Sequenciamento Automatizado - Técnica Flashcards
Sequenciamento Automatizado - Amostra
Mistura de Reação do Sequenciamento
Mistura de Reação do Sequenciamento - Composição 5
DNA Template / Molde
TAQ polymerase
Primer
dNTPs → Deoxynucleotídeos
ddNTPs → Dideoxinucleotídeos
Amostra - Qual a diferença da amostra de Reação da PCR Convencional e da amostra utilizada para o sequenciamento? 2
Primers → Sequenciamento utiliza 1 / PCR Convencional utiliza 2
NTQs → Sequenciamento adiciona dNTQs e ddNTQs / PCR convencional → adiciona somente dNTQs
DNA Molde - O que é?
Produto da PCR → Amplicon (material amplificado na reação de PCR convencional)
Somente 1 Primer - Por que?
Objetivo não é cercar o Primer e o isolar → e sim anelar o Primer para que a taq adicione nucleotídeo e chegue ao ddNTQ e pare → então pega outro e começa de novo → para gerar vários fragmentos com tamanhos diferentes.
Sequenciamento - Importância da Técnica 2
TAQpol → característica de cometer mais erros que a DNA polimerase
Técnica → permite identificar a sequência de nucleotídeos → garantindo que a Taq não adicionou nucleotídeos diferentes.
Sequenciamento - Objetivo
Gerar vários fragmentos com tamanhos diferentes.