Diagnóstico Laboratorial em Microbiologia Clínica Flashcards
Marcha diagnóstica
- Fase pré analítica: amostra adequada e meio de transporte (se necessário);
- Fase analítica: processamento laboratorial e validação de resultados;
- Fase pós analítica: valorização clínica
Avaliação da amostra
Local; Quantidade; Timing; Recipiente; Transporte; Preservação;
Métodos de deteção
Pesquisa de:
a) Microorganismo: microscopia e exame cultural:
b) Ag/Ac: serologia;
c) Ácidos nucleicos: diagnóstico molecular;
Exame cultural
- Observação macroscópica;
- Exame microscópico direto: a fresco e corado;
- Exame cultural;
- Identificação;
- TSA
Microscopia
Microscopia ótica: - De campo claro; - De campo escuro; - De contraste de fase; Microscopia de fluorescência; Microscopia eletrónica;
Exame a fresco
Permite observar:
- Células;
- Fungos;
- Parasitas;
- Mobilidade bacteriana;
1. Exame direto (sem manipulação);
2. KOH;
3. Azul de lactofenol;
4. Iodo;
5. Tinta da China;
Exame corado
Gram (por excelência);
Ziehl Neelsen
Exame corado pelo Gram
Tem 2 corantes: 1º cora e 2º descora; - 1º corante: violeta de cristal; - Solução iodada: agarra corante; - Etanol; - 2º corante: safranina; - Gram positivos ficam roxos; - Gram negativos ficam cor de rosa; MÉTODO: I. Realização do esfregaço; II. Fixação por calor ou químico; III. Corar; Permite observar: - Células; - Fungos; - Parasitas; - Morfologia bacteriana;
Exame cultural
Observação macroscópica da amostra; Meios de cultura: sólido vs. líquido: - Não seletivos - ex: gelose sangue; - Seletivos - ex: CNA; - Seletivos e identificadores - ex: MacConkey; - Especiais - ex: BCYE;
Identificação bacteriana
Técnicas manuais; Técnicas automatizadas (18-24h): - Bioquímica; - Proteómica => + discriminação, demora 5 min; - Genómica;
TSA
Teste de Sensibilidade aos Antibióticos;
Demora 24h (cultura) + 24h (TSA);
- Técnicas manuais: de difusão ou microdiluição;
- Técnicas automatizadas: de microdiluição ou deteção de genes de resistências;
Cultura celular: prós e contras
Vantagens:
- TSA;
- Estudos epidemiológicos;
- Deteta simultaneamente vários organismos;
- Barato;
Desvantagens:
- Necessita microorganismo viável;
- Demorado;
- Negativo se houve antibioterapia prévia;
- Algumas bactérias não crescem em meios de cultura;
Serologia
Classicamente, deteção de Acs no soro;
Também se podem detetar Ags no soro (ex: Legionella);
Desvantagem: não há TSA;
- Titulação: determinar a maior diluição no soro que ainda consegue detetar a substância, sendo diferentes diluições do soro testadas com a mesma quantidade de Ag (reagente);
- Seroconversão: subir 4x ou passar de negativo a positivo;
Testar soro de fase aguda e da fase de convalescença: => exceção é resultado único na Legionella e HIV;
PESQUISA DE Ags:
- Pesquisa de GDH e toxina A e B de C. difficile em fezes diarreicas;
Genómica
Diagnóstico molecular;
Rápido;
Pode ser qualitativo ou quantitativo;
Único ou para múltiplos microorganismos;
Caro;
Não precisa de microorganismo vivo;
Pesquisa de ácidos nucleicos:
- Pesquesa de agente específico: pesquisa de gene da toxina A e B de C. difficile;
- Pesquisa de conjunto de organismos (abordagem sindromática): pesquisa dos agentes causadores de sépsis, infeções respiratórias, infeções GI, infeções do SNC, DSTs;
- Pesquisa de gene de resistência: deteção da resistência à isoniazida e rifampicina no MBT;
Regras de segurança biológica
Uso de bata obrigatório; Higiene das mãos; Unhas de gel prejudicam higiene; Cabelos compridos apanhados; Não ingerir alimentos; Não colocar objetos pessoais em cima da bancada de trabalho;
Téncnica assética de manuseamento de produtos
Bico de Bunsen;
Câmara de fluxo laminar;
Ansa esterilizada;
Placa de Petri;
Qual a técnica usada para realizar o exame cultural?
Técnica da sementeira por quadrantes
Técnica de higiene das mãos
Lavagem:
- Com água e sabão = lavagem higiénica;
- Com água e antissético = lavagem antissética;
Fricção:
- Com soluto alcoólico = fricção alcoólica
Gelose simples
Contém mistura de peptonas particularmente adaptada à cultura de microorganismos mais frequentes em amostras humanas;
Pode tornar-se enriquecida pela adição de sangue, permitindo o crescimento de bactérias mais exigentes;
Pode tornar-se seletiva pela adição de misturas antibióticas;
Gelose sangue
Isolamento de bactérias mais exigentes: gelose simples enriquecida com sangue de carneiro ou cavalo;
Permite leitura da hemólise;
Gelose chocolate
Isolamento de Haemophilus e Neisseria;
Gelose sangue aquecida para provocar hemólise dos eritrócitos, que assim libertam fatores intracelular essenciais para o crescimento do género Haemophilus: fator V (NAD).
A placa fica de cor acastanhada => daí o nome
Gelose chocolate-Haemophilus
Isolamento seletivo de Haemophilus;
Com base nutritiva enriquecida com fator X e fator V produzidos pela hemoglobina e pelo PolyViteX.
Seletividade é obtida pela associaçção de bacitracina e vancomicina e anfotericina B, para inibir os restantes microorganismos que poderiam crescer
Gelose MacConkey
Isolamento seletivo e diferenciação de Enterobacteriaceae;
Contém lactose, permite evidenciar a fermentação lática pea viragem do vermelho neutro (indicador de pH);
- Microorganismos que fermentam latose ficam rosas ou vermelhos;
- Os que não fermentam ficam incolores ou ligeiramente bege;
Seletividade é proporcionada por sais biliares e cristal de violeta que impedem o crescimento das bactérias Gram positivas;
Gelose SS
Isolamento seletivo e diferenciação de Salmonella e Shigellla;
Meio que evidencia colónias fermentadores de lactose e que reduzem tiosulfato por produção de H2S;
- Se fermentar lactose fica cor de rosa, se não fermentar fica incolor;
- Os microorganismos que produzem H2S originam colónias com centro negro;
Inibição de crescimento de Gram positivas devido à presença de sais biliares e corantes;
Gelose CLED
Isolamento de microorganismos presentes na urina;
Cistina, Lactose, Eletrólito Deficiente;
- Permite diferenciar lactofermentadores dos que não são: os que fermentam a lactose ficam com colónias amarelas ou amarelo esverdeado, e os que não fermentam lactose originam colónias verdes, azuis ou incolores;
- Impede swarming do Proteus: baixa concentração de eletrólitos
Gelose Yersinia (CIN)
Isolamento seletivo de Yersinia;
Meio com manitol e vermelho neutro (indicador de pH), permite diferenciação de bactérias do genéro Yersinia;
Presença de colato, desoxicolato, cristal violeta, Irgasan e antibióticos inibe crescimento de Gram positivas e da maioria das Gram negativas;
CIN = cefsulodina, irgasan, novobiocina
Gelose Campylosel
Isolamento seletivo de Campylobacter;
Meio básico contendo sangue;
Seletividade conferida por mistura de antibióticos: cefoperazone, vancomicina, anfotericina B, que inibem a maioria das Gram positivas, negativas e leveduras
Gelose Chapman (manitol salgado)
Isolamento seletivo e diferenciação de Staphylococcus;
Meio com elevado teor de NaCl que limita crescimento de outros microorganismos;
Meio com manitol, sendo que os Staphylococcus fermentadores de manitol (S. aureus) ficam com colónias amarelas, e os não fermentadores originam colónias cor de rosa;
Gelose BCYE-L
Buffered Charcoal Yeast Extract L-cisteína;
Isolamento de Legionella;
Com L-cisteína (indispensável ao crescimento da bactéria), usado para sementeira de amostras com suspeita de Legionella;
Tem carvão ativado, que absorve elementos tóxicos presentes no extrato de levedura;
Tampão estabiliza pH do meio para crescimento da bactéria;
Podem-se adicionar antibióticos para inibir crescimento de elementos da flora saprófita;
Gelose Sabouraud
Isolamento de fungos: leveduras e bolores
Meio de Lowenstein-Jensen
Isolamento de micobactérias;
Meio com enriquecimento pela presença de ovo, asparagina e fécula, que favorecem crescimento de micobactérias;
Estado sólido do meio é conseguido por coagulação das proteínas do ovo;
Tem indicador de pH: verde de Malaquite
Meios líquidos de cultura
=> Meio de Todd-Hewitt (enriquecimento de Streptococcus);
=> Meio de tioglicolato (enriquecimento de aeróbios, anaeróbios e microaerófilos);
=> Meio de selenito (enriquecimento de Salmonella);
=> Meio de tetrationato (enriquecimento de Salmonella);
=> Água de peptona alcalina (enriquecimento de Vibrio cholerae)
