Diagnóstico Laboratorial em Microbiologia Clínica

Question 1

Marcha diagnóstica

Answer 1

1. • Fase pré analítica: amostra adequada e meio de transporte (se necessário);
2. • Fase analítica: processamento laboratorial e validação de resultados;
3. • Fase pós analítica: valorização clínica

Question 2

Avaliação da amostra

Answer 2

Local;
Quantidade;
Timing;
Recipiente;
Transporte;
Preservação;

Question 3

Métodos de deteção

Answer 3

Pesquisa de:

a) Microorganismo: microscopia e exame cultural:
b) Ag/Ac: serologia;
c) Ácidos nucleicos: diagnóstico molecular;

Question 4

Exame cultural

Answer 4

1. Observação macroscópica;
2. Exame microscópico direto: a fresco e corado;
3. Exame cultural;
4. Identificação;
5. TSA

Question 5

Microscopia

Answer 5

Microscopia ótica:
 - De campo claro;
 - De campo escuro;
 - De contraste de fase;
Microscopia de fluorescência;
Microscopia eletrónica;

Question 6

Exame a fresco

Answer 6

Permite observar:

• Células;
• Fungos;
• Parasitas;
• Mobilidade bacteriana;
  1. Exame direto (sem manipulação);
  2. KOH;
  3. Azul de lactofenol;
  4. Iodo;
  5. Tinta da China;

Question 7

Exame corado

Answer 7

Gram (por excelência);

Ziehl Neelsen

Question 8

Exame corado pelo Gram

Answer 8

Tem 2 corantes: 1º cora e 2º descora;
 - 1º corante: violeta de cristal;
 - Solução iodada: agarra corante;
 - Etanol;
 - 2º corante: safranina;
 - Gram positivos ficam roxos;
 - Gram negativos ficam cor de rosa;
MÉTODO:
 I. Realização do esfregaço;
 II. Fixação por calor ou químico;
 III. Corar;
Permite observar:
 - Células; 
 - Fungos;
 - Parasitas;
 - Morfologia bacteriana;

Question 9

Exame cultural

Answer 9

Observação macroscópica da amostra;
Meios de cultura: sólido vs. líquido:
 - Não seletivos - ex: gelose sangue;
 - Seletivos - ex: CNA;
 - Seletivos e identificadores - ex: MacConkey;
 - Especiais - ex: BCYE;

Question 10

Identificação bacteriana

Answer 10

Técnicas manuais;
Técnicas automatizadas (18-24h):
 - Bioquímica;
 - Proteómica => + discriminação, demora 5 min;
 - Genómica;

Question 11

TSA

Answer 11

Teste de Sensibilidade aos Antibióticos;
Demora 24h (cultura) + 24h (TSA);
- Técnicas manuais: de difusão ou microdiluição;
- Técnicas automatizadas: de microdiluição ou deteção de genes de resistências;

Question 12

Cultura celular: prós e contras

Answer 12

Vantagens:
- TSA;
- Estudos epidemiológicos;
- Deteta simultaneamente vários organismos;
- Barato;
Desvantagens:
- Necessita microorganismo viável;
- Demorado;
- Negativo se houve antibioterapia prévia;
- Algumas bactérias não crescem em meios de cultura;

Question 13

Serologia

Answer 13

Classicamente, deteção de Acs no soro;
Também se podem detetar Ags no soro (ex: Legionella);
Desvantagem: não há TSA;
- Titulação: determinar a maior diluição no soro que ainda consegue detetar a substância, sendo diferentes diluições do soro testadas com a mesma quantidade de Ag (reagente);
- Seroconversão: subir 4x ou passar de negativo a positivo;
Testar soro de fase aguda e da fase de convalescença: => exceção é resultado único na Legionella e HIV;
PESQUISA DE Ags:
- Pesquisa de GDH e toxina A e B de C. difficile em fezes diarreicas;

Question 14

Genómica

Answer 14

Diagnóstico molecular;
Rápido;
Pode ser qualitativo ou quantitativo;
Único ou para múltiplos microorganismos;
Caro;
Não precisa de microorganismo vivo;
Pesquisa de ácidos nucleicos:
- Pesquesa de agente específico: pesquisa de gene da toxina A e B de C. difficile;
- Pesquisa de conjunto de organismos (abordagem sindromática): pesquisa dos agentes causadores de sépsis, infeções respiratórias, infeções GI, infeções do SNC, DSTs;
- Pesquisa de gene de resistência: deteção da resistência à isoniazida e rifampicina no MBT;

Question 15

Regras de segurança biológica

Answer 15

Uso de bata obrigatório;
Higiene das mãos;
Unhas de gel prejudicam higiene;
Cabelos compridos apanhados;
Não ingerir alimentos;
Não colocar objetos pessoais em cima da bancada de trabalho;

Question 16

Téncnica assética de manuseamento de produtos

Answer 16

Bico de Bunsen;
Câmara de fluxo laminar;
Ansa esterilizada;
Placa de Petri;

Question 17

Qual a técnica usada para realizar o exame cultural?

Answer 17

Técnica da sementeira por quadrantes

Question 18

Técnica de higiene das mãos

Answer 18

Lavagem:
- Com água e sabão = lavagem higiénica;
- Com água e antissético = lavagem antissética;
Fricção:
- Com soluto alcoólico = fricção alcoólica

Question 19

Gelose simples

Answer 19

Contém mistura de peptonas particularmente adaptada à cultura de microorganismos mais frequentes em amostras humanas;
Pode tornar-se enriquecida pela adição de sangue, permitindo o crescimento de bactérias mais exigentes;
Pode tornar-se seletiva pela adição de misturas antibióticas;

Question 20

Gelose sangue

Answer 20

Isolamento de bactérias mais exigentes: gelose simples enriquecida com sangue de carneiro ou cavalo;
Permite leitura da hemólise;

Question 21

Gelose chocolate

Answer 21

Isolamento de Haemophilus e Neisseria;
Gelose sangue aquecida para provocar hemólise dos eritrócitos, que assim libertam fatores intracelular essenciais para o crescimento do género Haemophilus: fator V (NAD).
A placa fica de cor acastanhada => daí o nome

Question 22

Gelose chocolate-Haemophilus

Answer 22

Isolamento seletivo de Haemophilus;
Com base nutritiva enriquecida com fator X e fator V produzidos pela hemoglobina e pelo PolyViteX.
Seletividade é obtida pela associaçção de bacitracina e vancomicina e anfotericina B, para inibir os restantes microorganismos que poderiam crescer

Question 23

Gelose MacConkey

Answer 23

Isolamento seletivo e diferenciação de Enterobacteriaceae;
Contém lactose, permite evidenciar a fermentação lática pea viragem do vermelho neutro (indicador de pH);
- Microorganismos que fermentam latose ficam rosas ou vermelhos;
- Os que não fermentam ficam incolores ou ligeiramente bege;
Seletividade é proporcionada por sais biliares e cristal de violeta que impedem o crescimento das bactérias Gram positivas;

Question 24

Gelose SS

Answer 24

Isolamento seletivo e diferenciação de Salmonella e Shigellla;
Meio que evidencia colónias fermentadores de lactose e que reduzem tiosulfato por produção de H2S;
- Se fermentar lactose fica cor de rosa, se não fermentar fica incolor;
- Os microorganismos que produzem H2S originam colónias com centro negro;
Inibição de crescimento de Gram positivas devido à presença de sais biliares e corantes;

Question 25

Gelose CLED

Answer 25

Isolamento de microorganismos presentes na urina;
Cistina, Lactose, Eletrólito Deficiente;
- Permite diferenciar lactofermentadores dos que não são: os que fermentam a lactose ficam com colónias amarelas ou amarelo esverdeado, e os que não fermentam lactose originam colónias verdes, azuis ou incolores;
- Impede swarming do Proteus: baixa concentração de eletrólitos

Question 26

Gelose Yersinia (CIN)

Answer 26

Isolamento seletivo de Yersinia;
Meio com manitol e vermelho neutro (indicador de pH), permite diferenciação de bactérias do genéro Yersinia;
Presença de colato, desoxicolato, cristal violeta, Irgasan e antibióticos inibe crescimento de Gram positivas e da maioria das Gram negativas;
CIN = cefsulodina, irgasan, novobiocina

Question 27

Gelose Campylosel

Answer 27

Isolamento seletivo de Campylobacter;
Meio básico contendo sangue;
Seletividade conferida por mistura de antibióticos: cefoperazone, vancomicina, anfotericina B, que inibem a maioria das Gram positivas, negativas e leveduras

Question 28

Gelose Chapman (manitol salgado)

Answer 28

Isolamento seletivo e diferenciação de Staphylococcus;
Meio com elevado teor de NaCl que limita crescimento de outros microorganismos;
Meio com manitol, sendo que os Staphylococcus fermentadores de manitol (S. aureus) ficam com colónias amarelas, e os não fermentadores originam colónias cor de rosa;

Question 29

Gelose BCYE-L

Answer 29

Buffered Charcoal Yeast Extract L-cisteína;
Isolamento de Legionella;
Com L-cisteína (indispensável ao crescimento da bactéria), usado para sementeira de amostras com suspeita de Legionella;
Tem carvão ativado, que absorve elementos tóxicos presentes no extrato de levedura;
Tampão estabiliza pH do meio para crescimento da bactéria;
Podem-se adicionar antibióticos para inibir crescimento de elementos da flora saprófita;

Question 30

Gelose Sabouraud

Answer 30

Isolamento de fungos: leveduras e bolores

Question 31

Meio de Lowenstein-Jensen

Answer 31

Isolamento de micobactérias;
Meio com enriquecimento pela presença de ovo, asparagina e fécula, que favorecem crescimento de micobactérias;
Estado sólido do meio é conseguido por coagulação das proteínas do ovo;
Tem indicador de pH: verde de Malaquite

Question 32

Meios líquidos de cultura

Answer 32

=> Meio de Todd-Hewitt (enriquecimento de Streptococcus);
=> Meio de tioglicolato (enriquecimento de aeróbios, anaeróbios e microaerófilos);
=> Meio de selenito (enriquecimento de Salmonella);
=> Meio de tetrationato (enriquecimento de Salmonella);
=> Água de peptona alcalina (enriquecimento de Vibrio cholerae)