Gel da Poliacrilamida → para Proteína Flashcards
Proteína - Analise
Técnica Vertical
Cuba → montada na vertical
Gel para Proteína - Onde é feito?
Entre 2 placas → de vidro / acrílico (plástico) → afastadas uma da outra por 1mm
Gel para Proteína - Espessura
1mm → folha de pape mole
Gel para Proteína - O que é realizado com ele?
Submerso no tampão de agarose.
Cubas - Polos
Positivo
Negativo
Amostra - Onde é colocada?
Após o preparo → a proteína (amostra) é colocada → nos poços / canaletas.
Poços / Canaletas - Como são feitos?
São moldados com o pente.
Amostra - Preparo da Proteína 3
Proteína deve ser → desnaturada.
Proteína deve ser → corada.
SDS → deve ser adicionado.
Desnaturação → ?
Corante → ?
Desnaturação → βmercaptoetanol
Corante → Azul de Bromofenol (Indicador da Corrida)
SDS - Funções 2
Lise Celular
Fornece Carga - para proteína
Corrida - Sentido
Do polo negativo → pro polo positivo.
Por isso → a proteína deve ter a carga negativa → para correr em direção à carga positiva.
DNA - Carga
Naturalmente → negativa → devido ao fosfato.
Gel - Cor
Transparente → deve ser corado
Gel - Corantes → Tipos 2
Comassie Blue
Nitrato de Prata
Gel - Corantes → Funções
Comassie Blue → ?
Nitrato de Prata → ?
Gel - Corantes → Funções
Comassie Blue → especificidade grande com proteína
Nitrato de Prata → utilizamos quando trabalhamos com proteínas muito pequenas