Seleção das Bactérias Transformadas → Seleção Azul / Branca Flashcards
Bactéria de meu interesse:
Aquelas que tem o plasmídeo com o inserto.
Seleção Azul / Branca - Importância
Para eu saber quem tem o plasmídeo com o inserto.
Placa de Cultura - Adicionamos 3
Antibiótico
IPTG no meio
X-gal
IPTG - Função
Induz a expressão do gene Lac Z → que expressa a B-galactosidade.
Bactérias - Ao se proliferarem:
Todas as bactérias que conseguiram absorver o plasmídeo serão resistentes ao antibiótico.
Bactérias - Que não produzirem beta galactosidade:
No tem inserto → e o X-Gal fica sozinho
X-Gal - Função
Mostra a colônia de bactérias que não recebeu o inserto.
Colônia de Bactérias - Quando não recebeu o inserto:
Vai ter a capacidade produzir a enzima B-galactosidade.
Colônia de Bactérias - Ao produzir a enzima B-galactosidade:
Enzima B-galactosidade → quebra / hidrolisa o X-Gal → e a colônica fica azul.
Colônia de Bactérias - Quando recebeu o inserto:
Não vai ter a capacidade produzir a enzima B-galactosidade.
Colônia de Bactérias - Quando recebeu o inserto → Consequência
Não produz B-galactosidade → X-Gal fica quietinho envolta das células → não vai ser quebrado → célula fica branca.
Colônia Azuis → ?
Colônias Brancas → ?
Colônia Azuis → não receberam o inserto
Colônias Brancas → receberam o inserto
Inserto → colocado no Polilynker:
Molécula de DNA recombinante
Tubo - Plasmídeo 2
Plasmídeo → ?
Plasmídeo → ?
Tubo - Plasmídeo 2
Plasmídeo → com inserto
Plasmídeo → sem inserto
Tubo - Plasmídeos c/ Inserto / s Inserto → Formação de Colônias
Eu vou ter tanto plasmídeos intactos quanto alterados.
Alterados → receberam o inserto.