Cultivo celular Flashcards
Conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células ‘in vitro’, manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas
Cultivo celular
Se refiere a una técnica para realizar un determinado experimento en un ambiente controlado fuera de un organismo vivo
In vitro
- Microorganismos
- Bacterias, hongos y parásitos
Cultivo bacteriológico
El cultivo celular es para células:
- Eucariotas
- Protozoarios
- Levaduras
En medicina, el cultivo celular se referiría a:
células representantes de un tipo celular específico
Curva que describe el ciclo entero de crecimiento
Ciclo de crecimiento microbiano
El ciclo de crecimiento microbiano es el reflejo de eventos poblacionales no de células individuales, ¿verdadero o falso?
Verdadero
Las células procariotas crecen más rápido que las eucariotas, V/F
Verdadero
Fases del ciclo del crecimiento:
- Fase de latencia
- Fase exponencial
- Fase estacionaria
- Fase de muerte
Tiempo que tarda en comenzar el crecimiento de un microorganismo tras ser inoculado en medio fresco.
Fase de latencia
La fase de latencia depende de:
La historia del inóculo, la naturaleza del medio y las condiciones de crecimiento.
Si un cultivo en fase exponencial se transfiere a medio fresco bajo las mismas condiciones de crecimiento…
no hay esencialmente fase de
latencia y prosigue la fase exponencial
Si el inóculo proviene de un cultivo viejo:
las células están repletas de constituyentes esenciales para el crecimiento, se llevará tiempo sintetizarlos.
Si el medio cambia y se disponen de otros sustratos como fuentes de carbono:
se requiere sintetizar las enzimas que permitirán aprovecharlos, eso lleva tiempo
Es el estado más saludable de las células.
Fase exponencial
En un cultivo por lote (tubo cerrado), los organismos crecen indefinidamente de forma exponencial. V/F
Falso, no crecen indefinidamente
En la fase exponencial el número de células se duplica en intervalos constantes de tiempo, V/F
Verdadero
Ideal para el estudio de enzimas u otros componentes celulares
Fase exponencial
Un cultivo solamente permanece en fase exponencial por un tiempo muy limitado, ¿cuántas generaciones?
Menos de 10 generaciones.
1 bacteria pesa:
1 x 10^-15 Kg
Peso de la Tierra:
6 x 10^24 kg
Comienza por agotamiento de nutrientes o acumulación de desechos.
Fase estacionaria
No hay incremento neto en el número de células. Algunas crecen mientras otras mueren
Crecimiento críptico en la fase estacionaria
Es también exponencial, pero típicamente más lenta que la exponencial de crecimiento.
Fase de muerte
Las células pueden NO permanecen viables durante meses. V/F
Falso, las células pueden permanecer viables durante meses o incluso años.
En el monitoreo del rendimiento de cultivos por espectrofotometría se mide:
la luz que atraviesa la suspensión sin ser dispersada
La turbidez de una suspensión celular disminuye en la medida en que hay más células presentes, V/F
Falso, aumenta
En el monitoreo del rendimiento de cultivos por espectrofotometría las células…
dispersan la luz
En la espectrofotometría, dos organismos pueden tener densidades ópticas diferentes a tiempos similares de medición por diferencias en tamaños y formas o en velocidades de crecimiento, V/F
Verdadero
En dos organismos el mismo valor de OD no necesariamente corresponde al mismo número de células, V/F
Verdadero
Cuando la turbidez es excesiva se pierde la correspondencia entre el número de células y la densidad óptica porque:
la luz dispersada de la fotocelda por una célula puede ser nuevamente enviada a la fotocelda por otra célula
El cultivo celular ha sido considerado como:
mezcla de ciencia y arte
El cultivo celular desarrolló gracias a:
- Medios de cultivo
- Disponibilidad de antibióticos
- Instalaciones asépticas
- Dispositivos de cultivo
Mezcla poco definida de macromoléculas adicionadas bajo la forma de suero fetal bovino o equino, o extracto crudo de embriones de pollo
Medios de cultivo con suero
Químicamente definidos con moléculas necesarias para la supervivencia y proliferación como los factores de crecimiento.
Medios de cultivo libres de suero
Los medios de cultivo están tamponados para:
mantener un pH de 7.4
cambian de color a medida que aparecen catabolitos ácidos resultado del metabolismo celular
Indicadores de pH
Condiciones de cultivo celular:
- Incubación a 37°C en una atmósfera de 5% de CO2, 95% aire
- Frasco T
Tipos de cultivos:
- Primarios
- Secundarios
- Líneas celulares
- Hibridomas
Se preparan directamente a partir de un tejido u órgano
Cultivos primarios
En los cultivos primarios las células NO conservan sus características originales y su proliferación es limitada, V/F
Falso, SI conservan sus características originales
Las células de los cultivos primarios pueden ser removidas del recipiente de cultivo para formar cultivos secundarios, V/F
Verdadero
Tipos de cultivos primarios:
- Monocapa
- Suspensión
- Células dispersas en el medio de cultivo.
- Alcanzan confluencia cuando el número de células es grande y los nutrientes insuficientes.
Cultivo primario suspensión
El área de anclaje disponible se haya toda cubierta de células.
Confluencia
La mayoría de las células que forman los tejidos no pueden vivir en suspensión, requieren de:
una superficie sólida sobre la cuál crecer y multiplicarse.
El soporte de los cultivos primarios es la base de una placa o frasco, pero a veces los requerimientos son más complejos y el plástico debe recubrirse con:
componentes de la matriz extracelular que rodea a las células en los tejidos, por ejemplo, colágeno y laminina.
Las células en monocapa confluente detienen su crecimiento hasta que se las subcultiva (resiembra) a un recipiente con medio fresco
Cultivos secundarios
Las células muestran las mismas propiedades, V/F
Falso, muestran distintas propiedades según su origen
Inmortales, crecimiento aberrante malignas, genéticamente inestable
Líneas celulares, Transformación
Otra forma de transformación de las líneas celulares es:
Introducir ciertos oncogenes obtenidos de virus
Primera línea celular humana.
Adenocarcinoma
HeLa 1952
Ventajas del cultivo celular:
- Condiciones controladas
- Representan tipos celulares específicos
- Acreditación de pureza
- Reproducibilidad experimental
- Consumo reducido de reactivos
- Muy útiles en las primeras etapas de investigación
- Pueden ser conservadas y almacenadas
Desventajas del cultivo celular:
- Se requiere experiencia
- Espacio de trabajo y equipos especializados
- Manejo de desechos plásticos y RPBI
- Inestabilidad genética
- Pérdida de diferenciación
Premio Nobel de Medicina 1984
César Milstein
Fusión de linfocitos B secretores de inmunoglobulinas (anticuerpos) y células derivadas de una línea tumoral de linfocitos B.
Hibridomas
Producción de anticuerpos monoclonales
Hibridomas
Célula con núcleos genéticamente diferentes separados, pero con los contenidos citoplasmáticos compartidos
Heterocarionte
Medio selectivo HAT
- Hipoxantina
- Aminopterina
- Timidina
Antagonista competitivo del ácido dihidrofólico
Aminopterina
HGPRT.
Hipoxantina guanina fosforibosil transferasa
Las células deben utilizar vías
alternas para la síntesis del DNA, V/F
Verdadero
Un heterocarionte puede entrar en mitosis, produciendo una célula híbrida en la cual las envolturas de ambos núcleos se han disgregado, permitiendo juntar los cromosomas de ambos en un único gran núcleo. V/F
Verdadero
Cada clon de las células fusionadas produce:
un anticuerpo monoclonal
que prolifera indefinidamente.
Reconoce un único epítope antigénico.
Anticuerpo monoclonal.
