Métodos de transferencia de material genético Flashcards
Métodos de transferencia de material genético en bacterias:
- Conjugación
- Transducción
- Transformación
Al sembrar juntas dos cepas auxótrofas K12 de E. coli se aislaban colonias protótrofas
Lederberg y Tatum, 1946
Conjugación plásmidos
DNA extracromosómico
Es el proceso de transferencia horizontal de material genético entre una célula bacteriana donadora y una receptora mediante contacto directo o una conexión que las una
Conjugación
Proceso mediante el cual el DNA es transferido de una bacteria a otra mediante un bacteriófago
Transducción
Tipos de transducción:
- Generalizada
- Especializada
Partícula fágica transductora
Pseudovirión
Transferencia de cualquier región del genoma bacteriano
Transducción generalizada
Transferencia de loci adyacentes al sitio de integración del profago
Transducción especializada
Transducción también se utiliza para designar el proceso mediante el cual ADN exógeno es introducido a una célula mediante vector viral. V/F
Verdadero
Un bacteriófago infecta a una bacteria y puede integrarse en el genoma bacteriano, manteniendo…
el ciclo lisogénico antes de activar el ciclo lítico
El ADN puede integrarse al genoma de la bacteria por:
recombinación en un sitio especifico (homología de secuencia)
Variación hereditaria de una célula bacteriana susceptible originada por la captación de ADN desnudo libre en el medio, con la posterior integración del ADN exógeno en el genoma celular
Transformación
Célula que ha sido transformada
Transformante
Principio de transformación
Griffith 1928
Una bacteria muerta se degrada y libera fragmento de ADN al entorno. Otra bacteria puede captar ese ADN
Transformación
Estado fisiológico característico limitado en el tiempo que permite captar ADN del medio exterior, influido por factores ambientales
Competencia
La competencia es variable en cada especie capaz de experimentar transformación. V/F
Verdadero
Codificada en el genoma o lograda de forma artificial
Competencia
Tipos de transformación:
- Natural
- Artificial
En algunas especies de bacterias, que cuentan con la maquinaria específica para llevar el ADN a través de la membrana.
Transformación natural
Donde se codifica la transformación natural?
En los genes celulares
No está codificada en los genes celulares, es inducida por procedimientos en donde las células son convertidas en permeables a través de condiciones que normalmente no ocurren en la naturaleza
Transformación artificial
Las técnicas de transformación artificial se basan en tratamientos químicos o físicos que producen microporos en la célula, lo que permite…
la introducción de DNA exógeno de modo eficiente
Técnicas de transformación artificial
- Química
- Microinyección
- Lipofección
- Electroporación
- Vectores vírales
- Biobalística
Las células se incuban en hielo con el DNA exógeno en presencia de cationes divalente como Ca2+, lo cuál prepara las membranas para hacerlas permeables al DNA exógeno
Transformación artificial química
Qué causa que el ADN entre en la célula en la transformación a. química?
la incubación de las células a 42 ºC por 30 seg (shock térmico)
Se realiza bajo el microscopio empleando micro agujas y micromanipuladores
Microinyección
El DNA se encapsula en liposomas, las cuales se fusionan enseguida con la membrana celular
Lipofección
Aumenta la permeabilidad de la membrana celular mediante aplicación de un campo eléctrico, forma poros
Electroporación
Una exposición excesiva a campos eléctricos en la electroporación ¿qué provoca?
puede causar muerte celular
Aprovecha la capacidad natural que tienen los virus de ingresar su información genética a la célula blanco. Pueden obstaculizar la replicacion del virus
Vectores virales
La selección del virus para un vector viral se hace en base a:
su estructura, se fabrican conteniendo la información genética de interés
Pequeñas partículas de oro o tungsteno cubiertas de ADN se disparan a las células
Biobalística
Como es la eficiencia de transformación en la biobalística?
Baja, pero la mayoría de plantas pueden ser transformadas por este método
Para que queremos incorporar DNA exógeno en una célula?
- Clonación in vivo
- Producir y purificar proteínas
- Estudiar la expresión
- Estudiar la carencia de proteínas
- Crear OGM
- Terapia génica
Procesos que pueden usarse para producir copias genéticamente idénticas e un ente biológico
Clonación
Tipos de clonación
- DNA
- Proteína
Tipos de clonación de DNA:
- In vitro acelular (PCR)
- In vivo celular
Amplificación de moléculas de ácido nucleico mediante su introducción, asistida por vectores, en células en cultivo
Clonación de DNA in vivo
Tipos de clonación de proteínas:
- Sistemas de traducción in vitro
- In vivo celular
Producción de proteínas mediante la introducción asistida por vectores, en células en cultivo, de la información genética requerida para la síntesis de dicha proteína
Clonación de proteínas in vivo
El vector tiene como misión unirse con el fragmento de DNA llamado _______
Inserto
Los vectores son elementos genéticos con capacidad autoreplicante. V/F
Verdadero
De qué puede ser el inserto?
ADN genómico, cADN, producto de la retrotranscripción del ARN, producto de PCR
Aspectos importantes a considerar al seleccionar un vector:
- Tamaño máximo del inserto que admiten
- Tipo de célula anfitriona
- Plásmidos (compuestos terapéuticos)
- Virus (eucariotas)
Clasificación de vectores:
- de clonación
- de expresión
Su finalidad es almacenar secuencias y permitir la obtención de grandes cantidades del inserto
Vector de clonación
- Capacidad de expresar DNA recombinante
- Su objetivo es producir un transcrito (RNA) o la proteína de ese transcrito
Vector de expresión
Ejemplo de vector de clonación
pBR322
Vector de expresión, ejemplo
pCMVTnT
Procedimiento general
- Preparación del inserto
- Preparación del vector
- Preparación de la construcción
- Transformación
- Selección de transformante
- Propagación de transformantes
- Purificación de vectores o de proteínas recombinantes
El DNA se corta con las enzimas de restricción adecuadas
Preparación del inserto
El policonector o sitio múltiple de clonación permite emplear cualquier combinación de enzimas de restricción
Preparación del vector
Unión covalente in vitro del inserto de DNA al vector cortado, empleando una ligasa
Preparación de la construcción
