PCR, RT-PCR, qRT-PCR Flashcards
Cosa significa verificare l’ espressione genica e quali sono le strategie utilizzabili per farlo?
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Nello studio dell’ espressione di un gene, verificabile trovando l’mRNA o proteine associate ad esso, come si può risolvere il problema legato all’ eccessiva piccolezza o bassa quantità di questi ultimi in un campione?
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Cosa significa fare PCR, da chi fu inventata e per quale patologia?
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Cos’ è necessario inserire in provetta per la PCR affinché possa avvenire il processo di replicazione del DNA?
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Quali sono le caratteristiche chimiche della soluzione inserita nella provetta per PCR?
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Cosa è necessario che avvenga nella PCR dopo aver preparato la provetta contenente il campione e quanto DNA dovrà essere presente alla fine per fare si che sia visibile all’ occhio umano?
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Quale molecola è necessaria nella PCR per fare legare la DNA polimerasi al filamento stampo, in corrispondenza di cosa si dovrà appaiare, quali sono le sue caratteristiche e perché queste sono necessarie?
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Perché nella PCR si una una coppia di primer anziché utilizzarne uno singolo? Come si dispongono l’uno rispetto all’altro?
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Perché si sceglie un primer a DNA anziché ad RNA?
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Dopo l’appaiamento dei primer sui filamenti stampo nella PCR cosa avviene e cosa si ottiene nella fase successiva?
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Cosa si ottiene dopo 2 cicli di PCR? Cosa invece dopo 3 cicli? Quindi che succede ad ogni ciclo?
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Quale molecola nella PCR mi darà conferma dell’espressione di un gene del DNA? Da cosa è delimitato alle estremità? In quale fase della PCR si formerà per la prima volta?
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Quali sono le tre fasi della PCR, cosa accade in ciascuna di esse? Cosa accade al termine della terza fase?
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Cosa si troverà alla fine della PCR nel tubo di reazione?
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Come si ottiene la denaturazione del DNA nella prima fase della PCR? Che temperatura si usa?
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Che temperatura si usa nella fase di annealing della PCR e perché?
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Che temperatura si usa nella fase di extension della PCR e perché?
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Che tipo di strumento si utilizzava inizialmente per passare da una temperatura all’ altra nelle varie fasi della PCR e come veniva utilizzato?
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Quale DNA polimerasi si utilizzava inizialmente nella PCR, da quale venne poi sostituita e quali sono le caratteristiche della seconda che la rendono più efficiente rispetto alla prima?
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Da quale strumento furono sostituiti i termoblocchi nella PCR? Quale è il vantaggio?
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La reazione della PCR procede all’ infinito o vi è un limite?
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Se si proietta su un grafico la quantità di prodotto che via via si ottiene con la PCR in relazione al numero dei cicli, come è la curva? Che cos’ è la fase di Plateau?
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Quale è il primo principio che viene sfruttato nell’ elettroforesi su gel di Agarosio?
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Quale è il secondo principio che viene sfruttato nell’ elettroforesi su gel di Agarosio?
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