Metode de analiza Flashcards
Care sunt cele 3 aspecte importante care trebuie luate in considerare pentru fiecare metoda de analiza ?
metodologia
colectarea datelor
interpretarea rezultatelor
Ce este filtrarea ?
Filtrarea este o metodă de separare folosita pentru separarea substantelor pure în amestecuri de particule.
Unele dintre particule sunt suficient de mari pentru a fi captate cu un material poros.
Mărimea particulelor poate varia considerabil, în funcție de tipul de amestec.
De exemplu, apa curgătoare este un amestec care conține organisme biologice naturale, cum ar fi bacterii, viruși și protozoare.
Unele filtre de apă pot filtra bacteriile, care au aproximativ 1 micron lungime.
Alte amestecuri, cum ar fi solul, au particule relativ mari care pot fi filtrate cu un filtru de cafea
Viteza de sedimentare a eritrocitelor(RBC)
Viteza de sedimentare a eritrocitelor (RBC) este o tehnică folosită în medicină ca marker al bolilor sistemice (a căror cauză nu este pe deplin înțeleasă).
Testul implică plasarea sângelui integral combinat cu un
anticoagulant în tub vertical și monitorizarea ratei la care celulele roșii din sânge (RBC)cad in timp.
Sarcinile negative ale eritrocitele le fac să se lipească împreună.
Dacă această sarcină este neutralizată, prin aranjarea eritrocitelor în așchii în lanțuri, sau rulou, acestea vor cădea mai repede, crescând viteza de sedimentare.
O rată de sedimentare mai mare decât este normală poate indica existența unei inflamații în organism.
Inflamația face parte din răspunsul sistemului imunitar.
Poate fi o reacție la o infecție sau traumă sau poate fi, de
asemenea, un semn al unei boli cronice sau autoimune sau al
unei alte afecțiuni medicale.
Centrifugarea
Centrifugarea este o tehnică utilizată pentru separarea particulelor dintr-o soluție în funcție de dimensiunea, forma, densitatea, vâscozitatea mediului și viteza rotorului.
Particulele sunt suspendate într-un lichid mediu și plasat într-un tub de centrifugă.
Tubul este apoi plasat într-un rotor și rotit cu o viteză definită.
Separarea prin sedimentare ar putea sa se faca în mod natural cu
gravitația pământului,cu toate acestea, ar dura veacuri.
Centrifugarea face acest proces natural mult mai rapid.Rotirea rotorului în jurul unei axe centrale generează o forță centrifugă asupra particulelor din suspensie.
Ce factori influenteaza sedimentarea?
Densitatea atât a probelor, cât și a soluției
Temperatura/vâscozitatea
Distanța de deplasare a particulelor
Viteza de rotație
Ce este o centrifuga ?
O centrifugă este un dispozitiv care separă particulele dintr-o soluție prin utilizarea unui rotor.
În biologie, particulele sunt de obicei celule, organite subcelulare sau molecule mari, toate acestea fiind denumite aici particule.
Există două tipuri de propceduri;
-unul este pregătitor,al cărui scop este izolarea particulelor specifice,
-celălalt este analitic, care presupune măsurarea proprietăţile fizice ale sedimentării particulelor.
Pe măsură ce un rotor se rotește într-o centrifugă, fiecărei particule din probă i se aplică o forță……….
particula se va sedimenta apoi la o rată…………… cu forța ………. aplicată acesteia.
forta centrifuga
rata proportionala
La o forță centrifugă fixă și o vâscozitate lichidă, viteza de sedimentare a unei particule este ……….. cu dimensiunea acesteia (greutatea moleculară) și cu diferența dintre densitatea particulelor și densitatea soluției.
proportionala
ce este cromatografia si componentele necesare
=un proces fizico-chimic prin care pot fi separate componentele unui amestec în stare gazoasă sau lichidă
Componente:
1.coloana
2.faza stationara
3.faza mobila
4.esantion
Cromatografia in faza lichida(LC)
-faza mobila este un lichid
-faza stationara - pulbere
Cromatografia de absorbtie(lichid/solid)
-faza staționară este un mediu solid la care speciile aderă prin efectul dublu de fiziosorbție și chimisorbție
Cromatografie ionica(IC)
faza mobilă este o soluție tampon, în timp ce faza staționară este solidă
are o suprafață compusă din situsuri ionice;
fazele permit schimbul contraionului lor mobil cu ioni de aceeași sarcină prezenți în probă
Cromatografia de excludere a mărimii (SEC)
faza staționară este un material care conține pori ale căror dimensiuni sunt selectate în funcție de dimensiunea speciilor care urmează să fie separate
-metoda foloseste o forma de permeabilitate selectiva la nivel molecular: filtrarea pe gel
Cromatografia gaz/solid(GSC) sau gaz/lichid(GLC)
-este singura formă de de cromatografie care nu utilizează o fază mobilă pentru interacțiunea cu analitul.
- faza stationara gaz sau lichid pe un suport inert
ce se intampla atunci cand radiatia interactioneaza cu materia ?
Atunci când radiația interacționează cu materia poate fi: absorbită, împrăștiată sau poate provoca emisia de alte radiații
– măsurarea radiației electromagnetice poate oferi informații despre proba de analit
metoda spectroscopica si ce permite sa aflam
Este o metodă bazată pe interacțiunea radiațiilor cu probele
Ne permite sa aflam:
tipul de solutie – in functie de lungimea de unda la care absoarbe solutia analizata
concentratia solutiei – in functie de intensitatea absorbantei solutiei
Spectroscopie de absorbtie ultravioleta si vizibila
-masoara absorbtia intre 180-1100 nm in apropierea radiatiei UV, vizibil si infrarosu foarte apropiat
-spectrele sunt obținute utilizand o probă care conține un număr mare de molecule sau alte specii individuale
dispozitivul folosește 3 lămpi
1 lampă UV
2 lămpi în vizibil
3 lămpi IR
Ecuația Lambert-Beer
ne ajută să calculăm concentrația unui compus în soluția analizată cunoscând absorbanța
cromoforii si cromoforii izolati
Cromoforii sunt grupe funcționale de compuși organici responsabili de absorbția radiatiei UV/Vis
Cromofori izolați – pentru unele molecule cu același cromofor poziția și intensitatea benzilor de absorbție rămân constante
spectroscopia in infrarosu(IR)
- este o metodă de analiză în care se determina absorbția/transmisia radiației infraroșii
- poate fi utilizată pentru a identifica compușii aflati in proba
Absorbția luminii în acest câmp provine din interacțiunea dintre radiații și legăturile chimice dintre atomii din proba
spectroscopie de fluorescenta cu raze X
-este o metoda foarte precisa de masurare cantitativa a compozitiei elementare pentru toate tipurile de probe (mai exact se pot determina cu multa precizie atomii care intra in
compozitia probei)
-Razele X bombardează proba care emite fluorescență:
1.fotoionizarea atomului – produce un atom ionizat
2.Stabilizarea atomului ionizat – reemisia de energie = foton de fluorescență de raze
radiatia fluorescenta poate fi analizata prin:
-sortarea energiilor fotonilor
-separarea lungimilor de undă ale radiației.
spectroscopia de rezonanta magnettica nucleara(RMN)
-conduce la informații precise despre formula structurală, stereochimia și conformația moleculelor
-colectează informații despre interacțiunile dintre nucleele anumitor atomi din probă atunci când aceștia sunt supuși unui câmp magnetic static extern foarte puternic și unui câmp
magnetic oscilant de 10.000 de ori mai slab
-spectrul RMN este un grafic care prezintă semnale de rezonanță rezultate din absorbția unei anumite frecvențe de către eșantion
microscopul electronic
Folosește un fascicul de electroni în loc de un fascicul de lumină
Puterea de mărire → aproximativ 1.000.000 x
Rezoluție ∼ 0,002 nm (variabilă în funcție de tensiunea de
accelerare a electronilor, viteza lor)
microscopul electronic
Folosește un fascicul de electroni în loc de un fascicul de lumină
Puterea de mărire → aproximativ 1.000.000 x
Rezoluție ∼ 0,002 nm (variabilă în funcție de tensiunea de
accelerare a electronilor, viteza lor)
Microscopul electronic cu transmisie TEM
-detectează electronii transmiși (care trec )
prin probă
* Oferă detalii de înaltă rezoluție (∼ 0,2 nm)
Microscop electronic cu scanare SEM
-detectează electronii reflectați din probă
* Oferă detalii despre suprafața probei analizate dar
prezinta o rezolutie mai slaba (~50 nm)
Suprafața probei este iradiată cu un fascicul de electroni îngust, care poate fi trecut (linie cu linie) peste suprafața probei pentru a forma mai multe imagini.
Imaginea probei este construită din electronii respinși de suprafața probei și colectați de un dispozitiv de detectare a electronilor.
Microscopul electronic cu scanare poate fi comparat cu un microscop optic.
SEM oferă imagini tridimensionale ale suprafețelor celulelor, țesuturilor, diferitelor organisme.
Interacțiunea fasciculului de electroni se realizează cu o probă acoperită cu un strat subțire de metal (pentru stabilitate și contrast)
microscopul electronic-formare
Microscopul electronic este format dintr-un cilindru cu vid în care electronii extrași dintr-un filament (de obicei tungsten) sunt accelerați prin aplicarea unei tensiuni de accelerație de ordinul a sute de mii de volți.
Folosește un fascicul de electroni în loc de un fascicul de lumină
O serie de lentile opto-electronice concentrează fasciculul de electroni care trece prin eșantion și este vizualizat pe un ecran fluorescent sau preluat de un detector electronic
Puterea de mărire și rezoluția depind de viteza de accelerare a electronilor din incinta cu vid a ME
ce genereaza TEM
Tipurile de semnal produse de interacțiunea fasciculului cu proba
- electroni secundari,
- electroni reflectați,
- razele X caracteristice probei (care generează informații despre topografie, cristalografie, compoziția probei).
ce genereaza SEM
Când electronii primari au impact la suprafață, ei generează:
-electroni secundari
-electroni retroîmprăștiați,
-Electroni Auger,
-Fotoni cu raze X
-catodeluminiscenţă.
