Investigación en la regulación de la expresión génica Flashcards
Herramientas moleculares en genómica funcional
- Transcriptoma
- Proteoma
Transcriptoma
- Knockdown (RNAi)
- Microarreglos de DNA (de expresión)
Knockdown (RNAi)
silenciamiento de genes
Microarreglos de DNA:
- Niveles de mRNA
- Perfiles de expresión génica
- Redes de regulación génica
Comparación de los niveles de proteínas
Proteómica cuantitativa
- Permite identificar redes complejas de regulación génica
- Comprensión de la biología del organismo a nivel de su genoma
Microarreglos de DNA
Microarreglos de expresión:
- Laminilla en donde se inmovilizan las sondas que reconocerán cada uno de los transcritos
- Sondas isotérmicas de hasta 60nt
Específicas para cada uno de los transcritos
Sondas
Bases de datos para el diseño de las sondas del microarreglo de expresión
- Secuencia completa del genoma del organismo
- Librerías de cDNA normalizadas (EST)
Pretende ser la representación de todos los posibles transcritos que se generan en cualquier momento en dicho organismo bajo diferentes condiciones y etapas de vida:
Librerías de cDNA normalizadas (EST)
- Representación de todo el conjunto de DNA complementario al mRNA
- Cuando no se cuenta con la secuenciación completa del genoma
Librerías de cDNA normalizadas (EST)
Procesamiento del microarreglo:
- Extracción de RNA de alta calidad
- Preparación y marcaje de la muestra
- Hibridación
- Escaneo
Tipos de muestras para preparación y marcaje:
- Muestras amplificadas
- Muestras no amplificadas. Síntesis de cDNA
Muestras amplificadas:
Amplificación del cRNA
Muestras no amplificadas:
- Oligo dT
- Random primer