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Biología molecular > Purificación de proteínas > Flashcards

Purificación de proteínas Flashcards

1
Q

Para la purificación de una nueva proteína se emplea la experiencia y el sentido común, V/F

A

Verdadero

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2
Q

En la purificación de una nueva proteína se emplean diferentes métodos secuenciales de forma empírica hasta encontrar la mejor forma, V/F

A

Verdadero

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3
Q

Con cada paso de purificación la cantidad de muestra se hace:

A

más pequeña, la actividad especifica va siendo mayor

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4
Q

Los métodos más sofisticados y caros se usan al principio de la purificación, V/F

A

Falso, se reservan para el final

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5
Q

Cromatografía:

A
  • En papel
  • En capa fina
  • En columna
  • De intercambio iónico
  • De exclusión molecular
  • De afinidad
  • Líquida de alto rendimiento
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6
Q

Tipos de electroforesis en gel de poliacrilamida

A
  • 1 dimensión (PAGE)
  • 2 dimensiones (2D)
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7
Q

Técnica para fraccionar mezclas orgánicas al desplazarlas a través de una matriz.

A

Cromatografía

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8
Q

Es un poderoso método de separación en el que se aprovechan las diferencias en:

A

el coeficiente de partición entre una fase móvil y una fase estacionaria

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9
Q

Cociente entre las concentraciones de una sustancia en las dos fases formadas por dos disolventes inmiscibles en equilibrio

A

Coeficiente de partición

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10
Q

El coeficiente de partición mide:

A

La solubilidad diferencial de una sustancia en esos dos disolventes.

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11
Q

Mantienen sostenida la fase estacionaria

A

Soporte o matriz, la fase móvil acarrea a la muestra

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12
Q

Los componentes de la muestra que interaccionan fuertemente con la fase estacionaria tendrán un tiempo de retención menor, V/F

A

Falso, el tiempo de retención será mayor

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13
Q

Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.

A

Retención

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14
Q

Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil (eluyente), que puede ser un líquido o un gas

A

Desplazamiento

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15
Q

Migración de los componentes de una mezcla retenidos a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por el desplazamiento ejercido por la fase móvil.

A

Elución/Eluir

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16
Q

Los tipos de cromatografía dependen de:

A

La naturaleza de las fases estacionaria y
móvil

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17
Q

Tipos de cromatografía:

A
  • Sólido-líquido
  • Líquido-líquido
  • Líquido-gas
  • Sólido-gas
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18
Q

La fase estacionaria es un líquido no volátil impregnado en un sólido y la fase móvil es un gas

A

Cromatografía líquido-gas

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19
Q

La fase estacionaria es un líquido anclado a un soporte sólido y la móvil es un líquido

A

Cromatografía líquido-líquido

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20
Q

Fase estacionaria de la cromatografía en papel:

A

Papel filtro

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21
Q

Para aminoácidos individuales o dipéptidos

A

Cromatografía en papel

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22
Q

Empleada por Sanger 1945 en la secuenciación de la insulina:

A

Cromatografía en papel

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23
Q

Fase estacionaria de la cromatografía en capa fina:

A

Placa adsorbente, los más usados sílica gel y alumina, adherida a un soporte de plástico, vidiro o aluminio

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24
Q

En la cromatografía en columna la fase estacionaria, se empaqueta en una columna para evitar que:

A

El aire quede atrapado interrumpiendo la continuidad de las fases

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25
Q

La muestra se aplica en la parte superior de la columna y se eluye con una mezcla de solventes de diferentes polaridades

A

Cromatografía en columna

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26
Q

Componentes que eluyen a diferentes velocidades podrán ser separados. V/F

A

Verdadero

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27
Q

En la cromatografía en columna los componentes pueden ser colectados para su análisis posterior. V/F

A

Verdadero

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28
Q

Aprovecha las diferencias en signo y magnitud de las cargas que tienen las moléculas como las proteínas a distintos pH

A

Cromatografía de intercambio iónico

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29
Q

Mecanismo básico de la cromatografía de intercambio iónico:

A

Intercambio reversible de los iones en solución con los grupos funcionales cargados, unidos covalentemente a una fase estacionaria insoluble

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30
Q

Tipos de cromatografía de intercambio iónico:

A
  • Intercambio catiónico
  • Intercambio aniónico
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31
Q

Resina carga negativa

A

Intercambio catiónico

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32
Q

Intercambio catiónico débil

A

Ácido carboxílico

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33
Q

Intercambio catiónico fuerte

A

Ácido sulfónico

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34
Q

Resina carga positiva

A

Intercambio aniónico

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35
Q

Intercambio aniónico fuerte

A

Aminas cuaternarias

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36
Q

Intercambio aniónico débil

A

Aminas secundarias o terciarias

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37
Q

La separación se optimiza cambiando gradualmente el pH y/o la concentración de sales de la fase móvil para crear un gradiente

A

Intercambio iónico de péptidos

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38
Q

En el intercambio iónico de péptidos las moléculas con carga opuesta a la de la matriz migrarán más rápido que aquellas con carga del mismo signo que la fase estacionaria. V/F

A

Falso, migraran más lentamente

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39
Q

Llamada también filtración en gel

A

Cromatografía de exclusión molecular

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40
Q

Fase estacionaria de la cromatografía de exclusión molecular

A

Material poroso inerte

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41
Q

En la cromatografía de exclusión molecular el soluto se separa según su:

A

tamaño y estructura molecular

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42
Q

En la cromatografía de exclusión molecular, las moléculas grandes no entran dentro de las cavidades de la matriz y atraviesan libremente recuperándose en las primeras fracciones. V/F

A

Verdadero

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43
Q

En la cromatografía de exclusión molecular, las moléculas pequeñas entran en:

A

el laberinto de los espacios dentro de la matriz y son retrasadas

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44
Q

Es la cromatografía de mayor especificidad y selectividad para la purificación de biomoléculas.

A

Cromatografía de afinidad

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45
Q

La cromatografía de afinidad se basa en la interacción especifica de dos moléculas, ¿cuáles son?

A
  1. Antígeno/anticuerpo
  2. Enzima/sustrato
  3. Receptor/ligando
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46
Q

Las moléculas que han quedado retenidas en la columna debido a su afinidad por la fase estacionaria se liberan mediante:

A

un cambio del medio eluyente

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47
Q

Una de las dos moléculas que interaccionan en la cromatografía de afinidad se une covalentemente a la fase estacionaria. V/F

A

Verdadero

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48
Q

Condiciones en las que la interacción se debilita:

A
  • pH
  • Fuerza iónica
  • Polaridad
  • Solución de las moléculas inmovilizadas
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49
Q

Afecta al estado de ionización de las biomoléculas

A

pH

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50
Q

Concentración de sales, afecta las interacciones iónicas

A

Fuerza iónica

51
Q

Solubilidad

A

Polaridad

52
Q

Cromatografía líquida de alto rendimiento:

A

High-Performance Liquid Chromatography (HPLC)

53
Q

HPLC hace uso de bombas de alta presión para mover las moléculas a través de la columna. V/F

A

Verdadero

54
Q

HPLC es ideal para:

A

analizar componentes no volátiles como también azúcares, vitaminas, drogas y metabolitos.

55
Q

Determina la composición de la mezcla

A

HPLC analítica

56
Q

Se pueden recuperar los componentes posteriormente a su análisis para estudios posteriores

A

HPLC preparativa

57
Q

(HPLC)
El área bajo la curva de cada pico es proporcional a la cantidad/concentración de cada componente en la mezcla analizada. V/F

A

Verdadero

58
Q

Herramienta molecular fundamental para aislar y purificar macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico

A

Electroforesis

59
Q

Tipos de muestras que pueden ser analizadas por electroforesis

A
  • Ácidos nucleicos
  • Proteínas
60
Q

El medio de soporte sólido es un gel:

A

Electroforesis en gel

61
Q

Análisis de muestras de ácidos nucleicos

A

Geles de agarosa

61
Q

Análisis de muestras de proteínas, para ácidos nucleicos también es posible en caso de que se requiera mayor resolución que la que brinda la agarosa

A

Geles de poliacrilamida

62
Q

En _______ no pueden ser observadas diferencias pequeñas en pesos moleculares de las moléculas analizadas.

A

agarosa

63
Q

La movilidad de la molécula está en función de:

A

su peso molecular y su carga eléctrica

64
Q

Permiten la separación de las macromoléculas

A

Sus diferentes movilidades

65
Q

Separación por punto isoeléctrico

A
  1. Se incorpora una solución de anfolitos a un gel
  2. Se establece un gradiente de pH estable en el gel después de la aplicación de un campo eléctrico
  3. Se añade la solución de proteínas y se vuelve a aplicar el campo eléctrico
  4. Después de la tinción, se muestra que las proteínas se distribuyen a lo largo del gradiente de pH de acuerdo con sus valores de punto isoeléctrico
66
Q

En la electroforesis las moléculas se mueven siempre hacia:

A

el electrodo de polaridad opuesta a la carga neta de la molécula

67
Q

Los cationes se mueven hacia el cátodo y los aniones hacia el ánodo, V/F

A

Verdadero

68
Q

Factores intrínsecos de la molécula

A
  • Carga eléctrica
  • Peso molecular
69
Q

Factores extrínsecos de la molécula

A
  • Concentración del gel
  • Voltaje aplicado
  • Tiempo de corrida
  • Temperatura
70
Q

2a dimensión

A

Separación por peso molecular

71
Q

Separación por peso molecular

A
  1. Se coloca gel de enfoque isoeléctrico sobre gel de poliacrilamida SDS
  2. Electroforesis en gel de poliacrilamida SDS
72
Q

A mayor relación carga eléctrica/peso molecular, mayor _____

A

movilidad

73
Q

Moléculas en donde la relación carga eléctrica/peso molecular no es constante

A

Proteínas

74
Q

Moléculas en donde la relación carga eléctrica/peso molecular es constante

A

Ácidos nucleicos

75
Q

Si la relación carga eléctrica/peso molecular es constante….

A

la movilidad queda en función del peso
molecular

76
Q

Si el peso molecular incrementa, la movilidad:

A

disminuye

77
Q

La movilidad electroforética en gel es en base a:

A

el peso molecular de la macromolécula

78
Q

Geles de poliacrilamida:

A
  • Acrilamida (C3H5NO)
  • Bisacrilamida (C7H10N202)
79
Q

Formación de polímeros (gel):

A

Acrilamida

80
Q

Entrecruzamiento entre las cadenas de polímeros (gel):

A

Bisalcrilamida

81
Q

Niveles de organización de las proteínas:

A
  • Primaria
  • Secundaria
  • Terciaria
  • Cuaternaria
82
Q

Hacia qué dirección decrece el peso molecular

A

Hacia abajo

83
Q

Hacia qué dirección decrece el punto isoeléctrico

A

Hacia la derecha

84
Q

Es la secuencia de una cadena de aminoácidos:

A

Estructura primaria de las proteínas

85
Q

Ocurre cuando ciertas atracciones están presentes entre hélices alfa y hojas plegadas:

A

Estructura terciaria de las proteínas

86
Q

Las proteínas globulares presentan mayor movilidad, V/F

A

Verdadero

86
Q

Proteína que consiste de más de una cadena de aminoácidos

A

Estructura cuaternaria de las proteínas

86
Q

Las proteínas no tienen una relación carga eléctrica/peso molecular constante y su forma influye en la movilidad, por lo tanto, se emplea:

A

SDS en la preparación del gel de poliacrilamida

86
Q

Ocurre cuando los aminoácidos en la secuencia interactúan a través de enlaces de hidrógeno:

A

Estructura secundaria de las proteínas

87
Q

¿Hay relación forzosa entre PM, número de residuos y cadenas polipeptídicas?

A

No

88
Q

Cuando el corrimiento electroforético observado puede representar a más de una cadena polipeptídica se emplean:

A

agentes desnaturalizantes reductores

89
Q

SDS sobre la relación carga eléctrica/peso molecular se une a:

A

las zonas apolares del polipéptido

90
Q

SDS sobre la relación carga eléctrica/peso molecular

A

1 molécula de SDS por cada 2 residuos de aminoácidos

91
Q

SDS proporciona al polipéptido una carga negativa que resulta proporcional a:

A

la longitud de la cadena, por tanto, al peso molecular.

92
Q

La carga negativa del SDS es menor que la carga original de la proteína. V/F

A

Falso, es mucho mayor

93
Q

Agente desnaturalizante:

A

SDS sobre la estructura proteica

94
Q

La repulsión electrostática creada por la unión del SDS rompe los enlaces no covalentes haciendo que la proteína:

A

pierda su conformación nativa

95
Q

SDS sobre la estructura proteica, elimina las diferencias en conformación y su influencia sobre la movilidad de las diferentes proteínas que han de ser separadas en el gel. V/F

A

Verdadero

96
Q

Pueden formar enlaces puentes de disulfuro en las proteínas:

A

Cisteínas

97
Q

Ayudan a estabilizar estructuras terciarias y cuaternarias.

A

Puentes disulfuro

98
Q

Los puentes disulfuro de las proteínas afectan la interpretación de la electroforesis porque:

A

cabe la posibilidad de que dos cadenas polipeptídicas independientes corran como si fueran una sola cadena de mayor peso molecular

99
Q

Agentes desnaturalizantes reductores

A

Ditiotreitol (DTT) o β-Mercaptoetanol.

100
Q

Puede determinar el número y tamaño de subunidades proteicas comparando la electroforesis bajo condiciones reductoras y no reductoras

A

Análisis de proteínas multiméricas

101
Q

Permite visualizar el corrimiento electroforético

A

Azul de bromofenol

102
Q

Carga del azul de bromofenol

A

Negativa por encima de pH 4.6

103
Q

El peso molecular del azul de bromofenol debe ser menor que el de cualquier proteína. V/F

A

Verdadero

104
Q

¿Dónde se adiciona el azul de bromofenol?

A

al buffer de carga de la muestra

105
Q

Donde inicia el gel separador

A

Inicio de la corrida

106
Q

Línea donde llega el Azul de bromofenol

A

Frente de corrida

107
Q

Métodos de tinción para el revelado del gel

A
  • Azul de Coomassie
  • Tinción de plata
108
Q

Puede detectar bandas de hasta 50 ng

A

Azul de Coomassie (Coomassie Brilliant Blue)

109
Q

Incrementa la sensibilidad de detección (50x).

A

Tinción de plata. (Silver stainning).

110
Q

Separación por punto isoeléctrico, (isoelectroenfoque).

A

Electroforesis 1ra dimensión

111
Q

Separación por tamaño, (peso molecular).

A

Electroforesis 2da dimensión

112
Q

Es el pH al que un polianfólito tiene carga neta cero

A

Punto isoeléctrico

113
Q

Son moléculas grandes como las proteínas que tienen muchos grupos ácidos o básicos

A

Polianfólitos

114
Q

Molécula con PI bajo tendrá más:

A

grupos ácidos

115
Q

Un PI alto indica:

A

predominancia de grupos básicos

116
Q

Estudio de las variaciones de los niveles de expresión a nivel de proteína en determinados momentos y bajo ciertas condiciones de la célula que permite identificar aquellas proteínas cuya presencia, ausencia o alteración se correlaciona con determinados estadios fisiológicos

A

Proteómica cuantitativa

117
Q

Proteoma

A

Conjunto completo de proteínas en un organismo

118
Q

Proteínas que se pueden identificar y permiten diagnosticar la enfermedad o pronosticar la evolución de la misma

A

Biomarcadores

119
Q

En las proteínas expresadas en 2 tejidos humanos hay

A

Proteínas en común y proteínas tejido específico

Biología molecular (41 decks)

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