2.4 GENÉTICA BACTERIANA Flashcards

Question

-Método de la réplica en placa

Answer 1

-Búsqueda de mutantes auxótrofos. Ej. Obtención de mutantes his- Microorganismo que ha desarrollado un requerimiento nutricional como resultado de una mutación. El fenotipo original, que no muestra ese requerimiento, se llama prototrofo. - se utilisa esto para ver en un cultivo normal cuantas colonias son mutantes - el medio minimo - no tiene el nuevo requerimiento de los mutantes pero el medio completo tiene

Answer 2

Aproximadamente el 90% de las sustancias mutagénicas son cancerígenas. -Se utiliza: Salmonella typhimuriun his- sembrada en medio mínimo -Se compara el número de colonias en un medio con un disco impregnado con a sustancia que se está investigando (provoca la reversión auxótrofa a prototrofa)

Answer 3

El test de Ames es un ensayo biológico ampliamente utilizado en el campo de la medicina y la investigación científica para evaluar la capacidad mutagénica de diferentes sustancias químicas. Desarrollado en la década de 1970 por el científico estadounidense y Premio Nobel Bruce N. Ames, esta prueba permite identificar compuestos que pueden causar mutaciones genéticas y, por lo tanto, tienen el potencial de ser carcinogénicos o teratogénicos en seres humanos. El test de Ames se basa en la utilización de cepas mutantes de la bacteria Salmonella typhimurium que son deficientes en su capacidad para sintetizar el aminoácido histidina debido a mutaciones puntuales en genes específicos. Estas cepas bacterianas, denominadas his-, requieren histidina en el medio de cultivo para poder crecer y replicarse. En condiciones normales, estas cepas no pueden crecer en un medio sin histidina; sin embargo, si se les expone a un compuesto mutagénico, pueden revertir a su fenotipo salvaje, adquiriendo la capacidad de sintetizar histidina y crecer en un medio sin este aminoácido. El test de Ames se lleva a cabo mezclando las cepas bacterianas his- con diferentes concentraciones de la sustancia química en estudio, y luego cultivándolas en un medio sin histidina. Si la sustancia es mutagénica, provocará mutaciones de reversión en las bacterias, permitiéndoles sintetizar histidina y formar colonias en el medio de cultivo. La cantidad de colonias observadas en las placas de cultivo es directamente proporcional al potencial mutagénico de la sustancia en cuestión.

Answer 4

las mutantes son sembradas en diferentes concentraciones de la subtancia mutagena la colonia que forma la mutacion 1 - no tiene capacidad de sintetisar histidina ( empezamos con ella - auxotrofas) -> his una vez metida en diff conc de mutageno todas son sembradas en un medio minino que no contiene la histidina - dependiendo de la conc del mutageno hara mas o menios crescimiento de las colonias y determinamos la formacion de colonias prototrofas capazes de sintetizar hoistidina

Answer 5

Dos elementos genéticos procedentes de dos genomas independientes se unen en uno solo. -Normalmente implica mayor cambio genético que la mutación.

Answer 6

1. Generalizada u homóloga: 2.Específica de sitio: entre secuencias idénticas y en zonas concretas de ambos ADN. -Ilegítima o transposición: Secuencias de inserción y de transposones. Un gen cambia de lugar en el genoma. No existe homología. No depende de la proteína RecA.

Answer 7

entre secuencias homólogas pero no idénticas; puede darse en cualquier gen. Depende de la proteína RecA.

Answer 8

entre secuencias idénticas y en zonas concretas de ambos ADN.

Answer 9

Secuencias de inserción y de transposones. Un gen cambia de lugar en el genoma. No existe homología. No depende de la proteína RecA.

Answer 10

-Entre secuencias homólogas pero no idénticas; puede darse en cualquier gen. Depende de la proteína RecA. 1° rotura de ADN : primero hay un alineamiento de los dos ADN y son separados por una nucleasa en seguida el enzima helicasa crea una muesca (hueco) en el ADN donor que se va quedar abierta por las proteinas de union a cadena sencilla 2° invasion de banda en seguida la proteina Rec A se encarga de transportar y unir a esta hebra de ADN con una secuencia homóloga en la otra molécula de doble hebra para así realizar el intercambio y forma el bucle D bucle D Estructura generada cuando una hebra adicional de DNA se une a la doble hélice, de modo que una hebra de la hélice original queda desplazada, formando un bucle con forma de D. Esta estructura puede formarse al comienzo de la replicación o durante la recombinación genética. - 3. Rotura del bucle y formación estructura Holliday en seguida la banda de ADN forma un enlance con la otra banda y causa una rotura del bucle y formacion de la estructura holliday - con forma de x 4° cortes con endonucleasas y resulucion las endonucleasas realisan los cortes de las dos bandas y pueden formar dos resoluciones (2.4B pg 3) 1- estructura de parche corte realisado en cada axe de cada banda formando un intercambio completo de las bandas 2- structura en cremallera corte realisado de forma vertical en el x resulta enb transferencia de mitad de cada banda 5° las ligasa y polimerasas y forman la banda de ADN

Answer 11

Entre secuencias idénticas y en zonas concretas de ambos ADN (sitios de fijación “att”). - No interviene RecA. se realia entre un bacteriófago lambda (λ) y una bacteria Escherichia coli el bacteriofago transcreve su ADN en la bacteria para que utilise sus celulas para se reproducir y producir nutrientes causa enfermedades en las celulas de la bacteria. 1°- una vez que el ADN bdel bacteriofago atravesa la MP el genoma se circulariza y se une en los extremos formando en ponto cos(cohesivos) 2° - en seguida en el ADN de E. coli las regiones att son cortadas por las integrasas en lugares identicos y en el ADN del bacteriotrofago tambien y se unen en el medio del ADN encontramos los lugares cos (que uniran el ADN para poder unirse de manera =)

Answer 12

bacteria lisogenica- Estado en el que un fago con genoma DNA mantiene una relación latente o persistente, no lítica, con la bacteria hospedadora. Durante el estado lisogénico el fago no se replica, sino que el genoma viral está integrado en el cromosoma de la bacteria (ver profago) y se transmite en forma de profago a las células descendientes durante la división de la bacteria. La inserción del profago puede ocurrir en regiones concretas del DNA del hospedador o en cualquier lugar. quando la bacteria se divide se forma en profago( el ADN del virus entegrado en la bacteria hospede) en la bacteria hija pero en caso de cambio en condiciones externas causa el ciclo litico - donde cambia funciones de la celula - causa multiplicacion del ADN , consome mayoria del ATP para sus acciones y formando los componentes celulares para formar mas virus alen desto tambien destroye el ADN de la celula

Answer 13

-Proceso por el cual un gen se mueve de un lugar a otro del genoma. -Intervienen: secuencias de inserción y de transposones. No existe homología. No depende de la proteína Rec A Los elementos genéticos transponibles “saltan” de un lugar a otro de los genomas por un mecanismo de recombinación no homóloga “ilegítima”, es decir, que no depende de homologías entre el elemento y la zona de genomio a la que este elemento va a transponerse (esta última se suele denominar secuencia diana). Enzima transposasa: responsable de todas las reacciones de la transposición. -Las secuencias IS y los transposones saltan de un lugar a otro del genoma (transposición). Originan frecuentemente mutaciones.

Answer 14

En general, las enzimas que catalizan ese proceso se denominan transposasas. La transposasa corta el ADN “donador” en los extremos del elemento transponible, y luego los inserta en el ADN diana, Todos los elementos genéticos transponibles poseen terminales inversamente repetidos (IR), es decir, la secuencia de un extremo en una cadena, leída en sentido 5’à3’ es idéntica (o casi) a la secuencia del otro extremo de la otra cadena, también leída en su sentido 5’à3’. Secuencias de inserción (IS): Son elementos pequeños (del orden de 1000 pb., o menos), dotadas en sus extremos de terminales inversamente repetidos (IR), de unos 15 a 25 pb. bullet Normalmente sólo poseen un gen, que codifica la transposasa. Por lo tanto, a diferencia de los transposones, no confieren fenotipo seleccionable. Transposones (Tn): Son elementos de mayor tamaño que los IS (desde casi 3.000 pb hasta más de 20.000 pb). Poseen al menos un gen para la transposasa y un gen responsable de alguna función no relacionada con la transposición: concretamente, muchos transposones portan genes cuya expresión da fenotipos fácilmente seleccionables o detectables (p. ej.: resistencia a antibióticos o a metales pesados). Las transposasas reconocen los terminales inversamente repetidos del transposón, y cortan en los extremos (en este sentido se dice que la transposición es específica, pero sólo respecto de las secuencias del elemento transponible). bullet Por otro lado, las transposasas cortan también en una secuencia diana más o menos aleatoria del sitio a donde se van a transponer (inespecificidad respecto del “endogenote”, por lo que se llama a esta recombinación “ilegítima”). Los cortes son en ambas cadenas, pero en situaciones ligeramente separadas entre sí en las dos cadenas. Posteriormente hay empalmes entre las cadenas cortadas del Tn y de la diana. Originan frecuentemente mutaciones, inactivación insercional de un gen, provoca grandes delecciones

Answer 15

https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/17transforma.htm#_Toc64553403

Answer 16

En bacterias encontramos los siguientes tipos principales de recombinación: 1) Recombinación general u homóloga 2) Recombinación específica (no-homóloga), en la que a su vez distinguimos: a) Rec. específica legítima, conservativa; b) Rec. específica “ilegítima”, propiciada por elementos genéticos transponibles. A continuación, y antes de abordar cada tipo de recombinación, daremos las definiciones generales de cada uno de estos procesos recombinativos: Recombinación general u homóloga Puede ocurrir en cualquier lugar del genomio, por emparejamiento entre pares de secuencias que presenten una homología suficientemente extensa. bullet Depende de la intervención de un equipo enzimático característico, en el que la proteína RecA (o equivalente) es central en el proceso. Recombinación específica legítima (conservativa) Requiere cortas secuencias de homología entre el exogenote y el endogenote (por eso se llama también “específica de sitio”), que son reconocidas por proteínas específicas. bullet Es independiente de RecA. bullet Este tipo de recombinación es típica de la integración de genomios de fagos en sitios concretos del genomio de bacterias hospedadoras. Recombinación específica ilegítima: fenómenos de transposición No depende de homologías (ni siquiera cortas) entre el exogenote (en este caso, un elemento genético transponible, como IS o Tn) y el endogenote. bullet También es independiente de RecA. bullet El elemento transponible codifica una enzima (genéricamente se les denomina transposasas) que reconoce secuencias específicas inversamente repetidas en los extremos del propio elemento, lo cual se requiere para el proceso de transposición. bullet Muchos elementos transponibles (pero no todos) poseen un mecanismo replicativo de transposición: es decir, al transponerse dejan una copia de sí mismos en el sitio original, y generan una copia nueva en el sitio a donde se transponen (recombinación específica duplicativa).

Answer 17

Limita la transferencia de material genético -Barrera frente ADN extraño si el exogenote es un replicón funcional (que posee un origen de replicación capaz de ser reconocido por la maquinaria replicativa de la célula receptora), este exogenote permanece como tal replicón en estado autónomo (por ejemplo, plásmidos). bullet El exogenote puede recombinarse con el endogote, mediante algunos de los procesos recombinativos descritos en la primera parte de este tema. bullet Pero el exogenote puede sufrir otra alternativa: puede ser reconocido como “extraño” por parte de la célula hospedadora, por medio de un fenómeno enzimático llamado restricción, que conduce a la destrucción de este exogenote. Este va a ser el objeto de estudio de esta sección del tema. La restricción es un sistema que poseen muchas cepas bacterianas, y representa una especie de “barrera” frente a la permanencia de ADN extraño que hubiera podido entrar por alguno de los sistemas que estudiaremos en los capítulos siguientes. De esta forma, las bacterias evitan la “promiscuidad” en los intercambios genéticos. El posible significado adaptativo de este tipo de sistemas es el de conferir “inmunidad” frente a exogenotes (por ejemplo, fagos) que pudieran poner en peligro la individualidad genética e incluso la superviviencia de la bacteria en cuestión. La restricción va asociada a un sistema “paralelo” de salvaguardia del ADN de la bacteria frente al propio sistema de restricción. Este sistema de protección del ADN propio se denomina modificación, y mediante él, el ADN queda “marcado” químicamente por metilación de determinadas secuencias. -Endonucleasas de restricción, restrictasas o enzimas de restricción (destruyen el ADN extraño) -descubierto en 1968 arber -Reconocen secuencias específicas y simétricas y cortan ambas cadenas Cada cepa posee una actividad endonucleasa que reconoce como extraño al ADN del fago crecido en la otra, y lo destruye. A este tipo de endonucleasas se las denomina endonucleasas de restricción, o más abreviadamente, restrictasas. bullet Con baja frecuencia, el ADN de un fago puede “escapar” a la restricción de la cepa opuesta a donde ha crecido. Una vez que ha escapado, este ADN es reconocido como “propio” por parte de esta cepa, de modo que este fago podrá crecer con total eficiencia (100%) en dicha cepa. La razón es que el ADN es modificado químicamente por el hospedador, de modo que queda protegido de la correspondiente restrictasa de esa misma cepa. La modificación química consiste en la introducción de grupos metilo (CH3-) en determinadas bases dentro de determinadas secuencias del ADN, lo cual está catalizado por una metilasa específica. Se han descrito varios tipos distintos de sistemas de modificación-restricción (M-R), según sus mecanismos de acción generales, pero nosotros sólo trataremos los dos mejor concocidos: M-R tipo I, tipo II. -Las enzimas de restricción de tipo II son herramientas básicas en ingeniería genética. -Enzimas de modificación: -La metilasa suele ser una proteína monomérica, que introduce grupos metilo en una A o en una G (según la metilasa en cuestión), en ambas cadenas, dentro de la secuencia reconocida. - metilan el DNA propio para que no sufra el efecto de las endonucleasas de restricción. -Función del sistema de restricción-modificación: eliminar ADN extraño. protege contra infeccion de fagos

Answer 18

- Reconocen un sitio específico y cortan en puntos próximos a la secuencia. Reconocen secuencias relativamente grandes, que no presentan simetrías. bullet La actividad endonucleasa (de las subunidades R) no corta dentro de la secuencia reconocida, sino lejos de ella, a distancias variables (del orden de unos 1000 pb., y en lugares inespecíficos.

Answer 19

Reconocen secuencias específicas y cortan dentro de estas secuencias. Cada miembro de la pareja de modificación y restricción reconoce la misma secuencia específica de ADN. bullet La secuencia reconocida consiste siempre en un corto número de pares de bases. La restrictasa suele ser una proteína formada por dos subunidades del mismo tipo, ensambladas simétricamente. Muchas restrictasas cortan dentro de la secuencia, dejando extremos protuberantes mutuamente cohesivos,

Answer 20

3.1. Transformación 3.2 Conjugación 3.3 Transducción

Answer 21

3.1. Transformación Captación por una célula receptora de ADN procedente de la lisis de una célula donadora y que se encuentra en el medio que rodea dicha célula.

Answer 22

-Descubrimiento del proceso de transformación (Fred Griffith, 1928) -Se utilizan dos cepas de Streptococcus pneumoniae. -> cepas S (lisas, capsuladas y virulentas) y R (rugosas, no capsuladas y avirulentas), inoculadas en ratones: 1.cepas S vivas inoculadas en ratones - ratón muere 2.cepas R vivas inoculadas en ratones - ratón vive 3.cepas S muertas por calor - ratón vive 4.cepas S muertas por calor + R vivas -> ratón muere. La autopsia revela la presencia de neumococos vivos virulentos (tipo S) La transformación fue el primer proceso de transferencia genética que se describió en los procariotas, y este hallazgo constituyó la base para suministrar el primer dato incontrovertible acerca de la naturaleza química del material genético: a partir de 1944 empezó a quedar claro que era el ADN el portador de la información genética de los seres vivos. el equipo formado por Avery, MacLeod y McCarty -Demuestran en 1944 que la molécula transformante era el ADN. -El ADN era la molécula que contenía y era responsable de la herencia genética.

Answer 23

-El fragmento de ADN donador debe tener un tamaño determinado y ser de doble cadena. -El ADN que penetra en la célula receptora debe de recombinarse para que se transmitan las características a la descendencia. -La célula receptora debe ser competente.

Answer 24

Presenta condiciones fisiológicas aptas para captar ADN del medio. Laboratorio: * Tratamiento con CaCl2 y congelación * Electroporación -Se utiliza mucho en Ingeniería genética

Answer 25

-Transferencia de material genético entre dos bacterias vivas, donadora y receptora, a través de un contacto físico. La célula donadora es portadora de un plásmido. -Plásmido integrado en cromosoma (parte de ADN) -Plásmido no integrado separado

Answer 26

1.Experimento de Lederberg y Tatum (1946) 2.Experimento de Davis (1950) -Las células necesitan contactar físicamente.

Answer 27

-Escherichia coli K12 -El resultado se daba en presencia de DNAasa: No podía ser una transformación dos cepas auxotrofas foram con distincos metabolismos foan sembradas en medio minimo y incubar - capa A - met , bio- +thr leu - capa B - + met , bio - thr, leu en las cepas ensembradas individualmente no hubo crescimiento en las cepas sembradas en conjunto hubo crescimiento (transf de genes) Qué proceso de transferencia genética había dado origen a los recombinantes? Se descartó que fuera por transformación: No había recombinantes si se usaban extractos libres de una cepa y se mezclaban con células enteras de la otra cepa. bullet Si en el experimento original se añadía DNasa, no cambiaban los resultados. bullet Se vio que se necesitaban contactos directos entre las células de las dos cepas, mediante el experimento del tubo en “U” de Davis: si en cada rama de la U se coloca una cepa distinta, y ambas están separadas físicamente (en la base de la U) por un filtro con poros de tamaño inferior al del diámetro de las bacterias, no aparecían recombinantes. En ulteriores experimentos se comprobó que existían dos tipos de cepas de cara a la producción de recombinantes: cepas fértiles (F+): aquellas que al mezclarlas con otras, daban lugar a recombinantes; cepas infértiles (F-). Los cruces de tipo F+ x F-- dan origen a recombinantes; Los cruces de tipo F--x F-- no dan origen a recombinantes. Por otro lado, se observaron dos importantes propiedades de los cruces F+ x F-: casi la totalidad de las células infértiles (F--), al final de la conjugación, adquirían la capacidad de fertilidad (se convertían en células F+); bullet sin embargo, los recombinantes aparecían con mucha menor frecuencia (alrededor de 10-5).

Answer 28

confirmo que celulas necessitan contactar fisicamente - filtro de vidrio poroso permeteria el passage de nutrientes pero impide el contacto fisico

Answer 29

F- : no fértil, no pili, receptores pili (OmpA) F+ : fértil, plásmido F, pili, receptores tapados Hfr : fértil, plásmido F integrado, pili, receptores tapados F’ : fértil, plásmido F gen cromosómico, pili, receptores tapados ---(En las células F+ el factor de fertilidad F se encuentra en forma de plásmido de replicación autónoma, independiente del cromosoma. En este estado, el factor F sólo puede provocar su propia transferencia conjugativa a las células F--, de modo que éstas adquieren a su vez dicho factor F. bullet En una población de células F+, de vez en cuando (con una frecuencia de 10-5), el factor F interacciona con el cromosoma: se integra en él, y entonces se replica conjuntamenente con el genóforo de la bacteria (actuando, pues, como episoma). En esta situación, el factor F puede “arrastrar” al cromosoma y transferir parte de él a la célula receptora F--. Sin embargo, en esta situación el factor F no se transfiere completo a la célula receptora, razón por la cual los cruces Hfr x F-- no suelen conferir el carácter F+ a los exconjugantes del receptor. bullet En resumen: cada cepa Hfr es clon procedente de un evento de integración del factor F en un sitio del cromosoma de E. coli. En estos clones todas las células tienen la capacidad de transferir porciones de cromosoma y por ello confieren alta frecuencia de recombinación. Así pues, en un cultivo F+ normal, existe una pequeña proporción de células Hfr. Esa minoría de células Hfr son las responsables de la baja frecuencia de recombinantes que provocan los cultivos F+.)

Answer 30

Contiene información para: -Síntesis de fimbrias (pili) -Síntesis de proteínas para transferencia de F a la célula receptora -Proteínas para tapar receptores de pili (proteínas de exclusión) -Recombinación (IS) con el cromosoma

Answer 31

-autónomo, en las células F+; -integrado (como episoma), en las células Hfr; -autónomo, pero con un trozo de cromosoma, en las cepas F' (ver el apartado sobre sexducción).

Answer 32

Esto da como resultado la transferencia de un plásmido F + que posee genes tra que codifican solo para un pilus de conjugación y la formación de pares de apareamiento de una bacteria donante a una bacteria receptora. Una cadena del plásmido F + se rompe con una nucleasa en el origen de la secuencia de transferencia (ORit) que determina dónde en el plásmido se inicia la transferencia de ADN sirviendo como el sitio de inicio de la replicación donde las enzimas de replicación del ADN cortarán el ADN para iniciar la replicación del ADN y transferencia. La cadena mellada ingresa a la bacteria receptora mientras que la otra cadena plasmídica permanece en el donante. Cada hebra hace entonces una copia complementaria. El receptor se convierte entonces en un macho F + y puede hacer un pilus sexual La conjugación de Hfr comienza cuando un plásmido F + con genes tra que codifican para la formación de pares de apareamiento se inserta o se integra en el cromosoma para formar una bacteria Hfr. (Un plásmido que es capaz de integrarse en el nucleoide huésped se llama episoma).

Answer 33

-Escisión de una célula Hfr dando lugar a una célula F El plásmido al escindirse se lleva Hfr consigo un gen bacteriano (zona A) -Escisión de una célula Hfr dando lugar a una célula F’ La cepa Hfr puede revertir a F+, por una escisión precisa (exacta), que implica los extremos del factor integrado (las secuencias IS que lo “emparedan”). Cada cepa Hfr concreta presenta una frecuencia característica de reversión a F+. Algunas cepas son muy inestables, de modo que revierten frecuentemente, lo que obliga a purificarlas continuamente en el laboratorio para evitar que al final se obtenga una población F+. En cambio, otras cepas son muy estables. La cepa HfrC es la más estable, de modo que raramente revierte por escisión. Pero también pueden ocurrir escisiones imprecisas (en las que están implicadas secuencias repetidas diferentes a las IS que flanquean al episoma), de modo que el factor F adquiere trozos de genomio bacteriano adyacentes al lugar donde estaba integrado. Estos plásmidos F autónomos que adquieren e incorporan permanentemente un trozo de genomio bacteriano, se denominan F' (F-primas)

Answer 34

1°Unión entre las células 2. Transferencia del ADN durante la conjugación

Answer 35

El pili se despolimeriza y las células se acercan. Una célula F+ contacta por medio de la punta de su pelo F con el receptor de superficie de una F--. 2) El pelo F se va despolimerizando desde su base, lo cual provoca la apariencia de que se va retrayendo. En ese movimiento de retracción, la célula F-- se va acercando a la F+. 3) Cuando el pelo se termina de desintegrar, las células se ponen en contacto directo pared-pared. Se forma un puente conjugativo que pone en contacto los citoplasmas de ambas células. 4) Las parejas o agregados de cruce se estabilizan por la acción de los genes traN y traG del plásmido F, y de ompA de la célula F--. 5) La proteína producida por traD (localizada en ambas membranas, citoplásmica y externa) parece que facilita el transporte del ADN a la célula receptora.

Answer 36

En la célula F+, una endonucleasa específica codificada por uno de los genes tra reconoce y corta en una de las cadenas de la secuencia oriT del plásmido. bullet La cadena así cortada se ve desplazada por una helicasa codifica por otro gen tra del plámido. bullet Los productos de otros genes tra transfieren la cadena cortada al receptor. Al parecer, los extremos de esa cadena permanecen “anclados” a otra proteína Tra (es decir, durante el proceso nunca quedan extremos libres como tales). bullet Cuando la cadena rota ha terminado de entrar al receptor, la proteína Tra que mantenía los extremos 3’ y 5’, vuelve a unirlos (se rehace el enlace fosfodiéster). bullet Durante el proceso de transferencia de la cadena rota en el receptor, se están dando dos procesos de síntesis de ADN: por una lado, la cadena intacta de F del donador sirve como molde para sintetizar la correspondiente cadena complementaria (que es idéntica, claro está, a la cadena desplazada hacia el receptor); y al mismo tiempo, en el receptor, la cadena transferida, conforme va entrando, va sirviendo para sintetizar la cadena complementaria. De este modo, al final, el donador sigue siendo F+, y el receptor se ha convertido en F+.

Answer 37

La transferencia de ADN desde una célula F+ a una F-- es un proceso especial de replicación asimétrica por círculo rodante. Una de las dos cadenas parentales del plásmido F pasa a la célula receptora, replicándose en ella; bullet La otra cadena parental se queda en el donador, sirviendo a su vez como molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria. Esto explica porqué las células F+ siguen siendo F+ tras la conjugación. Por lo tanto, la transferencia de ADN no implica que la doble hélice de F desaparezca del donador para aparecer en el receptor, sino que al final, ambos miembros de la pareja poseen un plásmido F completo. Se finaliza la transferencia DNA Separación células

Answer 38

Plásmido integrado en el cromosoma -El plásmido integrado en el cromosoma se transfiere a partir de oriT siguiendo el modelo sigma. -A F- se transfiere parte del plásmido y un segmento del cromosoma.

Answer 39

-Igual que F+ x F- -Se transfieren genes cromosómicos

Answer 40

F+X F-→ F+o Hfr HfrX F-→ F- F’X F-→ F’ o Hfr

Answer 41

-El plásmido transferido puede mantenerse independiente o integrarse en el cromosoma dando lugar a una célula Hfr

Answer 42

-El ADN transferido a la célula F- se recombina con el cromosoma o es degradado

Answer 43

-El plásmido se puede quedar independiente (F’) o se puede integrar en el cromosoma (Hfr) -Puede haber recombinación del gen cromosómico (A x a)

Answer 44

-Habitual en todos los procariotas. -Muy eficiente como mecanismo de transferencia genética horizontal (HfrXF-). -Explica la difusión de caracteres (resistencia antimicrobiana) entre las bacterias. Ej. Plásmidos R: plásmidos parecidos al F pero llevan genes de resistencia a los antimicrobianos.

Answer 45

c.1). Virus bacterianos virulentos. Ciclo lítico 2 Virus bacterianos atemperados o moderados. Ciclo lisogénico y lítico 3Transducción generalizada 4 ) Transducción especializada

Answer 46

Transferencia de material genético en la que el ADN es transportado desde la célula donadora a la receptora a través de un bacteriófago. b) Descubrimiento Norton Zinder y Joshua Lederberg (1952)

Answer 47

El ciclo lítico: el fago infecta a una bacteria, la secuestra para hacer un montón de fagos y luego mata a la célula al hacerla explotar (lisar). El ciclo lítico es el método de reproducción viral, este es usualmente el principal método de duplicación viral e involucra la destrucción de células infectadas. El ciclo consta de las siguientes fases: 1. Fase de adsorción o fijación: El virus se une a la célula hospedadora de forma estable.

Answer 48

Tiene lugar cuando el ADN del bacteriófago se integra en el cromosoma bacteriano por recombinación específica de sitio.

Answer 49

La transducción se puede definir como el proceso de transferencia genética desde una célula donadora a otra receptora mediatizado por partículas de bacteriófagos que contienen ADN genómico de la primera. En la transducción podemos distinguir dos estapas diferenciadas: 1. Formación de la partícula fágica transductora: un trozo de material genético de la célula donadora se introduce en el interior de la cabeza de la cápsida de un fago. Las partículas transductoras son en cierta manera “subproductos” anómalos del ciclo normal del fago. 2. La partícula transductora inyecta de forma habitual el ADN que porta a la célula receptora, donde este ADN puede eventualmente recombinarse y expresar su información.

Answer 50

La transducción descubierta por Lederberg y Zinder se llama transducción generalizada. Mediante ella se puede transferir cualquier marcador del genóforo del donador, con aproximadamente la misma frecuencia relativa (de ahí el calificativo de generalizada). bullet La transducción generalizada se produce sólo como consecuencia de infecciones líticas. bullet El ADN del genomio de la bacteria donadora que es introducido en la partícula transductora suele ir sin acompañamiento de ADN del propio fago. Por ello, a esta peculiar partícula consistente en cápsida del fago que encierra sólo ADN genofórico de la bacteria se la denomina pseudovirión. extra info Se caracteriza porque en ella se puede transferir cualquier trozo de genóforo bacteriano, con tal de que tenga un tamaño compatible con la capacidad de “empaquetado” de ADN de la cápsida del fago. La partícula transductora (pseudovirión) se forma por empaquetamiento anómalo de ADN genofórico bacteriano. En el interior de la cabeza del pseudovirión sólo existe ADN bacteriano, sin ADN del fago. Las partículas transductoras sólo se forman como consecuencia de infecciones líticas del fago. Mecanismo de la transducción generalizada promovida por el fago P22 de S. typhimurium. 1ª fase: producción de las partículas fágicas transductoras (=pseudoviriones): Por encapsidamiento ilegítimo de ADN cromosómico. De vez en cuando, el sistema fágico encargado de introducir su ADN en la cápsida (sistema pac), se “equivoca”, y en su lugar introduce un trozo de tamaño equivalente del genóforo de la bacteria donde está teniendo lugar la infección ([1]). Al parecer, el cromosoma bacteriano contiene secuencias que eventualmente pueden ser reconocidas de vez en cuando por el sistema del fago, de manera que puede introducirse un trozo de ADN de Salmonella en la cápsida. Al final de esta fase, la célula hospedadora se lisa. El lisado (sobrenadante) contiene una mayoría de viriones auténticos y un pequeño número de pseudoviriones, cada uno con un trozo aleatorio distinto del genomio de la bacteria. 2ª fase: Destino del ADN del exogenote: Mezclemos el lisado obtenido en la fase anterior con un cultivo de la cepa receptora (dotada de marcadores genéticos adecuados). Cada pseudovirión inyecta de forma normal su ADN a una bacteria. Este ADN puede tener varios destinos posibles: a) puede ser destruido por exo- y endonucleasas citoplásmicas. b) Puede recombinarse con la región homóloga del genóforo del receptor, mediante la actuación del sistema de recombinación general dependiente de RecA. Se produce una recombinación con dos sobrecruzamientos (“crossing-overs”), que conduce a la integración de doble cadena de ese exogenote, con eliminación de la zona homóloga del endogenote. c) Puede ocurrir que el exogenote no sea ni destruido ni recombinado; este ADN puede persistir en la célula sin replicarse. La consecuencia de esto es que cuando la célula que originalmente recibió ese ADN exógeno se divida, lo pasará solo a una de las dos células hijas, la cual a su vez la pasará a una hija en la siguiente división, y así sucesivamente. Tenemos, pues, que el exogenote se va diluyendo en el clon por transmisión unilinear: tras varias generaciones, el clon consta de n-1 células sin exogenote y una sola célula con ese exogenote. A este fenómeno se le conoce con el nombre de transducción abortiva, y es más frecuente que la transducción completa derivada de recombinación (más de 90% frente a sólo 1-5%). La célula que alberga el exogenote abortivo puede expresar los genes de éste: por lo tanto, la célula transductante abortiva contiene proteínas derivadas del exogenote. Parte de las proteínas (en principio la mitad), pasarán a la célula hija que no reciba el exogenote en la siguiente generación. Las hijas de la hija (“las nietas no herederas del original”) reciben la cuarta parte, etc... es decir, aparte de la célula hija que en cada generación hereda el exogenote, sus parientes no-herederos más cercanos reciben proteínas derivadas de la expresión previa de los genes del exogenote. Esto significa que las células no herederas pueden poseer, durante unas pocas generaciones, la función o funciones del exogenote, hasta que el producto correspondiente se diluya o se inactive. Esto permite detectar fácilmente determinados tipos de transductantes abortivos, distinguiéndolos de los transductantes completos. Por ejemplo, si estamos seleccionando transductantes en base a la adquisición, por parte de una cepa receptora auxotrofa, de la versión silvestre del gen que tiene mutado, sembrando en placas de Petri con medio mínimo, se distinguen dos dos tipos de colonias: bullet colonias grandes, correspondientes a transductantes completos; bullet microcolonias, correspondientes a los transductantes abortivos. d) Si el exogenote es un plásmido, al llegar a la célula receptora, puede replicarse autónomamente. e) Si el exogenote contiene un transposón, éste puede insertarse en el genoma de la célula receptora. No todos los fagos virulentos pueden actuar como mediadores de transducción generalizada. Los fagos con esta capacidad suelen ser aquellos que no degradan totalmente el ADN del hospedador inmediatamente después de entrar (de otra manera, no habría ADN intacto que transducir). Además, su sistema de empaquetamiento de ADN no debe ser muy específico: fagos como el P22 de Salmonella typhimurium o el P1 de Escherichia coli tienen un mecanismo de empaquetado secuencial de unidades de concatémeros, mecanismo que reconoce secuencias que también existen con cierta frecuencia en el genoma del hospedador.

Answer 51

-La realizan fagos con ciclo lítico (virulentos). -La probabilidad de transferencia es igual para cualquier región del cromosoma. -El ADN transferido puede sufrir recombinación generalizada.

Answer 52

Siguiendo con la buena racha de descubrimientos, pocos años más tarde (1956), el mismo Lederberg (esta vez junto con su mujer, y con Morse) hallaron un tipo nuevo de transducción, mientras estaban estudiando el sistema del fago moderado l y su hospedador, E. coli. Este tipo de transducción recibió el nombre de transducción especializada, y sus caracteres distintivos son: sólo se transfieren marcadores cromosómicos cercanos al sitio de integración del ADN del fago (profago) en la célula lisogénica (p. ej., en el caso de l, los marcadores gal o bio); bullet se produce únicamente como consecuencia de la inducción de la célula lisogénica por escisión del profago y consiguiente entrada a fase lítica, productora de nuevas partículas de fago; bullet el ADN genómico de la bacteria transportado por la partícula transductora va unido a ADN del fago; bullet la célula transductante se suele convertir en lisogénica para el fago correspondiente. -La transducción no siempre va seguida de recombinación del ADN en la célula receptora.

Answer 53

-La realizan fagos con ciclo lisogénico cuando el profago se escinde y pasa a ciclo lítico. -Se transfieren las zonas del cromosoma próximas al lugar de integración del profago. -El ADN transferido tiene que sufrir recombinación generalizada.