Mikrobiologisk diagnsotik Flashcards
Vad innefattar mikrobiologiska metoder?
Traditionell mikrobiologi (mikroskopiering, odling, artbestämning, resistensbestämning)
Molekylärbiologi (PCR)
Serologi
Ny mikrobiologi (NGS, WGS, metagenomik)
Vad är traditionell mikrobiologi?
Mikroskopering av bakterier, svamp och parasiter. Odling för artbestämning och resistensbestämning. Nackdel är att alla bakterier (såsom mykoplasma & tuberkulos) inte går att odla på ordinärt sett (plattor). Tar även lång tid (oftast >24h) och är en subjektiv bedömning.
Odling: Provinsamling -> utodling -> inkubering över natten -> avläsning)
Hur sker artbestämning?
Artbestämning sker genom masspektrometri (MALDI-TOF) där varje art har ett unikt spektrogram.
Hur sker resistensbestämning med diskdiffusion?
Disk(lapp) innehållande antibiotikum placeras på odlingsplattan (1-6st lappar får plats på en platta). Vid känslighet bildas en hämnings-zon vars diameter översätts till svaret (känslig = stor zon, resistent = liten zon).
Hur sker resistensbestämning med MIC?
MIC (minsta inhiberbara koncentrationen):
Översätts till SIR-systemet (lågt värde = känslig, högt värde = resistent).
S= Susceptible, standard dose (Känslig/Sensitiv).
I= Susceptible, increased exposure.
R= Resistant (Resistent).
Vad kan man påvisa med molekylärbiologi?
Samtliga smittämnen men framförallt virus.
Vad är PCR?
Påvisar nukleinsyror (DNA/RNA). Mycket snabb automatiserad process. Kan ej skilja på levande/döda mikroorganismer. Den höga sensitiviteten kan leda till att många agens detekteras med oklar relevans till infektionen/den kliniska bilden – kan orsaka bedömningssvårigheter.
Hur kan man tänka med kvantifikation av PCR?
Ju färre PCR-cykler som krävs för att påvisa nukleinsyran, desto mer patogener fanns i provet (10-20 cykler = mycket patogener, 40 cykler = lite patogener). Används för diagnosticering eller för att följa behandling.
Vad är serologi?
Detektion av antikroppar (främst virus) genom ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) eller immunokromatografi (snabbtester).
När använder man serologi?
Används för immunitetskontroll/diagnostik (Hepatit A-E, HIV, CMV/EB, HSV/VZV, TBE, borrelia, Toxoplasma, Syfilis).
Serologi används sällan för bakteriella agens då det är mycket svårt att skilja på aktuell/tidigare infektion samt att bakterier ofta ändrar sina ytantigen vilket försvårar specificiteten.
När ska man aldrig använda serologi?
hos immunsupprimerade
Vad är 3 typer av ny bikrobiologi?
NGS (next generation sequencing, omfattande parallell sekvensering, används främst på sterila punktat/CNS/ledvätska),
WGS (whole genome sequencing, helgenomsekvensering för att ex. finna resistensmutationer),
metagenomik (NGS-analys av allt genetiskt material i prov).
Vad ingår i en generell mikrobiologisk utredning?
- Status: Finns klinisk misstanke om infektionsorsakade symptom? Misstänkt infektionsfokus?
- Klinisk kemi: CRP, LPK, Procalcitonin. Oklart fokus i slutenvård bör föranleda en ”rundodling” för avsmalning av antibiotikavalet.
- Misstänkt mikrobiologiskt agens:
Bakterier eller svamp: Odling.
Virus: Serologi eller PCR.
Hur tar man en blododling? 5 steg
- Desinficera huden för att minska risken för kontamination av hudbakterier.
- Ta ett slaskrör.
- Fyll de båda blododlingsflaskorna ordentligt (8-10ml).
- Blododling med (1 aerob flaska + anaerob flaska) x 2.
- Blododlingen inkuberas -> gramfärgning -> mikroskopering -> art- och resistensbestämning. Tar oftast 6-12h till en flaska blir ”positiv” vid klinisk infektion (men 90% blir positiva inom 2 dygn).
När får man de olika preliminärsvaren och vad säger dem?
· Preliminärt svar 1 (minuter): Mikroskopi.
· Preliminärt svar 2 (1-2 h): Artbestämning.
· Preliminärt svar 3 (6-8 h): Snabbresistens.
· Slutsvar (ca. 24h): Art + resistensbestämning.