Sequenciamento Automatizado - Etapas da Técnica Flashcards

1
Q

Técnicas - Etapas 6

A

1- Reação de PCR para o Sequenciamento

2- Precipitação da Reação de Sequenciamento

3- Preparação da Amostra para o Sequenciamento

4- Sequenciamento

5- Fragmentos são separados por cromatografia em gel (tubo capilar).

6- Detecção ocorre a partir de laser de argônio.

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2
Q

1-Reação de PCR para o Sequenciamento - O que ocorre? 2

A

TAQpol → no momento que adiciona um dDNTP → para → se liga a outro → e polimeriza um novo fragmento.

No final → obteremos fragmentos com tamanhos diferentes → que estarão sujos

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3
Q

1-Reação de PCR para o Sequenciamento - Problema

A

Dentro do tubo → também teremos tranqueiras indesejáveis e que podem dar problema na hora do resultado (restos de primer…) → então temos que limpar.

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4
Q

1-Reação de PCR para o Sequenciamento - Para limpar:

A

Precipitação da Reação de Dequenciamento

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5
Q

2-Precipitação da Reação de Sequenciamento - Função 2

A

Preservação dos Capilares do Sequenciador

Garantir a Qualidade das Sequências Produzidas

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6
Q

2-Garantir a Qualidade das Sequências Produzidas - Importância

A

Evitar que o equipamento entre em pane

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7
Q

2-Precipitação da Reação de Sequenciamento - O que é retirado? 3

A

Restos de Primer

ddNTPs

Alguns Sais

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8
Q

2-Precipitação da Reação de Sequenciamento - Importância

A

Tubo → deve conter somente os fragmentos → que vão estar na forma de fita dupla → e eles devem estar na forma de fita simples.

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9
Q

3-Preparação da Amostra para o Sequenciamento - Função

A

Desnaturação da Dupla Fita de DNA → com formamida e alta temperatura (70ºC/10m) → obtendo vários fragmentos de fita simples.

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10
Q

3-Preparação da Amostra para o Sequenciamento - Fragmentos Obtidos 2

A

Maiores

Menores → mais leves → vão na frente

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11
Q

3-Fragmentos de Dupla Simples - O que ocorre após a sua obtenção?

A

Sequenciamento.

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12
Q

4-Sequenciamento - Como é realizado?

A

Eletroforese por capilares

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