Terapia génica Flashcards
Es una tecnología que utiliza enzimas para cortar y pegar secuencias de ADN de interés
Tecnología del ADN recombinante
Es el proceso de utilizar tecnologías de ADN recombinante para alterar la composicion genética de un organismo
Ingeniería genética
Disciplina cuyo objetivo es la cura o control de enfermedades mediante modificación genética
Terapia génica
Puede permitir a los médicos tratar un trastorno mediante la inserción de un gen en las células en vez de usar medicamentos o cirugías
Terapia génica
Ensayos clínicos de terapia génica
-anemia depranocítica
-epidermolisis bullosa
-hemofilia
-degeneración macular asociada con la edad
-Primera serie de ensayos en humanos
-determinar su acción, seguridad, vía de administración y dosis
-farmacodinamia y farmacocinética
- 15 a 50 sujetos
Primera fase de los estudios clínicos
-Evaluación terapéutica, efectividad y seguridad en pocos casos
-identificación de efectos secundarios
-no hay grupo control
Fase 2 de los estudios clínicos
-evaluación en un tiempo mayor y en diferentes poblaciones
-evaluación terapéutica, seguridad y dosis en mayor número de enfermos
Fase 3 de los estudios clínicos
Farmacovigilancia. El medicamento ya está disponible en el mercado. Seguridad y eficacia a largo plazo. Reporte de posibles efectos adversos raros
Fase 4 de los estudios clínicos
Eliminar (o reducir RNAi) la expresión de genes causantes de la enfermedad
Inhibición de la expresión
Reparar el genoma del paciente mediante técnicas que involucran recombinación homóloga
Edición génica
Introducir material genético exógeno para expresar los genes terapéuticos
Adición génica
Inyectar el vector directamente en el paciente
In vivo
Se retiran células y se cultivan, las células modificadas son retornadas al paciente
Ex vivo
Utilizados para introducir el material genético en las células deseadas
Vectores
Vectores en base a la naturaleza de su origen:
-No virales (ADN desnudo)
-Virales (oncoretrovirus, lentivirus, adenovirus)
Vectores en base a su capacidad de integrarse al genoma de la célula diana
-No integrativos
-integrativos
Son células a modificar genéticamente
Células diana
No se integran en el genoma, fáciles de producir y controlar
Vectores no virales no integrativos
El ADN no solo expresa el gen terapéutico, además contiene un transposón y nucleasas específicas
Vectores no virales integrativos
Requerido para la integración del ADN
Transposón
Nucleasas específicas
-ZFNs
-TALENT
-CRISP/Cas9
Secuencia de ADN que puede moverse de manera autónoma a diferentes partes del genoma de una célula
Transposón
Enzima necesaria para la transposición
Transposasa
Partes de transposón
-una secuencia central con información para la transposasa
-en los extremos una secuencia repetida de orden inverso
Emite fluorescencia en la zona verde del espectro visible
Proteína verde fluorescente
Esta aislado y se utiliza habitualmente en biología molecular como gen reportero
El gen que codifica para GFP
Generan rupturas en sitios específicos del ADN
Nucleasas especificas
Inhibición de la expresión
NHEJ (Non homologous end joining )
Union de extremos no homologos
edición génica y adición génica
HR (recombinación homóloga)
Se unen pequeños dominios de unión al ADN para reconocer una secuencia más larga.
Se fusionan con la nucleasas mediante un conector de 4 aminoacidos
ZFNs (Zinc-Finger Nucleasas)
Las proteinas de tipo activador transcripcional (TAL) reconocen secuencias de ADN a través de un dominio que consiste en un número variable de repeticiones ~34 aminoacidos
TALENTs ( Transcripción Activator-Like Effector Nucleases)
Hay una correspondencia uno a uno entre la identidad de dos aminoacidos críticos en cada repetición y cada base de ADN en la secuencia objetivo V/F
Verdadero
Repeticiones palindromicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas
CRISPR
Sistema asociado a CRISPR
Cas9
Escinde secuencias que se unen al crRNA, región espaciadora de 20 nt
Cas 9
Fases de la inmunidad mediada por CRISPR/Cas9
-adquisición
-interferencia (inmunidad)
Corta la hebra complementaria al ADN guía
RuvC
Corta la hebra opuesta al ARN guía
HNH
Silenciamiento/activación génica
dCas9
Facilidad de producción, pero baja eficiencia en células diana de relevancia para terapia génica, la región de integración es al azar
Vectores no virales integrativos
Son muy eficientes introduciendo su propio material genético en las células diana para producir nuevas partículas virales
Vectores virales
Mayor seguridad y expresión transitoria
Vectores virales no integrativos
Capacidad de infectar todo tipo de células. Permite insertos de hasta 8kb
Adenovirus
dsDNA
Riesgo de recombinación con otros retrovirus y oncogenes. Manipulación sencilla y precisa evita esos problemas
RNA
Retrovirus
Muy simple y no autónomo que requiere la coinfección con adenovirus u otros para replicarse. Menos inmunogénicos que los adenovirus
ssDNA
Adenoasociados
Son clonados en plásmidos de expresión
Genes virales
Son en realidad los vectores virales que contienen la información terapéutica en su genoma
Partículas virales
Pasos de la producción de vectores retrovirales
-Cotransfección de las construcciones
-mRNA de las proteinas virales a partir de los vectores de expresión y replicación del genoma viral
-sintesis de las proteinas virales
-Ensamble de las partículas virales
Primeros vectores virales integrativos desarrollados
Moloney Murine Leukemia Virus (MLV)-based vectors
Ventajas de MLV
-Alta eficacia de transducción
-Se integran eficientemente en una amplia gama de células humanas
-Faciles de manipular
Desventajas de MLV
-Baja seguridad biológica
-Baja/nula eficiencia en células quiescentes
-Alta genotoxicidad
