules vivantes.
Expérience de Harden et Young : même expérience mais avec glucose et ajout de de Pi –> le Pi est incorporé dans un des composés intermédiaires. Expérience avec chauffage ou non ==> mise en évidence de réactions enzymatiques.
Expérience de Tatum réalisant fermentations incomplètes en inhibant l’expression de certains gènes ==> réactions enzymatiques successives et deviner quel substrat s’accumule etc ==> description.