Kolokwium II - techniki biologii molekularnej Flashcards
Jakie narzędzia stosujemy w inżynierii genetycznej?
- enzymy restrykcyjne
- odwrotna transkryptaza
Jaką funkcję pełnią bakteryjne endonukleazy restrykcyjne?
trawią DNA bakeriofagów
Jakie enzymy zabezpieczają bakteryjne DNA?
enzymy metylujące
Co to jest sekwencja palindromowa?
sekwencja, która odczytywana w tym samym kierunku (np. 5’→3’) na obu niciach jest taka sama
Z ilu nukleotydów składa się sonda?
około 20 nukleotydów
Jaką sekwencję ma sonda?
komplementarną do sekwencji, którą poszukujemy
W jaki sposób odbywa się analiza fragmentów restrykcyjnych metodą Southern blot?
- elektroforeza w żelu agarozowym
- denaturacja i przeniesienie na papier nitrocelulozowy
- hybrydyzacja z wyznakowaną sondą
- naświetlanie błony radiograficznej
Czym może być znakowana sonda?
radioaktywnym pierwiastkiem
W jakiej formie jest DNA na papierze nitrocelulozowym?
dwóch pojedynczych nici
Co to jest RFLP?
polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych
Gdzie możemy wykorzystać RFLP?
w diagnostyce chorób związanych z mutacją
Jak nazywa się DNA powstające dzięki aktywności odwrotnej transkryptazy?
cDNA
Co jest bardziej stabilne: mRNA czy cDNA?
cDNA
Na jakiej matrycy powstaje cDNA?
na matrycy mRNA
cDNA jest dwu- czy jednoniciowe?
dwuniciowe
Czym różni się cDNA od genomowego DNA?
nie posiada intronów
Czy inne typy RNA poza mRNA mogą być tłumaczone na cDNA?
nie
Dlaczego tylko mRNA może być matrycą dla cDNA?
startery oligo-dT są komplementarne do ogona poli-A
Jakie działanie ma RNaza (element odwrotnej transkryptazy)?
degraduje częściowo mRNA
Do czego wykorzystywane są resztki mRNA podczas odwrotnej transkrypcji?
jako startery dla polimerazy DNA
W jakim celu tworzymy biblioteki cDNA?
pozwalają na analizę profilu ekspresji genów w danej tkance
Co może służyć jako wektory?
- plazmidy
- bakteriofagi
- kosmidy
- sztuczne chromosomy (bakteryjne i grzybicze)
Jakimi metodami możemy powielić wybrany fragment DNA?
klonowalnie lub PCR
Na czym polega klonowanie genów?
na łączeniu fragmentów materiału genetycznego z wektorem molekularnym i namnażaniu ich w innym organizmie
Jakie ludzkie geny możemy namnażać w bakteriach?
- czynniki krzepnięcia
- czynniki przeciwzakrzepowe
- hormony
- interferony i interleukiny
- szczepionki
Jakie hormony możemy otrzymywać metodą klonowania?
insulinę, hormony wzrostu czy erytropoetynę
Co to jest PCR?
reakcja łańcuchowa polimerazy = szybka i wydajna metoda powielania wybranych fragmentów materiału genetycznego
Co musimy znać by powielić wybrany rejon metodą PCR?
sekwencje otaczające powielany rejon
Co umożliwia PCR?
- wykrywać obecność genów
- analizować ekspresję genów
- diagnozować choroby genetyczne
- powielać materiał do dalszych analiz
- diagnozować choroby zakaźne
Jakie wyróżniamy etapy PCR i w jakich warunkach one zachodzą?
- rozdzielanie nici i dodanie nadmiaru primerów (95°C)
- ochłodzenie (65°C) i hybrydyzacja primerów
- elongacja (58-72°C)
Jak wzrasta ilość otrzymywanych cząsteczek DNA w metodzie PCR?
logarytmiczne (2^n)
Ile cykli przeprowadza się w metodzie PCR?
20-40 cykli
Jakie wyróżniamy odmiany metody PCR?
- RT-PCR
- multiplex-PCR
- Real time-PCR
Na czym polega RT-PCR?
matrycą jest cDNA powstałe na drodze odwrotnej transkrypcji
Co umożliwia Real time-PCR?
pozwala na bezpośredni pomiar ilości powstających produktów i daje informację dotyczącą ilości cząsteczek matrycowych w materiale wyjściowym
