12.3 : Banques d'ADN et reverse transcription

Question 1

Qu’est ce qu’une banque d’ADN

Answer 1

constitue l’ensemble des clones obtenus à partir d’un seul échantillon d’ADN

Question 2

Nommez les 3 types de banques d’ADN

Answer 2

• Banques d’ADN génomique
• Banques de ADNc
• Banque d’expression

Question 3

Qu’est ce qu’une banque génomique

Answer 3

Banque couvrant l’ensemble du génome. Le clonage des fragments d’ADN de grande taille dans des vecteurs BAC facilite leur manipulation et leur multiplication ainsi que leur conservation à long terme. Une banque BAC peut être utilisée pour identifier et isoler des gènes d’intérêt ou pour définir la cartographie physique et séquencer un génome

Question 4

Qu’est ce qu’une banque d’ADN complémentaire ( ADNc)

Answer 4

Il s’agit plutôt d’une banque fabriquée à partir d’ARNm à l’aide de la réverse transcription

Question 5

Qu’est ce qu’une banque d’expression

Answer 5

Banque dans laquelle le vecteur porte des signaux transcriptionnels permettant à n’importe quel insert cloné de produire un ARNm et en dernier lieu, une protéine

Question 6

V/F : la banque d’ADNc est spécifique à un tissu

Answer 6

Vrai, Contrairement à la banque génomique

Question 7

Expliquer la construction de l’ADNc

Answer 7

1) Typiquement ces banques sont construites a partir de l’ARNm poly A_+ d’un organe ou type cellulaire spécifique.
2) Ces ARNm sont copiés en ADNc via la reverse transcriptase.
3) La synthèse d’ADNc est souvent amorcée via un petit oligonucléotide complémentaire à la queue poly-A (oligo(dT) primer).
4) L’ADNc à simple brin est ensuite converti en ADNc double brin par la DNA polymérase ou par la réaction PCR (à voir après) après la ligature d’oligonucléotides nommés adaptateurs.