PCR y sus variantes

Question 1

Premio Nobel de Química 1993

Answer 1

Kary Mullis

Question 2

Puede amplificar selectivamente una secuencia deseada de ADN de copia unica que se encuentre presente en una
mezcla compleja de moléculas de ADN

Answer 2

PCR

Question 3

¿La PCR necesita purificación previa de la secuencia de interés?

Answer 3

Falso

Question 4

Logran que solo se amplifique una zona del ADN en la PCR.

Answer 4

Primers o cebadores

Question 5

Sintetiza la hebra complementaria incorporando los dNTPs libres (A, T, G, C) del medio de reacción, inicialmente dirigida por los primers o cebadores

Answer 5

ADN polimerasa termoestable

Question 6

¿Cómo son los ciclos de la PCR?

Answer 6

Ciclos controlados de temperaturas de desnaturalización, alineamiento y elongación

Question 7

Componentes de la mezcla de reacción para PCR:

Answer 7

• DNA
• Primers o cebadores (oligonucleótidos).
• Tag Polimerasa
• dNTPs (A, T, G, C)

Question 8

En los ciclos de PCR se aumenta la temperatura para:

Answer 8

romper los puentes de hidrógeno

Question 9

Temperatura de desnaturalización

Answer 9

94 a 95 °C

Question 10

Temperaturas que evitan la renaturalización del DNA

Answer 10

≥ 90 °C

Question 11

Oligonucleótidos específicos (20-23 nt) cuya secuencia es complementaria a los extremos del fragmento (zona del DNA)
que se desea amplificar.

Answer 11

Primers

Question 12

Al disminuir la temperatura los primers hibridan específicamente en los extremos de la secuencia blanco. Un primer en cada hebra. V/F

Answer 12

Verdadero

Question 13

¿Los primers dirigen a la ADN polimerasa?

Answer 13

Verdadero

Question 14

¿Cuántas moléculas de DNA se obtienen después del 1er ciclo?

Answer 14

2 moléculas de ADN doble cadena parcial
que contienen la secuencia blanco.

Question 15

¿Por qué solo el ADN que contiene la secuencia blanco es copiado?

Answer 15

porque la polimerasa solo puede copiar moléculas que tienen el cebador unido

Question 16

Después de 30 ciclos hay más de 1x10 moléculas del producto especifico y solamente 60 moléculas parcialmente doble cadena más largas. V/F

Answer 16

Verdadero

Question 17

Tiene la capacidad de mantener cambios de temperatura cíclicos de forma precisa

Answer 17

Termociclador

Question 18

Fases de una PCR:

Answer 18

• Exponencial
• Linear
• Plateau

Question 19

Un mayor número de copias del DNA molde dan una banda más intensa
del amplificado. V/F

Answer 19

Verdadero

Question 20

Mayor número de copias del DNA molde dan una banda más intensa del amplificado, ¿es cierto hasta qué?

Answer 20

cantidades excesivas de DNA molde inhiben la reacción

Question 21

Fase de la PCR que detecta PCR tiempo real

Answer 21

Exponencial

Question 22

Fase de PCR que detecta PCR convencional:

Answer 22

Plateau

Question 23

A mayor número de ciclos, mayor…

Answer 23

cantidad del producto de PCR (amplificado)

Question 24

A mayor número de ciclos, mayor cantidad del producto de PCR, hasta que…

Answer 24

los componentes de la reacción se agotan

Question 25

La amplificación se detiene

Answer 25

Fase plateau de la PCR

Question 26

Variantes de la PCR:

Answer 26

* Con adaptadores * Inversa * Mutagénesis dirigida * RT-PCR * qPCR * RT-qPCR * Múltiplex

Question 27

Amplifica una región de ADN de secuencia desconocida, uniendo adaptadores a los fragmentos de restricción de extremos cohesivos.

Answer 27

PCR con adaptadores

Question 28

PCR con adaptadores Se añaden primers específicos para las secuencias de los adaptadores. V/F

Answer 28

Verdadero

Question 29

Permite amplificar secuencias desconocidas con la condición de que se encuentran al lado de una secuencia conocida de ADN

Answer 29

PCR inversa

Question 30

Se refiere a una amplia variedad de técnicas in vitro que modifican la secuencia silvestre.

Answer 30

Mutagénesis dirigida

Question 31

Cuando no hay sitios de restricción localizados en el lugar deseado, se puede emplear:

Answer 31

un enfoque de PCR

Question 32

En la mutagénesis dirigida se pueden cambiar de una a tres bases en un segmento de DNA determinado sintetizando primers de PCR que lleven estos cambios. V/F

Answer 32

Verdadero

Question 33

Emplea dos enzimas polimerasas

Answer 33

RT-PCR

Question 34

Realiza la síntesis de cDNA a partir del mRNA.

Answer 34

DNA polimerasa RNA dependiente (retrotranscriptasa)

Question 35

RT-PCR Los clones de cDNA contienen:

Answer 35

secuencias codificantes que son discontinuas (mayoría de genes eucariotas)

Question 36

El cDNA sintetizado por la retrotranscriptasa se amplifica por PCR gracias a la enzima:

Answer 36

DNA polimerasa DNA dependiente

Question 37

Amplifica y simultáneamente cuantifica de forma absoluta el producto específico de la amplificación.

Answer 37

PCR tiempo real

Question 38

Con que otro nombre se le conoce a la PCR tiempo real

Answer 38

PCR cuantitativa

Question 39

Adicionado a la mezcla de reacción de la qPCR y emite fluorescencia

Answer 39

fluoróforo

Question 40

El fluoróforo emite fluorescencia en función de:

Answer 40

la abundancia del producto de amplificación.

Question 41

Se le denomina PCR tiempo real porqué..

Answer 41

La medición de la fluorescencia se realiza luego de cada ciclo de amplificación

Question 42

Número de ciclos requeridos para que la fluorescencia específica sobrepase la fluorescencia de fondo inespecífica.

Answer 42

Ciclo umbral, cycle threshold (Ct)

Question 43

¿El Ct es inversamente proporcional a la cantidad de ADN blanco inicial?

Answer 43

Verdadero

Question 44

PCR tiempo real los utiliza para fluorescencia:

Answer 44

* SYBR Green * Sondas TaqMan

Question 45

El complejo ADN-SYBR Green presenta el pico de absorción en:

Answer 45

498 nm

Question 46

El complejo ADN-SYBR Green presenta el pico de emisión en:

Answer 46

522 nm (zona verde)

Question 47

SYBR green no es un agente intercalante porque...

Answer 47

se asocia a la molécula de DNA interactuando con la hendidura menor

Question 48

El principio de la sonda TaqMan se basa en:

Answer 48

la actividad 5-3' exonucleasa de la polimerasa

Question 49

Las Sondas TaqMan aumentan significativamente la especificidad de la detección. V/F

Answer 49

Verdadero

Question 50

La fluorescencia resultante de la acumulación del producto se mide durante:

Answer 50

la fase exponencial de la PCR

Question 51

Después de obtener cDNA a partir del mRNA en la 1ra reacción de retrotranscripción, el cDNA se amplifica por qPCR

Answer 51

RT-qPCR

Question 52

En la RT-qPCR los niveles de expresión de un gen en particular se normalizan con respecto al nivel de expresión de un gen constitutivo para poder hacer la comparación entre muestras, tratamientos y/o condiciones de la célula. V/F

Answer 52

Verdadero

Question 53

Amplifica más de una secuencia en una misma reacción, empleando dos o más pares de primers en un único tubo.

Answer 53

PCR múltiplex

Question 54

PCR múltiplex se utiliza para:

Answer 54

* Diagnóstico de enfermedades causadas por diferentes agentes * Determinar variantes de un mismo virus