PCR - Ciclos ​

Question 1

Após obter o tubo com a mistura de reação:

Answer 1

Adicionamos o tubo num equipamento → Termociclador.

Question 2

Equipamento - Nome

Answer 2

Termociclador

Question 3

Termociclador - Após colocador o tubo nele:

Answer 3

Programamos o equipamento.

Question 4

Ciclo - Quantidade

Answer 4

25~35 Ciclos

Question 5

Ciclo - O que ocorre?

Answer 5

A cada ciclo → o número de cópias do fragmento de interesse será amplificado.

Question 6

Ciclo - O que comprrende um ciclo?

Answer 6

Desnaturação

Anelamento

Extensão

Question 7

Desnaturação - Tipo / O que ocorre? 2

Answer 7

Térmica → 94-96º C

Rompem-se as pontes de hidrogênio no DNA alvo.

Question 8

Anelamento - O que ocorre?

Answer 8

Dos primers → 50-65º C

Question 9

Extensão - O que ocorre?

Answer 9

Por atividade da polimerase → 72º C.

Question 10

Desnaturação - Importância da Alta Temperatura

Answer 10

Abrir a dupla fita de DNA → para que os primers possam se emparelhar

Question 11

Anelamento / Hibridização - O que ocorre?

Answer 11

Ligação dos primers → e para isso o DNA precisa estar desnaturado (separado → com as pontes de hidrogênio quebradas).

Question 12

Anelamento / Hibridização - Temperatura

Answer 12

Menor → temperatura dos primers a 50-65°C

Question 13

Após o anelamento:

Answer 13

Primers se ligaram na fita → então as DNApolimerases podem vir → permitindo com que ocorra a polimerização do DNA.

Question 14

Primer - Importância 2

Answer 14

Para um nucleotídeo ser adicionado → precisamos da hidroxila livre → que é proveniente do primer.

Seu último nucleotídeo → tem OH livre no 3’ → que faz a ligação fosfato com o 5’ do próximo segmento que será adicionado pela DNApol.

Question 15

Ciclo - Composição 3

Answer 15

Desnaturação do DNA molde

Anelamento dos Primers

Extensão da Fita Nova

Question 16

Extensão - O que ocorre?

Answer 16

Taq polimerase vem → e estende a fita → usando como molde a fita aberta.

Question 17

Extensão - Temperatura

Answer 17

Normalmente → 72ºC

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