Protéines cours 7 JPE - Immunoessais Flashcards
Vrai ou faux : Les immunoglobulines possèdent une réactivité antigénique identique sur leur 2 sites antigéniques
VRAI
Quelle est la différence entre une liaison monovalente, bivalente et monogame?
- Monovalente : Liaison de 1 molécule avec 1 seul site de liaison
- Bivalente : Liaison de 2 molécules différentes (1 par site de liaison)
- Monogame : Liaison de 1 molécule avec les 2 sites de liaison
Quelle est la différence entre un “immunogène” et un “antigène” ?
- Immunogène : Toute molécule qui suscite une réponse adaptative après injection chez un hôte
- Antigène : Molécule qui réagit avec les sites de reconnaissance antigénique d’un Ab
Quelle est la différence entre un épitope conformationnel, linéaire et un néo-épitope?
- Épitope conformationnel : Dénaturation = perte de l’épitope complet ou partiel (repliement)
- Épitope linéaire : Dénaturation n’affecte pas l’épitope
- Néo-épitope : Créé par protéolyse (dénaturation et apparition de la réactivité antigénique)
Compléter la phrase :
De larges complexes immuns se produisent lorsque ___________ est en quantité suffisante, alors que de petits complexes immuns se forment lorsque _________ est en excès
De larges complexes immuns se produisent lorsque l’anticorps est en quantité suffisante, alors que de petits complexes immuns se forment lorsque l’antigène est en excès
Quelle est la différence entre l’affinité et l’avidité (interaction Ab-Ag)?
Affinité :
- Représente la force d’attraction d’un Ab pour un site Ag particulier
- 1 seul site de liaison
- Intensité du lien d’un Ab avec un Ag
Avidité :
- Représente la force de liaison entre un sérum polyclonal et une macromolécule poly Ag
- Intensité globale du lien de l’ensemble des sites de liaison d’un Ab pour un Ag
- Somme de l’affinité de chaque site de liaison à un Ab
Qu’est ce que le titre d’un anticorps?
-
Titre : inverse de la dilution maximale d’un anti-sérum qui produit une réaction positive
- Ex : Dilution 1/16 produit une rxn + et dilution 1/32 produit rxn - (titre = 16)
Vrai ou faux : Un sérum polyclonal aura une grande avidité pour un Ag donné
VRAI
Plusieurs Ab de spécificité différente, plusieurs sites de liaison. Avidité = somme de l’affinité de chaque Ab
Compléter la phrase :
La sensibilité analytique d’un immuno-essais augmente si __________ entre l’Ab et Ag augmente
La sensibilité analytique d’un immuno-essais augmente si l’affinité entre l’Ab et Ag augmente
Nommer des facteurs qui influencent la force de liason Ab-Ag
- Force ionique de la solution (↑ FI = ↑ dissociation)
- Type de cations
- Plus le rayon du cation est grand, plus grand est son effet d’inhibition du complexe Ag-Ab
-
Polymères utilisés
- ↑ MW polymère = ↓ solubilité des protéines
- polymère est gros, + il prend de place et + les protéines sont collées = favorise précipitation (↓ solubilité)
Vrai ou faux : La liason Ab-Ag est dynamique
VRAI
Elle s’équilibre toujours (pas constant/fixe)
Qu’est-ce qui caractérise l’exactitude d’un immunoessais?
La spécificité d’un Ab (capacité à réagir seulement avec la substance d’intérêt)
Quels anticorps ont une plus grande spécificité : Ab polyclonaux ou Ab monoclonaux? Pourquoi?
Ab monoclonaux :
- Dirigés contre un épitope unique
Ab polyclonaux :
- Plusieurs épitopes reconnus
- Risque de réactivité croisée
Nommer quelques facteurs d’inexactitude en immunoessais (limites)
- “qualité” de l’Ab (type, réactivité, affinité, avidité)
- “qualité” de l’Ag (Intégrité, stabilité, complexes)
- Réactions croisées
- Défauts de l’Ag (structure, instabilité, inhibition, liaison)
- Défauts de l’Ab (variation inter-lots, source, stabilité, temps de réaction)
- Effet crochet
Quelles sont les 3 phases de la formation d’un complexe immun?
- Reconnaissance et liaison entre Ab et Ag
- Réversible
- Développement d’un réseau Ag-Ab
- Rapport moléculaire entre Ag et Ab important pour formation du réseau (excès de l’un ou l,autre inhibe formation du réseau)
- 2-3 Ab pour 1 Ag
- Rapport moléculaire entre Ag et Ab important pour formation du réseau (excès de l’un ou l,autre inhibe formation du réseau)
- Précipitation du complexe après atteinte d’une grandeur critique
- Zone d’équivalence = précipitation
Expliquer le principe de la courbe d’Heidelberg
Courbe d’Heidelberg : Courbe de précipitation Ag-Ab
- Zone en excès d’Ab
- Zone d’équivalence ([Ab] = 2 x [Ag])
- Réarrangement continu du réseau
- Réseau maximal
- Zone d’excès d’Ag
Comment peut-on confirmer l’identité entre des Ag à l’aide de la méthode d’Ouchterlony?
- 2 Ag placés dans 2 puits différents
- Migration en présence d’un 3e puit contenant un Ab
Résultats :
- S’il y a identité entre les 2 puits contenant les Ab, les deux arcs de précipitations issus de deux puits voisins se rejoignent (Ne se croisent pas)
- Si deux arcs de précipitations issus de deux puits voisins se croisent, cela signifie que les deux puits contenaient des antigènes différents et que le sérum de l’individu était séropositif pour ces deux antigènes
***Vrai ou faux : La dispersion lumioneuse varie selon la taille de la molécule (ou du complexe immun)
VRAI
- Dispersion de Rayleigh (taille < 1/10 de lambda)
- Dispersion dans tous les sens
- Dispersion de Rayleigh-Debye (taille entre lambda et 1/10 de lambda)
- Dispersion renforcée vers l’avant
- Dispersion de Mie (Taille >>> lambda)
- Dispersion renforcée vers l’avant
Important pour le design des méthodes de détection (néphélémétrie vs turbidimétrie)
