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Biología molecular > PCR y sus variantes > Flashcards

PCR y sus variantes Flashcards

1
Q

Premio Nobel de Química 1993

A

Kary Mullis

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2
Q

Puede amplificar selectivamente una secuencia deseada de ADN de copia unica que se encuentre presente en una
mezcla compleja de moléculas de ADN

A

PCR

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3
Q

¿La PCR necesita purificación previa de la secuencia de interés?

A

Falso

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4
Q

Logran que solo se amplifique una zona del ADN en la PCR.

A

Primers o cebadores

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5
Q

Sintetiza la hebra complementaria incorporando los dNTPs libres (A, T, G, C) del medio de reacción, inicialmente dirigida por los primers o cebadores

A

ADN polimerasa termoestable

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6
Q

¿Cómo son los ciclos de la PCR?

A

Ciclos controlados de temperaturas de desnaturalización, alineamiento y elongación

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7
Q

Componentes de la mezcla de reacción para PCR:

A
  • DNA
  • Primers o cebadores (oligonucleótidos).
  • Tag Polimerasa
  • dNTPs (A, T, G, C)
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8
Q

En los ciclos de PCR se aumenta la temperatura para:

A

romper los puentes de hidrógeno

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9
Q

Temperatura de desnaturalización

A

94 a 95 °C

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10
Q

Temperaturas que evitan la renaturalización del DNA

A

≥ 90 °C

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11
Q

Oligonucleótidos específicos (20-23 nt) cuya secuencia es complementaria a los extremos del fragmento (zona del DNA)
que se desea amplificar.

A

Primers

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12
Q

Al disminuir la temperatura los primers hibridan específicamente en los extremos de la secuencia blanco. Un primer en cada hebra. V/F

A

Verdadero

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13
Q

¿Los primers dirigen a la ADN polimerasa?

A

Verdadero

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14
Q

¿Cuántas moléculas de DNA se obtienen después del 1er ciclo?

A

2 moléculas de ADN doble cadena parcial
que contienen la secuencia blanco.

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15
Q

¿Por qué solo el ADN que contiene la secuencia blanco es copiado?

A

porque la polimerasa solo puede copiar moléculas que tienen el cebador unido

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16
Q

Después de 30 ciclos hay más de 1x10 moléculas del producto especifico y solamente 60 moléculas parcialmente doble cadena más largas. V/F

A

Verdadero

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17
Q

Tiene la capacidad de mantener cambios de temperatura cíclicos de forma precisa

A

Termociclador

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18
Q

Fases de una PCR:

A
  • Exponencial
  • Linear
  • Plateau
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19
Q

Un mayor número de copias del DNA molde dan una banda más intensa
del amplificado. V/F

A

Verdadero

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20
Q

Mayor número de copias del DNA molde dan una banda más intensa del amplificado, ¿es cierto hasta qué?

A

cantidades excesivas de DNA molde inhiben la reacción

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21
Q

Fase de la PCR que detecta PCR tiempo real

A

Exponencial

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22
Q

Fase de PCR que detecta PCR convencional:

A

Plateau

23
Q

A mayor número de ciclos, mayor…

A

cantidad del producto de PCR (amplificado)

24
Q

A mayor número de ciclos, mayor cantidad del producto de PCR, hasta que…

A

los componentes de la reacción se agotan

25
Q

La amplificación se detiene

A

Fase plateau de la PCR

26
Q

Variantes de la PCR:

A
  • Con adaptadores
  • Inversa
  • Mutagénesis dirigida
  • RT-PCR
  • qPCR
  • RT-qPCR
  • Múltiplex
27
Q

Amplifica una región de ADN de secuencia desconocida, uniendo adaptadores a los fragmentos de restricción de extremos cohesivos.

A

PCR con adaptadores

28
Q

PCR con adaptadores
Se añaden primers específicos para las secuencias de los adaptadores. V/F

A

Verdadero

29
Q

Permite amplificar secuencias desconocidas con la condición de que se encuentran al lado de una secuencia conocida de ADN

A

PCR inversa

30
Q

Se refiere a una amplia variedad de técnicas in vitro que modifican la secuencia silvestre.

A

Mutagénesis dirigida

31
Q

Cuando no hay sitios de restricción localizados en el lugar deseado, se puede emplear:

A

un enfoque de PCR

32
Q

En la mutagénesis dirigida se pueden cambiar de una a tres bases en un segmento de DNA determinado sintetizando primers de PCR que lleven
estos cambios. V/F

A

Verdadero

33
Q

Emplea dos enzimas polimerasas

A

RT-PCR

34
Q

Realiza la síntesis de cDNA a partir del mRNA.

A

DNA polimerasa RNA dependiente (retrotranscriptasa)

35
Q

RT-PCR
Los clones de cDNA contienen:

A

secuencias codificantes que son discontinuas (mayoría de genes eucariotas)

36
Q

El cDNA sintetizado por la retrotranscriptasa se amplifica
por PCR gracias a la enzima:

A

DNA polimerasa DNA dependiente

37
Q

Amplifica y simultáneamente cuantifica de forma absoluta el producto específico de la amplificación.

A

PCR tiempo real

38
Q

Con que otro nombre se le conoce a la PCR tiempo real

A

PCR cuantitativa

39
Q

Adicionado a la mezcla de reacción de la qPCR y emite fluorescencia

A

fluoróforo

40
Q

El fluoróforo emite fluorescencia en función de:

A

la abundancia del producto de amplificación.

41
Q

Se le denomina PCR tiempo real porqué..

A

La medición de la fluorescencia se realiza luego de cada ciclo de amplificación

42
Q

Número de ciclos requeridos para que la fluorescencia específica sobrepase la fluorescencia de fondo inespecífica.

A

Ciclo umbral, cycle threshold (Ct)

43
Q

¿El Ct es inversamente proporcional a la cantidad de ADN blanco inicial?

A

Verdadero

44
Q

PCR tiempo real los utiliza para fluorescencia:

A
  • SYBR Green
  • Sondas TaqMan
45
Q

El complejo ADN-SYBR Green presenta
el pico de absorción en:

A

498 nm

46
Q

El complejo ADN-SYBR Green presenta
el pico de emisión en:

A

522 nm (zona verde)

47
Q

SYBR green no es un agente intercalante porque…

A

se asocia a la molécula de DNA interactuando con la hendidura menor

48
Q

El principio de la sonda TaqMan se basa en:

A

la actividad 5-3’ exonucleasa de la polimerasa

49
Q

Las Sondas TaqMan aumentan significativamente la especificidad de la detección. V/F

A

Verdadero

50
Q

La fluorescencia resultante de la
acumulación del producto se mide durante:

A

la fase exponencial de la PCR

51
Q

Después de obtener cDNA a partir del mRNA en la 1ra reacción de retrotranscripción, el cDNA se amplifica por qPCR

A

RT-qPCR

52
Q

En la RT-qPCR los niveles de expresión de un gen en particular se normalizan con respecto al nivel de expresión de un gen constitutivo para poder hacer la comparación entre muestras, tratamientos y/o condiciones de la célula. V/F

A

Verdadero

53
Q

Amplifica más de una secuencia en una misma reacción, empleando dos o más pares de primers en un único tubo.

A

PCR múltiplex

54
Q

PCR múltiplex se utiliza para:

A
  • Diagnóstico de enfermedades causadas por diferentes agentes
  • Determinar variantes de un mismo virus

Biología molecular (41 decks)

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