12.2 : Enzyme de restriction et clonage moléculaire

Question 1

Qu’est ce que l’ADN recombinant

Answer 1

Molécule d’ADN créée en laboratoire à partir de séquences provenant de plusieurs sources.

Question 2

Comment on appelle les méthodes pour créer l’ADN recombinant

Answer 2

Clonage moléculaire / Clonage

Question 3

Qu’est ce que l’ADN recombiné

Answer 3

le résultat de l’utilisation de diverses techniques capables de prélever des molécules d’ADN d’un organisme, puis de la manipuler en laboratoire et de la remettre dans un autre organisme

Question 4

Exprimer les grandes étapes lors du clonage

Answer 4

• Préparation du vecteur: enzymes de restriction
• Préparation de l’ADN à insérer
• Réalisation d’un recombinant: ligation
• Incorporation à l’hôte: transformation

Question 5

Qu’est ce que les plasmides

Answer 5

• des petits éléments génétiques extra-chromosomiques
• ADN double brin, circulaire et capable de réplication autonome

Question 6

Les plasmides donne quelle avantage à la cell. hôte

Answer 6

• Résistance aux antibiotiques
• Résistance aux métaux lourds
• Dégradation de composés aromatiques

Question 7

Les plasmides peuvent être utilisée pour quoi lors du clonage , pourquoi sont ils parfait pour ce rôle

Answer 7

bons vecteurs de clonage chez les bactéries
=> qu’ils se multiplient en nombre de copies important
=>ils sont aisément purifiables.
=> Les marqueurs de sélection (Ex. gènes de résistance aux antibiotiques) permettent l’identification des bactéries (transformées) qui les portent

Question 8

Qu’est ce qu’on utilise pour insérer des fragments d’ADN dans un vecteur plasmidique

Answer 8

des enzymes de restriction

Question 9

Quel sont les rôle des enzyme de restriction dans le clonage

Answer 9

• coupent l’ADN dans des séquences spécifiques
• protègent les bactéries contre les phages

Question 10

Quel est le site de reconnaissance pour un enzyme de restriction

Answer 10

Le site de restriction dans l’ADN

Question 11

Comment on reconnait un site de restriction dans l’ADN

Answer 11

. Le site de restriction est un palindrome
=> une symétrie avec sa séquence complémentaire et non avec elle-même; ainsi, la séquence ACCTAGGT sera dite palindromique, bien qu’elle ne soit pas elle-même symétrique, car elle est symétrique de la séquence TGGATCCA

Question 12

Quel est la structure des enzymes de restriction

Answer 12

souvent des protéines homodimériques et chaque sous-unité reconnait l’un des deux brins de l’ADN

Question 13

Qu’est ce qui est capable de lier de façon covalente deux molécules d’ADN afin d’en générer une seule.

Answer 13

Une enzyme , la ligase

Question 14

Résumé les étapes pour obtenir l’ADN recombinant

Answer 14

1) Cliver le vecteur avec une enzyme de restriction

2) Cliver l’ADN étranger avec la même enzyme de restriction

3) Mélanger le vecteur et le fragment d’ADN dans des conditions favorables à l’appariement des bases

4) Traiter avec de l’ADN ligase pour lier les fragments d’ADN de manière covalente

Question 15

Quelle est la taille maximale approximative du fragment d’ADN qui peut être cloné dans chaque vecteur

Answer 15

Plasmide => 10 ADN cloné en Kb
Phage => 25
BAC => 300

Question 16

Les BAC ( Bacterial Artificial Chromosomes ) sont fait à partir de quoi

Answer 16

Plasmide F

Question 17

Tous les vecteurs plasmidique contiennent quoi

Answer 17

• un polylinker, un gène de résistance à un antibiotique comme marqueur de sélection

Question 18

l’ADN est introduit dans les bactéries traitées par quoi

Answer 18

choc thermique ou par choc électrique.

Question 19

Qu’est ce que la compétence d’une bactérie

Answer 19

on dit qu’une bactérie est compétente lorsqu’elle est capable de recevoir un vecteur plasmidique

Question 20

Quel est le 1e médicament obtenu via la technologie de l’ADN recombinant

Answer 20

L’insuline