Maturação Linfocitária T e B Flashcards
Processo através do qual os linfócitos progenitores no timo e na medula óssea diferenciam em linfócitos maturos que populam os tecidos linfóides periféricos.
Maturação
Tipos de células B
Foliculares
Zona Marginal
B-1
Tipos de linfócitos T alfa beta
CD4+ e CD8+
Tipos de linfócitos T não alfa beta
NKT
Gamma delta
O que vem primeiro? O pré-linfócito ou o pró-linfócito?
O pró-linfócito é mais precoce
Que tipo de células B são geradas no fígado fetal?
Células B-1
Quais são as células B mais produzidas na medula óssea
Foliculares (+++) - circulantes
Zona marginal
Que tipo de linfócitos T são mais produzidos no fígado fetal?
Linfócitos T gamma delta
Que sinais é que um progenitor linfóide comum pode receber para seguir a via Pro-B?
EBF
E2A
Pax5
Que estímulos é que uma célula T pode receber para se diferenciar em célula linfóide inata?
Id2
Que estímulos é que uma percursora pode receber para se diferenciar em Pro-T?
Notch 1
GATA3
Em células alfa beta T em maturação, qual é o gene do TCR primeiramente disponível?
Locus Beta
As Rag-1 e Rag-2 são essenciais ao desenvolvimento de que linhagem?
Linfócitos B.
A IL-7 é importante na proliferação de que células?
Progenitoras de células T
Quem produz IL7?
Células estromais da medula.
Células epiteliais
Outras células do timo
Qual é a origem da imunodeficiência combinada severa ligada ao X? (X-SCID)
Mutações na cadeia gamma comum, uma proteína utilizada pelos recetores de IL2, IL7 e IL15
O que acontece na imunodeficiência combinada severa ligada ao X? (X-SCID)
Bloqueio no desenvolvimento de células T e NK, mas não na célula B.
A IL-15 é particularmente importante para o desenvolvimento de que célula do sistema imune?
NK
Quando é que ocorre o maior momento de proliferação de uma célula T ou B em desenvolvimento?
Quando já tem a recombinação dos genes codificantes de uma das cadeias do recetor T ou B.
(os sinais gerados por pré-recetores de antigénios são mais fortes do que os das citocinas como IL7)
Que fenómenos estão por trás da diferenciação CD4 vs CD8 na linhagem T alfa beta?
Epigenética. O gene CD4 fica inacessível na linhagem CD8
A deleção do Dicer (importante na génese de miRNA) resulta em que distúrbio da linhagem T?
Perda de células Treg
Qual é o distúrbio da linhagem B que acontece na deleção do Dicer?
Bloquei na transição pró-B a pré-B por estimulação da apoptose em pré-B
Qual é que é a chave da geração do reportório diverso dos linfócitos?
A recombinação dos genes recetores de antigénios.
Como é que os fenómenos de recombinação de DNA nos genes de recetores de antigénios são influenciados pela presença de antigénios?
Não são. Os diversos recetores de antigénios são gerados e expressos ANTES do contacto com antigénios.
Os recetores de antigénios (e os próprios pré-recetores) têm um papel para além de reconhecer antigénios ligados a MHCs. Qual é esse papel?
Durante a maturação linfocitária, os recetores de antigénios dão sinais de sobrevivência e maturação aos linfócitos.
Qual é o primeiro checkpoint da maturação linfocitária?
Expressão de uma cadeia de recetor de antigénio (pré-recetor)
Qual é o segundo checkpoint da maturação linfocitária?
Expressão do recetor de antigénio completo.
Qual é o terceiro checkpoint da maturação linfocitária?
Seleção positiva e negativa
Que cadeia contém o pré-TCR?
TCR beta
Que cadeia contém o pré-BCR?
Cadeia pesada Ig u
Como é que ocorre a recombinação dos recetores de antigénios?
Quando começam a ser expressas as cadeias dos recetores de antigénios, há fenómenos de de adição e remoção de bases aleatorizadas, com junção de segmentos de DNA no locus, para maximizar a variabilidade entre recetores.
Nas células B em maturação, qual é o primeiro gene a sofrer recombinação?
IgH (cadeia pesada de imunoglobulina) - futura IgM
O que acontece se o processo de recombinação da TCR beta ou da Ig u acontecer “out-of-frame”?
Uma recombinação out-of-frame significa que aconteceu fora dos codões com capacidade de transcrição. Estas células não expressam o pré-recetor membranar, não recebem sinais de sobrevida e morrem por apoptose.
O que acontece a uma célula imatura que já expressa um recetor de antigénios completo, mas que reconhece fortemente antigénios “self”?
Tem duas hipóteses:
Morre por apoptose
OU
Alteram os recetores de antigénios (só em algumas células B)
Processo que facilita a sobrevivência de células linfóides potencialmente úteis.
Seleção POSITIVA
Na linhagem T, a seleção positiva garante a seleção de células T que…
Reconhecem recetores MHC self.
As células T maturas reconhecem antigénios apresentados por células com MHC self.
Na linhagem B, a seleção positiva preserva…
Células que expressam recetores BCR
Processo que elimina ou altera linfócitos em desenvolvimento cujo recetores ligam-se fortemente a antigénios do self presentes em órgãos linfóides primários.
Seleção NEGATIVA
Fenómeno que elimina por apoptosecélulas T em desenvolvimento com grande afinidade para antigénios self.
DELEÇÃO CLONAL
Fenómeno que permite que células B imaturas façam novas recombinações do gene Ig para evadir a reactividade ao self.
RECEPTOR EDITING
Se falhar, a célula B entra também em deleção clonal, como uma célula T self-reativa.
O que significa recombinação V(D)J?
Recombination of different Variable region gene segments with Diversity and Joining gene segments
Quantos loci estão responsáveis pelo codificação de todas as cadeias pesadas de Ig, pela cadeia kappa e pela cadeia lambda?
3, cada um em diferentes cromossomas.
Onde estão presentes os genes variáveis (V), nos loci Ig?
Na extremidade 5’ de cada locus Ig
Onde estão presentes os genes D (diversity) nos loci de Ig?
Entre os genes V (a 5’) e os J (a 3’)
O locus da cadeia leve kappa tem quantos genes C?
1.
O locus da cadeia leve lambda tem quantos genes C?
4.
O locus da cadeia pesada de Ig tem quantos genes C?
9.
Nas cadeias leves de Ig, quais são os segmentos (VDJ) que codificam as regiões variáveis?
V e J
Na cadeia pesada de Ig, quais são os segmentos (VDJ) que codificam as regiões variáveis?
V, D e J
Em que cromossoma está a cadeia pesada de Ig?
14
Qual cromossoma codifica a cadeia kappa?
2
Qual cromossoma codifica a cadeia lambda?
22
A que corresponde o CDR3 na cadeia pesada?
O CDR3 é uma região determinante de complementaridade, que, na cadeia pesada, corresponde ao segmento D e J, assim como os segmentos de transição entre o V e o D e entre o D e o J.
A que corresponde o CDR3 na cadeia leve?
O segmento entre o J e o V, assim como o próprio J.
Onde estão o CDR1 e CDR2?
No meio do próprio segmento V, tanto nas cadeias pesadas como leves.
No TCR, os segmentos D estão presentes em que loci?
Da cadeia beta e delta
Em cada linfócito, quantos genes V, D e J são selecionados?
Um V, um D e um J, que vão formar uma região variável.
Em que regiões variáveis dos recetores de antigénios não existem segmentos D?
Na cadeia leve de Ig e no TCR alfa e gamma
Nas cadeias com segmentos V, D e J, em que ocorre junção dos três segmentos, distinguem-se duas etapas sequenciais. Quais são?
1º - Junção D+J
2º - Junção V+DJ
Como é que os loci de Ig ou TCR podem estar envolvidos na promoção de oncogenes em contexto tumoral?
Nos linfomas, as regiões de codificação TCR e Ig, por serem regiões normalmente expostas, são alvo de translocação de oncogenes, que, muitas vezes, se aproveitam de enhancers codificados nestes loci.
Quais são os 4 eventos sequenciais da recombinação V(D)J?
1 - Sinapse
2 - Clivagem
3 - Abertura hairpin e end-processing
4 - Joining
Porções do cromossoma onde o gene do recetor de antigénios tornam-se acessíveis à maquinaria de recombinação. Dois segmentos codificantes são cruzados em looping. Que fase de recombinação VDJ é esta?
Sinapse (1ª)
A VDJ recombinase é o complexo enzimático responsável pela clivagem do DNA na recombinação VDJ. Quais são as enzimas que constituem esse complexo?
RAG1 e RAG2, ligam-se aos RSSs e clivam, deixando um hairpin em cada lado
Como é que se garante que um linfócito em proliferação não sofre recombinação VDJ na fase S?
Não se garante, mas as RAG são genes apenas expressos em células B e T em desenvolvimento. As proteínas são expressas em G0 e G1 e depois inativadas em células proliferativas. Isto reduz a possibilidade de quebras de DNA comprometedoras durante a replicação de DNA
Qual é terceira fase da recombinação VDJ?
Hairpin opening and end-processing
Qual é a enzima chave da 3ª fase da recombinação VDJ?
Artemis - endonuclease que abre os hairpins deixados pela VDJ recombinase na segunda fase.
O último passo de recombinação VDJ é o Joining. Qual é o processo de reparação de DNA inerente a este fenómeno?
Nonhomologous end joining.
Nucleótidos P
Pequenas sequências de nucleótidos adicionadas a uma cadeia (VDJ) após a clivagem assimétrica da Artemis, no processo de joining, a partir do modelo da outra cadeia de DNA.
Nucleótidos N
Sequências de nucleótidos adicionadas a uma cadeia (VDJ) no processo de joining, sem relação com um molde.
Qual é a região dos recetores de antigénios com maior variabilidade?
CDR3 (entre V-D, D-J, e os próprios D e J)
Como é que se estuda a clonalidade de uma população linfóide?
Mede-se ou sequencia-se a região CDR3, uma vez que cada clone de linfócitos tem uma região CDR3 específica e própria.
Quando uma célula B imatura migra para fora da medula óssea (principalmente para o baço), que Ig expressa?
IgM
Quando uma célula B se diferncia em folicular e migra para os folículos, que Ig expressa?
IgM e IgD
Quanto tempo demora uma célula B matura a diferenciar-se desde as células progenitoras?
2 a 3 dias.
Em que fases da maturação B é que o linfócito prolifera?
Entre o estadio estaminal e o Pro-B e entre o estadio Pre-B e Imatura
O que é que uma célula Pré-B não tem que uma célula imatura B já tem ao nível do BCR?
Cadeias leves recombinadas
CD43+
CD19+
CD10+
Pro-B cell
B220
CD43+
Pre-B cell
Qual é a seleção (positiva ou negativa) que mais tem efeito na seleção de linfócitos B?
Negativa.
A recombinação VDJ acontece primeiro na cadeia pesada Ig ou nas leves?
Na pesada.
Enzima responsável pelos nucleótidos N.
TdT
Por que motivo a recombinação com TdT é mais notável na cadeia pesada que na leve das Igs?
Porque a TdT está mais expressa na fase de Pro-B, que é quando as cadeias pesadas estão a ser recombinadas.
O que compõe o pré-BCR?
A cadeia pesada já recombinada (IgM)
Cadeias leves “surrogate”, de substituição
IgAlfa e IgBeta (transdutoras de sinal)
Qual a diferença entre as cadeias leves surrogate e as definitivas?
As cadeias leves surrogate (lambda5 e V) são invariáveis, sendo iguais em todas as células pre-B.
o que compõe o BCR definitivo?
A IgM completamente recombinada e as cadeias IgBeta e IgAlfa
Qual é o papel da pre-BCR?
Sinalizar a proliferação de células B em maturação.
Qual é a proteína crucial na transdução do sinal da pré-BCR downstream?
Tirosina Cinase de Bruton (Btk)
A mutação no gene da Tirosina Cinase de Bruton está na génese de uma doença. Qual é essa doença?
Agammaglobulinemia ligada ao X
Falha da maturação B
O que é uma recombinação somática (VDJ) non-productive?
No processo de recombinação, insere-se um codão terminal, que culmina num recetor não funcionante.
Se uma recombinação somática numa célula B for non-productive para uma cadeia pesada, o que acontece?
O outro alelo da cadeia pesada é utilizado para tentar uma recombinação produtiva no locus IgH.
Quando se consegue à primeira, o outro alelo é reprimido.
Como se denomina o fenómeno pelo qual uma célula B expressa uma cadeia pesada de Ig de apenasum dos dois alelos herdados?
Exclusão alélica - a célula B expressa 1 único recetor!
O que acontece a uma célula que não consegue ter uma recombinação IgH produtiva?
Não forma pre-BCR, não recebe os sinais de sobrevivência e morre por apoptose
Qual é a enzima chave no processo de exclusão alélica?
Recombinase VDJ
Quais são as funções do recetor pré-B?
Exclusão alélica IgH
Proliferação pre-B
Estimulação da recombinação kappa
Inibição da transcrição de cadeias leves surrogate
Quais são as funções do recetor Pré-T?
Inibição da recombinação beta Proliferação de pré-Ts Estimulação da recombinação da cadeia alfa Expressão CD4 e CD8 Shut off da pTalfa
Qual é a primeira cadeia leve na célula B a ser recombinada?
Kappa
Se a recombinação kappa for “nonproductive”, o que acontece à célula B?
Tenta a recombinação lambda.
A recombinação lambda acontece principalmente quando a recombinação kappa resulta em Igs self-reactive.
O que é que a célula B imatura tem que a faz considerar já uma célula imatura, ao invés de pré-B?
IgM completa.
Quantas recombinações kappa e lambda podem ser tentadas?
1 kappa 4 lambda (existem 4 exões possíveis)
Processo através do qual apenas um dos genes das cadeias leves é expresso na célula B, com exclusão d o outro alelo.
Exclusão isotípica da cadeia leve.
Como é que o reconhecimento de antigénios influencia a proliferação de células B em maturação?
Negativamente. A proliferação destas células B acontece por estimulação do BCR independente de antigénios. O reconhecimento de antigénios na medula óssea leva ao receptor editing ou à apoptose.
Quais são as moléculas associadas ao IgM no BCR?
IgAlfa e IgBeta
Qual é a origem das células B-1?
Fígado fetal
Assumindo que uma célula B em maturação não é demasiado reativa ao self, como é que a sua reatividade define o seu futuro?
A afinidade dos recetores BCR na medula óssea para antigénios self ajuda a definir se a célula vai diferenciar-se em célula B folicular ou em célula B da zona marginal.
O que é que é caraterístico do fenótipo das células B foliculares, face às B-1 e da zona marginal?
As foliculares expressam IgM e IgD
Quantas regiões variáveis expressa um linfócito B folicular, com IgM e IgD?
- O domínio variável das cadeias pesadas e leves são o mesmo na IgM e na IgD, o que muda é a cadeia C.
IgM+
IgD+
Célula B matura
Principais citocinas que transmitem sinais de sobrevivência nos folículos às células B.
BAFF e BLyS
O que acontece a uma célula B naive que não chega a encontrar um antigénio a que se ligue com alta afinidade?
Morre em alguns meses.
IgM
CD5+
Célula B-1
Ou outras células transicionais da linhagem B
Onde é que encontramos células B-1?
Peritoneu
Mucosas
Qual é a função B-1?
Secreção espontânea de IgM (no peritoneu) e de IgA (na lâmina própria)
Os domínios V são de variabilidade reduzida, sendo estas células análogas às T gamma delta.
Recetor para C3d
Forma complexo com CD19 e CD81
Recetor do EBV
CD21 / CR2
Qual é a função dos linfócitos B de zona marginal?
Responder rápido aos microrganismos no sangue.
Que Igs são segregadas pelos linfócitos B de zona marginal?
IgM
O que acontece se o editing de BCR falhar?
A célula continua a reconhecer antigénios self e morre de apoptose - SELEÇÃO NEGATIVA
Quando uma célula B matura liga-se a um antigénio com alta afinidade, o que acontece?
Proliferação e diferenciação.
Síndrome caracterizado pela ausência congénita de timo
Síndrome de DiGeorge
Células T em desenvolvimento no timo chamam-se…
Timócitos
No timo, onde estão os linfócitos T mais desenvolvidos e os menos desenvolvidos?
Os menos desenvolvidos são mais corticais e os mais desenvolvidos são medulares
Por onde saem os linfócitos T CD4 ou CD8 maduros do timo?
Medula
CCR9
Recetor de quimocinas CCL25, produzidas no cortex do Timo.
Expresso nos progenitores de timócitos.
Dupla de quimocina/recetor que é crucial na migração de precursores de células T para o timo.
CCL25 / CCR9
Dupla de quimocina/recetor que é crucial para o movimento cortico-medular dos linfócitos T durante a sua maturação no timo
CCL19 e CCL21 para o CCR7
Sphingosine 1-Phosphate (S1P)
substância quimoatrativa lipídica que está envolvida na saída de Linfócitos T Naive dos gânglios linfáticos, através do seu recetor Sphingosine 1-Phosphate Receptor 1 (S1PR1)
Por que motivo é que 95% dos timócitos morrem ao longo do seu curso cortico-medular?
Recombinação TCR beta nonproductive
Falência de reconhecimento MHC self (seleção positiva)
Sobre-reconhecimento de antigénios self (seleção negativa)
IL extremamente importante como factor de crescimento linfopoioético
IL7
Qual é a ordem cortico-medular tímica dos estadios de células T?
Célula estaminal (também óssea) Pro-T Pre-T Dupla positiva Single positive / T imatura T matura (também periférica)
Em que momentos da maturação T é que existe proliferação?
No estadio stem cell - Pro-T e no estadia Pre-T
Em que momentos da maturação T há expressão RAG?
Quando há recombinação dos recetores TCR, em Pro/PreT e em “double positive”
O que é que a Pre-T tem que a Pro-T não tem?
Recombinação somática da cadeia beta . Expressa um Pré-TCR com uma cadeia beta e uma pre-Talfa.
A partir de que estadios é que as células T passam a expressar TCR completo na membrana?
Double positive
c-kit+
CD44+
CD25-
Stem cell T
c-kit +
CD44+
CD25+
Pro-T
C-kit+
CD44-
CD25+
Pre-T
Cd4+
CD8+
CD3
Double positive
CD4+ CD8- ou CD4- CD8+ com muito CD3
Single positive (imatura) ou T cell matura
Timócitos double-negative
Pro-T
Quantos segmentos Dbeta existem na recombinação de TCR beta?
- Podem ligar-se a um dos seis segmentos Jbeta.
Quantos segmentos Jbeta existem no locus TCR beta?
- Um deles liga-se a um dos dois segmentos Dbeta.
A recombinação Vbeta-to-DJbeta marca uma transição na maturação T. Qual é essa transição?
Pro-T para Pre-T.
Quantos genes Cbeta existem para o TCR?
- São equivalentes.
Em que linfócitos periféricos está presente o CD4+? (2)
Helper
Reguladores
O que compõe um pré-TCR?
Cadeia beta recombinada, proteína pre-Talfa (invariante), CD3 e proteínas zeta
Qual é a grande diferença entre a recombinação somática da cadeia beta do TCR e da cadeia alfa do TCR?
Na recombinação alfa, não há segmentos D.
Quais são as funções do recetor Pre-TCR?
Inibição da recombinação beta Proliferação de pré-T cells Estimulação da recombinação alfa Expressão de CD4 e CD8 Shut off da cadeia pT alfa.
Lck
Proteína downstream do TCR
O que têm os timócitos “double-positive” de diferente?
Expressam CD4 e CD8
Em que fase é que ocorre a recombinação alfa no timócito?
Double-positive
Uma determinada célula T expressa TCRs todos iguais?
Não. Não existe exclusão alélica alfa no TCR. (é diferente do BCR)
A cadeia beta é sempre a mesma.
O que acontece ao locus TCR delta, depois de acontecer recombinação TCR alfa?
É deletado. Depois de existir recombinação TCR alfa, forma-se o recetor TCR definitivo, sendo que fica impossível a célula seguir diferenciação gamma delta. A partir daqui, é garantido que a célula será alfa beta.
CD40 ligando é uma molécula do…
Linfócito CD4 Helper (molécula efetora). Esta molécula permite a ativação de linfócitos B, células dendríticas e macrófagos pelos linfócitos T.
Processo pelo qual se preservam células T que reconhecem self MHC (com antigénios self) com avidez baixa.
Seleção positiva
Qual é o critério para diferenciação CD4 vs CD8?
As células reconhecem MHC II ou MHC I?
Processo através do qual os timócitos cujo TCRs ligam-se fortemente a antigénios self apresentados por MHC self são deletados.
Seleção negativa
Define “apoptose por negligência” no contexto de maturação T.
As células que não reconhecem MHCs no timo não recebem sinais de sobrevivência e seguem uma via padrão de apoptose. É um processo de seleção positiva.
Uma célula reconhece um MHC I no timo e pode:
1 - diferenciar-se em CD8 e sobreviver com o correcetor apropriado
2 - diferenciar-se em CD4 com o correcetor errado e morrer por não conseguir receber sinais.
Esta diferenciação acontece ao acaso.
Qual é o modelo?
Estocástico ou probabilístico (aleatório)
Modelo que sugere que a exposição a MHC I ou MHC II no timo sinaliza a célula para diferenciação CD4 (se MHC II), com estimulação do correcetor adequado, ou CD8 (se MHC I), com a estimulação do correcetor de CD8
Modelo instrutivo.
Qual é o factor de transcrição downstream muito ligada à manutenção do fenótipo CD8 na maturação dos linfócitos T?
Runx3
Qual é o factor de transcrição downstream muito ligada à manutenção do fenótipo CD4 na maturação dos linfócitos T?
GATA3
ThPoK
Repressor induzido pelo GATA3 que impede a expressão de genes importantes para diferenciação CD8
Quais são os dois possíveis destinos de uma célula T em maturação que reconhece com avidez os antigénios do self no timo?
Apoptose (seleção negativa)
Treg
Onde ocorre a deleção de linfócitos T self reactive?
No cortex, em células double-positive e na medula em células single-positive.
Quais são as células do timo que medeiam a seleção negativa?
Células dendríticas e macrófagos, assim como células epiteliais abundantes na medula do timo.
Quais são as células do timo que medeiam seleção positiva?
Células epiteliais do timo cortical.
Quem é que expressa o AIRE? (autoimmune regulator)
Células epiteliais medulares tímicas. É uma proteína nuclear.
Como é que as células do timo conseguem expor os linfócitos em maturação a tantos antigénios de tantos tecidos diferentes?
O AIRE das células epiteliais tímicas permite a expressão de muitos péptidos específicos de tecidos que podem ser apresentados às células T, ajudando no processo de seleção negativa.
O que acontece se existir uma mutação no gene AIRE?
Um síndrome autoimune poliendócrino.
Nos linfócitos T, a seleção negativa é um processo ativo, ao contrário do que acontece na seleção positiva, em que existe death by neglect. Qual é a proteína muito importante para a indução da morte por seleção negativa?
Bim, pró-apoptótica.
Qual é a percentagem de linfócitos T gamma delta formados a partir de de double negative?
10%, contra 90% dos alfa beta.
Qual é o recetor das células estaminais esssencial à maturação T?
Recetor Notch
Recetor de IL2
CD25
O TCF está envolvido na…
Sinalização do préTCR
O LKLF e o Th-Pok são essenciais para…
Desenvolvimento CD4 a partir dos double positive
Como se denomina a exclusão das cadeias leves na maturação de linfócitos B?
Exclusão isotípica
A estimulação de uma célula B com IL2, IL4 e IL5 promove a produção de…
IgM
A estimulação de uma célula B com IL4 promove a produção de…
IgE ou IgG1
A estimulação de uma célula B com TGF-Beta promove a produção de
IgA ou IgG2b
A estimulação de uma célula B com IFN-gamma, promove a produção de…
IgG2a ou IgG3
