Sequenciamento Automatizado - Adendos Flashcards
TAQpol - Como funciona? 4
Se liga ao Primer → e polimeriza a cadeia.
Quando a TAQ polimerase adiciona um ddNTP → a mesma para de sintetizar
Então → se liga a outro Primer → polimerizado um novo fragmento.
No final → serão obtidos vários fragmentos de tamanho diferente.
Fragmentos - Entrada no Capilar
Em ordem → do decrescente → para o crescente.
Eletroforese por capilares - Durante o início do procedimento: 2
Máquina → se confunde → e perde muitos nucleotídeos → colocando N no gráfico.
Eventualmente → a máquina passa e entender o que está sendo adicionado →e passa a alimentar o gráfico com resultados.
Eletroforese por capilares - Margem de Erro
60-70 nucleotídeos (ideal 100)
Gráfico - Tamanho do Pico
Representa a quantidade de fragmentos que foram simplificados.
Gráfico - Quando apresenta problema, observamos:
Degraus altos → que se sobrepõem com os picos → resultando em picos baixos.
Software → não entende → coloca cor preta no gráfico.
Gráfico - Causas do Erro 4
Precipitação → não foi removida adequadamente
Capilar → problemático
Placa → suja
Fazer de qualquer jeito → leva a imperfeição → resultando em procedimentos de análise não segura.
