Seleção dos Fagos Recombinantes Flashcards
Papel Absorvente - O que é?
Papel que será utilizado para a seleção.
Sonda - O que é?
Pequeno segmento de DNA com sequências complementares ao inserto
Seleção dos Fagos - 1º Passo
Colocamos um papel absorvente em cima da placa que iremos trabalhar → fazendo como um carimbo.
Seleção dos Fagos - Ao fazer como se fosse um carimbo:
Parte das placas de lise irão se transferir para o papel.
Seleção dos Fagos - Após parte das placas de lise se transferirem ao papel:
Utilizamos a sonda → colocando-a sobre as placas de lise no papel absorvente.
Seleção dos Fagos - Ao colocar a sonda sob e as placas de lise no papel absorvente:
Essa sondas iria se ligar aos insertos por complementariedade de base → elas irão hibridizar.
Hibridização de Moléculas de DNA
Fitas 5’ 3’ → ao serem aproximadas → criam pontes de hidrogênio que se complementam.
Carimbamos placa de lise com papel absorvente → Colocamos sonda → que se ligam ao inserto (gene de interesse) → Pegamos esse papel:
E fazemos um filme radiográfico.
Filme Radiográfico - Ao fazer:
Onde a sonda se ligou → mancha de preto.
Filme Radiográfico - Após obter a mancha:
Comparamos a cultura ao filme radiográfico.
Marcação - Importância
Para nós permitir identificar na placa onde está o local que foi manchado ao passar o papel filtro pelo filme radiográfico.